El microscopio (página 2)

La resolución de un microscopio óptico se
define como la distancia más corta entre dos puntos en un
espécimen que se pueda todavía distinguir por el
observador o el sistema de la cámara fotográfica
como entidades separadas. La resolución es un valor algo
subjetivo en microscopia óptica porque en la alta
ampliación, una imagen se puede aparecer unsharp pero
todavía resolver a la capacidad máxima del
objetivo. La abertura numérica determina la energía
de resolución de un objetivo, pero la resolución
total del tren óptico del microscopio entero es
también dependiente sobre la abertura numérica del
condensador del substage. Cuanto más alta es la abertura
numérica del sistema total, mejor es la
resolución.

5.4.- CAMPO VISUAL

El diámetro del campo en un microscopio
óptico es expresado por el número del campo visual
, o simplemente el número del campo, que es
el diámetro del campo de la visión en los
milímetros medidos en el plano de imagen intermedio. En la
mayoría de los casos, el diámetro de la abertura
del diafragma del campo del ocular determina el tamaño de
campo de la visión. El tamaño de campo en el plano
del espécimen entonces se define como el número del
campo dividido por la ampliación del objetivo :

Ampliación objetiva del
÷ del tamaño de campo = del número del
campo

(fn) (M o)

Si una lente auxiliar se inserta entre el objetivo y el
ocular, el factor de la ampliación de esta lente se debe
también emplear en la ecuación por la
multiplicación con la ampliación objetiva (antes de
la operación de la división). Aunque el
número del campo es limitado generalmente por el
tamaño del diafragma de la ampliación y del
campo (parada) del ocular, hay claramente un límite
que también es impuesto por el diseño del sistema
objetivo de la lente.

6.- MANEJO DEL
MICROSCOPIO OPTICO Y MANTENIMIENTO

6.1.- MANEJO DEL MICROSCOPIO
OPTICO

En el correcto empleo del microscopio
óptico, se deben de seguir las siguientes
pautas

Colocar el objetivo de menor aumento en posición
de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se
recogió correctamente en el uso anterior, ya
debería estar en esas condiciones.

Colocar la preparación sobre la platina
sujetándola con las pinzas metálicas.

Comenzar la observación con el
objetivo de 4x (ya está en posición) o
colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de
bacterias.

Para realizar el enfoque:

Ø Acercar al máximo la lente del objetivo
a la preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no
a través del ocular, ya que se corre el riesgo de
incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose
dañar alguno de ellos o ambos.

Ø Mirando, ahora sí, a través de
los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se
observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería
estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco
el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar
de objetivo se perdió por completo la imagen, es
preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la
operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy
poca distancia de la preparación y por ello es
fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en
la preparación si se descuidan las precauciones anteriores
y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una
preparación que ya se enfocó con el objetivo de
inmersión.

Empleo del objetivo de
inmersión:

Ø Bajar totalmente la
platina.

Ø Subir totalmente el condensador para ver
claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se
va a visualizar y donde habrá que echar el
aceite.

Ø Girar el revólver hacia el objetivo de
inmersión dejándolo a medio camino entre
éste y el de x40.

Ø Colocar una gota mínima de
aceite de inmersión sobre el círculo de
luz.

Ø Terminar de girar suavemente el revólver
hasta la posición del objetivo de
inmersión.

Ø Mirando directamente al objetivo, subir la
platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En
ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la
lente.

Ø Enfocar cuidadosamente con el
micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersión y la preparación es mínima, aun
menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy
grande.

Ø Una vez se haya puesto aceite de
inmersión sobre la preparación, ya no se puede
volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se
mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro
campo, hay que bajar la platina y repetir la operación
desde el paso 3.

Ø Una vez finalizada la observación de la
preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de
menor aumento girando el revólver. En este momento ya se
puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe
retirar con el objetivo de inmersión en posición de
observación.

Ø Limpiar el objetivo de inmersión con
cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar
también que el objetivo 40x está perfectamente
limpio.

6.2.- MANTENIMIENTO

Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el
objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de
la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto
con su funda.

Cuando no se está utilizando el microscopio, hay
que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien
y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma
prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para
protegerlo del polvo.

Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se
ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o,
mejor, con un papel de óptica.

No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no
se está utilizando el microscopio.

Después de utilizar el objetivo de
inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para
óptica o con papel de filtro (menos recomendable).
En cualquier caso se pasará el papel por la
lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado
a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay
que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su
sujeción.

No forzar nunca los tornillos giratorios
del microscopio (macrométrico,
micrométrico, platina, revólver y
condensador).

El cambio de objetivo se hace girando el
revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la
muestra. No cambiar nunca de objetivo
agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo
mientras se está observando a través del
ocular.

Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se
derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un
paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con
un paño humedecido en xilol.

Es conveniente limpiar y revisar siempre los
microscopios al finalizar la sesión práctica y, al
acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y
revisión general de los mismos.

Autor:

Cliffor Jerry Herrera Castrillo