Uso del edulcorante comercial de Stevia en plántulas micropropagadas
el CAPITULO I INTRODUCCIÓN 1.1 CONTEXTO La presente
investigación se llevó a cabo en la Escuela
Agrotécnica Nro. 1 “Nicolás Repetto” de
Laguna de los Padres – Mar del Plata – Provincia de Buenos Aires–
Argentina. La ciudad está ubicada en el sudeste bonaerense
y tiene un clima oceánico, templado, con inviernos
fríos. En la mencionada Escuela se encuentra una Unidad de
Propagación Acelerada de especies vegetales con
interés alimentario y no alimentario para la
población en situación de vulnerabilidad social, en
el marco del Convenio de Cooperación entre el Instituto
Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA)-Programa Pro
Huerta y la Escuela Agrotécnica. El INTA (a través
del Programa Pro Huerta) provee asistencia técnica
formación y transferencia de tecnología a
pequeños productores, agricultores familiares, centros
comunitarios, escolares y penales, buscando la inserción
social y favoreciendo la especialización laboral de
jóvenes y trabajadores rurales; promoviendo las huertas
familiares agroecológicas, la innovación en los
procesos organizativos y el fortalecimiento del capital social
para la seguridad alimentaria, como así también
fomentar la diversidad predial incluyendo especies
aromáticas y medicinales (POA, 2011). La Escuela recibe la
capacitación del alumnado en la Técnica de
Multiplicación Acelerada, y dentro del marco de calidad
educativa, desarrollo de actividades pedagógicas que
permitan fortalecer los conocimientos allí brindados tanto
en lo técnico como en lo organizativo. 8
1.2 – DESCRIPCIÓN DEL PROBLEMA En la Unidad de
Propagación Acelerada, hasta el momento, se está
trabajando con las siguientes especies vegetales: – Stevia
rebaudiana (yerba dulce o Kaá Heé) – Thymus
vulgaris (tomillo), – Origanum vulgare L. (orégano) –
Artemisia dracunculus (estragón) – Salvia officinalis
(salvia) Las especies propagadas deben llegar a la
población objetivo en óptimas condiciones de vigor,
sanidad y adaptación, y que a la vez la Escuela obtenga un
excedente de plantas como un recurso económico. Mediante
la Técnica de Multiplicación Acelerada (TMA) se
obtienen rápidamente gran cantidad de plántulas en
todas las especies, los tiempos difieren según la especie
a propagar y en general no hay problemas sanitarios. Ésta
técnica lleva mediante un proceso en condiciones
controladas, a los esquejes de plantas adultas a un estado de
juvenilidad, una vez logrado esto, comienza la propagación
hasta obtener la cantidad de plántulas deseadas. Luego se
las lleva nuevamente a un estado adulto mediante la
rusticación para luego ser distribuidas. 1.3
Hipótesis de Trabajo Una vez que las plántulas
tienen los cortes necesarios o se ven envejecidas, las mismas se
trasplantan en bandejas con turba u otro sustrato que se elija.
El proceso normal sería llevar las bandejas a un
invernáculo con control de temperatura, protegido del
viento y con suplemento de luz (en lo posible). Muchas especies
soportan lo contrario, pero la Stevia rebaudiana, al ser un
cultivo subtropical, no lo tolera, y por lo tanto se deben
acondicionar espacios cerrados, con luz y temperatura adecuada,
para llevar las bandejas y hacer el 9
seguimiento hasta que estén robustas y aclimatadas para
llevarlas al exterior. Aun así, el proceso no es tan
rápido y varias de las especies no se desarrollan lo
suficiente durante este período generando mortandad y
pérdidas por falta de vigor. Por lo tanto es importante
que las plántulas posean tallos gruesos, excelente
área foliar, vigor y un buen estado sanitario durante el
proceso de rusticación y antes de ser entregadas. Ante la
necesidad de solucionar o mejorar este problema surge la
hipótesis de que mediante la aplicación del
extracto comercial (edulcorante) de Stevia a los esquejes
micropropagados se podría aumentar la sobrevivencia, el
vigor y estimular la fotosíntesis, obteniendo mejor
calidad de plántulas. El trabajo de investigación
realizado por Sorol de Amarilla (1996), sobre el efecto del
esteviosidio en la germinación de semillas, basado en
trabajos de Katsumi et al. (1964) quien mediante pruebas
biológicas pudo comprobar el efecto del esteviosidio en la
estimulación del crecimiento y de Komai et al. (1985)
sobre el efecto giberélico del mismo dado que el
esteviosidio posee una molécula similar a las giberelinas,
resultó una base muy interesante para explorar y llevar a
cabo este trabajo. Con anterioridad, se pudo observar, (aunque no
medir), mayor vigor, área foliar y mejor crecimiento en
plántulas de varias especies que fueron micropropagadas,
y, en algunos casos, una recuperación total de
plántulas que estaban en malas condiciones (por diversas
causas), utilizando edulcorante de Stevia, en la solución
de riego, ante la imposibilidad de utilizar el extracto natural
tal como lo aconseja Alonso (2007). La Stevia rebaudiana es un
cultivo de zonas subtropicales y con condiciones
climáticas que no son las que existen en Sudeste
Bonaerense de Argentina donde se lleva a cabo la
investigación. Si bien el clima es templado, los inviernos
son muy fríos por lo cual no es zona productora. 10
Por lo tanto, es dificultoso y costoso el acceso al material
vegetal (hojas secas, tallos molidos y otros subproductos del
cultivo) para realizar el extracto natural de Stevia,
razón por lo cual se decide utilizar el edulcorante
(extracto acuoso comercial) para realizar el presente trabajo.
Éste es fácil de conseguir en el mercado, su costo
es (comparativamente) bajo y la concentración de
esteviosidio alta hace que puedan llevarse a cabo diluciones.
CAPITULO II OBJETIVOS 2.1- OBJETIVO PRINCIPAL En el presente
trabajo de investigación se llevarán a cabo varios
ensayos, con extracto líquido de uso doméstico,
(Stevia, marca comercial Dulri) para observar el efecto en los
esquejes micropropagados por el sistema TMA, encontrar la
concentración y el tratamiento adecuado y comparar el
vigor, crecimiento y cantidad de entrenudos de las
plántulas. Evaluar si el uso de edulcorante Stevia
comercial puede reemplazar al extracto natural de Stevia. 2.2
– OBJETIVOS SECUNDARIOS Continuar con ensayos utilizando el
edulcorante comercial: – Durante la rusticación, para
aumentar vigor y área foliar. – Para incrementar la
geminación de semillas. – Para el enraizamiento en los
estaqueros. El extracto natural de Stevia es utilizado en
agricultura como activador de raíces, desinfectante del
suelo, mejorador de los cultivos hortícolas y
frutícolas, pulverizando con el extracto de Stevia la
parte aérea se estimula el proceso fotosintético,
mejora las propiedades organolépticas, aumenta el 11
de contenido de azúcares y evita la oxidación post
cosecha, Real et al. (2012). Todo esto hace de este cultivo un
objetivo interesante para investigar y profundizar en otras
formas de utilización y a otras escalas. De acuerdo a los
resultados que se obtengan, sería una alternativa para los
pequeños agricultores y toda la población objetivo
de la región el uso, a pequeña escala, del
edulcorante comercial. CAPITULO III METODOLOGÍA Para
realizar la experiencia se eligió la especie Origanum
vulgare L. (orégano) ya que la misma es la que muestra
mayores problemas de vigor en la rusticación y durante el
proceso de propagación se presenta ahilada, tallos muy
delgados y frágiles y deficiente área foliar.
Aunque durante de la propagación se obtienen mucha
cantidad de plántulas en poco tiempo, la
rusticación es difícil y las pérdidas son
muchas durante el proceso, obteniendo además,
plántulas muy débiles, altas pero con hojas
pequeñas y poco desarrollo radicular. Los esquejes madres
fueron obtenidos del invernáculo de la Escuela a fines de
diciembre de 2012. Estos fueron plantados en cajitas de
polipropileno que contenían sustrato mezcla 25% turba y
75% vermiculita, fueron regados con solución nutritiva
hidropónica concentrada y se ubicaron al azar en
estanterías con luces fluorescentes de 40 W, a una
temperatura de 24°C/26°C y fotoperiodo de 16 horas luz.
Los mismos se multiplicaron durante dos meses en una primera
etapa y en una segunda etapa, cuando los esquejes tenían
una condición juvenil, se cortaron y plantaron nuevamente
del mismo modo, hasta obtener la cantidad de esquejes necesarios
para realizar el trabajo en el mes de abril de 2013. 12
Los esquejes apicales de estas plántulas fueron los
utilizados para los ensayos. Se realizaron 6 ensayos con 3
repeticiones y 6 controles, utilizando edulcorante de Stevia con
un concentrado de esteviosidio al 7% (como solución madre)
y realizando diluciones al 1%, 5%, 10%. Se trataron los esquejes
por Aspersión y por Inmersión. En la Tabla N°1,
muestra los materiales y las condiciones del ensayo. Tabla N°
1: Condiciones del ensayo Material Vegetal Contenedores Medio
Nutritivo Sustrato Stevia Dulri Tratamientos Inmersión/
Aspersión Condiciones de 360 esquejes apicales de Origanum
vulgare Cajitas plásticas descartables de tapa
transparente. Soluciones Hidropónicas a base de sales de
fertirriego (macro y micro nutrientes). Sin hormonas ni
reguladores de crecimiento. Se ajustó el pH a 6 25% Turba
– 75% Vermiculita Solución madre:
Concentración de Esteviosidio 7% (7mg/100ml) Temperatura
entre 24°C/26°C. Los contenedores se los ensayos ubicaron
al azar en estantería con tubos fluorescentes de 40W y con
un foto período de 16 horas de luz Los esquejes obtenidos
fueron tratados antes de la plantación con soluciones
diluidas del extracto edulcorante comercial con una
concentración de esteviosidio del 7% p/v, (7mg/100ml). Las
distintas concentraciones utilizadas en los tratamientos se
muestran en la Tabla n°2. Tabla N° 2: Concentraciones de
esteviosidio utilizado para los tratamientos Concentraciones
utilizadas T I 1% T II 5% T III 10% T IV 1% T V 5% T VI 10% 0,07
mg/100ml 0,35 mg/100ml 0,7 mg/100ml 0,07 mg/100ml 0,35 mg/100ml
0,7 mg/100ml 13
– – – Los esquejes apicales obtenidos de las plantas madres
fueron tratados por Aspersión y por Inmersión, la
Tabla N° 3 muestra los tratamientos. Tabla N° 3 –
Tratamientos realizados a los esquejes Tratamientos Realizados
Aspersión Inmersión Trat. I Trat. IV Trat. II Trat.
V Trat. III Trat. VI Se plantaron 20 esquejes por caja y se
tomaron datos a los 7 días, 15 días y 21
días de los siguientes parámetros: Cantidad
Promedio de Entrenudos Altura Promedio en Centímetros
Porcentaje de Supervivencia 3.1 – PROCEDIMIENTO Se cortaron los
esquejes apicales de las plántulas madres: Para los
tratamientos I, II y III fueron asperjados con solución de
esteviosidio procedente de la solución madre: al 1% para
el tratamiento I, al 5% para tratamiento II y al 10% para el
tratamiento III. Se dejaron escurrir unos segundos y se plantaron
20 esquejes por caja totalmente al azar, realizando bloques con
tres repeticiones y el testigo. Para los tratamientos IV, V y VI,
se sumergieron unos minutos en las soluciones mencionadas:
tratamiento IV al 1%, tratamiento V al 5% y tratamiento VI al
10%., se escurrieron y se plantaron a razón de 20 esquejes
por caja, totalmente al azar y en bloques por tratamiento con
tres repeticiones y el testigo. 14
CAPÍTULO IV RESULTADOS Y ANALISIS 4.1 – TRATAMIENTOS
POR ASPERSIÓN 7 DÍAS 4.1.1- Ilustraciones
Tratamiento I A los 7 días de plantados los esquejes, se
tomaron los primeros datos observando el comportamiento de los
que recibieron tratamientos y de los testigos. En las siguientes
Ilustraciones se pueden observar las plántulas a los 7
días. Ilustración N° 1: T I, Testigo
Ilustración N° 2: T I, R.1 Ilustración N°
3: T I, R.2 Ilustración N° 4: T I, R.3
4.1.2–Ilustraciones Tratamiento II 15
Ilustración N° 5: T II, Testigo Ilustración
N° 7: T II, R 2 4.1.3 – Ilustraciones Tratamiento III
Ilustración N° 9: T III, Testigo Ilustración
N° 6: T II, R 1 Ilustración N° 8: T II, R 3
Ilustración N° 10: T III, R 1 16
Ilustración N° 11: T III, R 2 Ilustración
N° 12: TIII, R3 4.2 – TRATAMIENTO POR INMERSIÓN
7 DÍAS 4.2.1- Ilustraciones Tratamiento IV
Ilustración N° 13: T IV, Testigo Ilustración
N° 15: T IV, R 2 Ilustración N° 14: T IV, R 1
Ilustración N° 16: T IV, R 3 17
4.2.2 – Ilustraciones Tratamiento V Ilustración N° 17:
T V, Testigo Ilustración N° 19: T V, R2 4.2.3 –
Ilustraciones Tratamiento VI Ilustración N° 21: TVI,
Testigo Ilustración N° 18: T V, R 1 Ilustración
N° 20: TV, R3 Ilustración N° 22: T VI, R 1
18
Ilustración N° 23: T VI, 2 Ilustración N°
24: T VI, R3 4.3 –OBSERVACIÓN VISUAL A LOS 7
DÍAS A los 7 días desde la plantación se
pudo observar que los esquejes tratados por Aspersión:
Tratamientos I, II y III, en relación con los tratados por
Inmersión: Tratamientos IV, V y VI, presentan: mayor
supervivencia, mayor vigor y crecimiento y mayor porcentaje de
enraizamiento. Sin embargo esto parece disminuir a medida que
aumenta la concentración de esteviosidio (tratamientos al
10%), tratamientos III por aspersión y tratamiento VI por
inmersión. En los tratamientos por inmersión ya se
observan pérdidas y pobre enraizamiento, salvo la
repetición 3 del tratamiento VI. 4.4 –TRATAMIENTOS
POR ASPERSIÓN-15 DÍAS 4.4.1 – Ilustraciones
Tratamiento I Ilustración N° 25: T I, Testigo
Ilustración N° 26: T I, R 1 19
Ilustración N° 27: T I, R 2 4.4.2 –Ilustraciones
Tratamiento II Ilustración N° 29: T II, Testigo
Ilustración N° 31: TII, R2 Ilustración N°
28: T I, R 3 Ilustración N° 30: T II, R 1
Ilustración N° 32: T II, R3 20
4.4.3– Ilustraciones Tratamiento III Ilustración
N° 33: TIII, Testigo Ilustración N° 35: T III, R 2
Ilustración N° 34: T III, R 1 Ilustración
N° 36: T III, R 3 4.5 – TRATAMIENTOS POR
INMERSIÓN 15 DÍAS 4.5.1– Ilustraciones
Tratamiento IV Ilustración N° 37: T IV, Testigo
Ilustración N° 38: T IV, R1 21
Ilustración N° 39: T IV, R 2 4.5.2
–Ilustraciones Tratamiento V Ilustración N° 41:
T V, Testigo Ilustración N° 43: TV, R 2
Ilustración N° 40: T IV, R 3 Ilustración N°
42: T V, R 1 Ilustración N° 44: T V, R 3 22
4.5.3 –Ilustraciones Tratamiento VI Ilustración
N° 45: TVI, Testigo Ilustración N° 47: T VI, R 2
Ilustración N° 46: T VI, R1 Ilustración N°
48: T VI, R 3 4.6 – OBSERVACIÓN VISUAL A LOS 15
DÍAS A los 15 días desde la plantación,
todas las plántulas habían enraizado. En los
tratamientos I, II, III, hubo en general, un mayor crecimiento,
cantidad de entrenudos y supervivencia. En el tratamiento III
(10% de esteviosidio) se pudo observar entrenudos más
largos pero en menor cantidad aunque en altura tal vez superaron
a los tratamientos I y II, incluso a los testigos. Pudo
observarse también, que a esta concentración de
esteviosidio, hubo una activación de las yemas axilares,
con brotes muy débiles y hojas más 23
pequeñas. Este efecto no es deseado para la TMA ya que son
necesarias una buena área foliar y tallos gruesos. En los
tratamientos por inmersión pudo observarse gran cantidad
de pérdidas, el porcentaje de supervivencia fue bajo, la
sanidad pobre y la calidad de las plántulas mala, este
efecto ya era notorio a los 7 días y se fue incrementando.
En algunas repeticiones hubo una pérdida total de
plántulas. 4.7 – TRATAMIENTOS POR ASPERSIÓN
21 DÍAS 4.7.1 –Ilustraciones Tratamiento I
Ilustración N° 49: T I, Testigo Ilustración
N° 51: T I, R 2 Ilustración N° 50: T I, R 1
Ilustración N° 52: T I, R3 24
4.7.2– Ilustraciones Tratamiento II Ilustración
N° 53: T II, Testigo Ilustración N° 55: T II, R 2
4.7.3 –Ilustraciones Tratamiento III Ilustración
N° 57: T III, Testigo Ilustración N° 54: T II, R 1
Ilustración N° 56: T II, R 3 Ilustración N°
58: T III, R1 25
Ilustración N° 59: T III, R2 Ilustración N°
60: T III, R 3 4.8– TRATAMIENTOS POR INMERSIÓN 21
DÍAS 4.8.1 –Ilustraciones Tratamiento IV
Ilustración N° 61: T IV, Testigo Ilustración
N° 62: T IV, R 1 Ilustración N° 63: T IV, R 3
NOTA: La caja del T.IV, repetición 2, fue descartada por
mortandad total de las plántulas. 26
4.8.2 –Ilustraciones Tratamiento V Ilustración
N° 64: T V, Testigo Ilustración N° 66: T V, R 2
4.8.3 – Ilustraciones Tratamiento VI Ilustración
N° 68: T VI, Testigo Ilustración N° 65: TV, R1
Ilustración N° 67: T V, R3 Ilustración N°
69: TVI, R1 27
En el Ilustración N° 70: T VI, R 2 Ilustración
N° 71: T VI, R 3 4.9 – OBSERVACIÓN VISUAL A LOS
21 DÍAS Una vez concluida la toma de datos a los 21
días de comenzado el ensayo, pudo observarse una mejor
respuesta en todos los tratamientos por aspersión. Casi
todas las repeticiones del tratamiento I y II, superaron a los
testigos en calidad de hojas (Ilustraciones N° 72 y N°
73, N° 74 y N° 75), altura y cantidad de entrenudos,
también mayor supervivencia. tratamiento III (10% de
esteviosidio) hubo más pérdidas de plántulas
y se incrementó la activación de las yemas
axilares, con brotes muy débiles y ahilados. Los
entrenudos en este tratamiento fueron más largos y
delgados. Las concentraciones menores incrementaron, visualmente,
la calidad de las plántulas, el tamaño de hojas y
aunque no se tomaron datos sobre cantidad y calidad de las
raíces, se observó un mejor desarrollo radicular en
comparación con los testigos. Esto puede verse a modo de
ejemplo, en las Ilustraciones N° 76 y N° 77.
Ilustración N° 72: hojas testigos, T.II
Ilustración N° 73: hojas, T.II 21 días 28
Ilustración N° 74: esquejes testigo Ilustración
N° 75: esquejes T.III, 21 días Ilustración
N° 76: desarrollo radicular de la caja testigo T.I 21
días Ilustración N° 77: desarrollo radicular
T.I, (R.2)- 21 días 29
cantidaddeentrenudos 0 En los tratamientos por inmersión:
T.IV, T.V y T.VI, se pudo ver una pobre respuesta a los
tratamientos, en todas las concentraciones de esteviosidio,
aunque la repetición 3 del tratamiento IV fue la que tuvo
mejor respuesta. Se debe mencionar que en todos los tratamientos
por inmersión los testigos también tuvieron muchas
pérdidas y mala calidad de plántulas. 4.10 –
GRAFICOS POR TRATAMIENTOS 4.10.1 – Análisis de los
resultados por Aspersión Los datos obtenidos en las tres
fechas fueron graficados por tratamientos y por concentraciones.
En el Gráfico N° 1 pueden verse los datos promedios de
cantidad de entrenudos, para los 7, 15, y 21 días en
tratamientos por aspersión. Los datos son promedios 60
plántulas por tratamiento. Gráfico N° 1
Entrenudos Promedios Tratamientos por Aspersión 100 80 60
40 20 T I 1% Asp T II 5% Asp TIII 10% As Testigos 7 días
15 días 21 días 29,33333333 50 78,33333333
33,33333333 55,33333333 80 27,33333333 49,66666667 86 32,33333333
47 71 A los 7 días y a los 15 días, el tratamiento
II, supera en cantidad de entrenudos a los testigos y a los
tratamientos I y III, pero a los 21 días el tratamiento
III supera a todos los tratamientos y testigos. Sin embargo,
visualmente, como ya se mencionó, la calidad de los
entrenudos en el T.III fue pobre, de hojas pequeñas y una
activación de las yemas axilares. 30
alturaencentímetros 0 Pareciera que a mayores
concentraciones de esteviosidio se rompiera la dominancia apical
y tuviera un efecto hormonal mayor. Esto también fue
observado por Sorol de Amarilla, (1996) quien determinó
también que una concentración alta de esteviosidio
tiene un efecto inhibidor. Al cabo de 21 días, todos los
tratamientos por aspersión superaron en cantidad de
entrenudos a los testigos. En el Gráfico N° 2, se
puede observar el crecimiento promedio en centímetros,
sobre 60 plántulas en los tratamientos por
aspersión. Gráfico N° 2 Altura Promedio
Tratamientos por Aspersión 160 140 120 100 80 60 40 20 T I
1% Asp T II 5% Asp T III 10% Asp Testigos 7 días 15
días 21 días 38,33333333 71,5 133,6666667
44,83333333 89,16666667 139,3333333 33,5 83 112,5 36,66666667
73,16666667 124,6666667 Los tratamientos I y II, superan en
altura a los testigos al cabo de 7 días, a los 15
días es más variable pero al finalizar el ensayo a
los 21 días estos tratamientos superaron en crecimiento
promedio a los testigos. El tratamiento III, fue el que tuvo
menor crecimiento promedio. En el Gráfico N° 3, se
puede observar el porcentaje de supervivencia promedio sobre 60
plántulas iniciales por tratamientos. 31
CantidaddePlantas cantidaddeentrenudos 0 Gráfico N° 3
Supervivencia Promedio Tratamientos por Aspersión 20,2 20
19,8 19,6 19,4 19,2 19 7 días 15 días 21
días T I 1% Asp 20 20 20 T II 5% Asp 20 20 20 T III 10%
Asp 19,66666667 19,33333333 19,33333333 Testigos 20 19,66666667
19,33333333 Los tratamientos I y II, superan al tratamiento III y
a los testigos con una tasa de supervivencia del 100%. 4.10.2
– Análisis de los resultados por Inmersión En
el Gráfico N° 4, se puede ver la cantidad de
entrenudos promedio en los tratamientos por inmersión.
Gráfico N°4 Entrenudos Promedio Tratamientos por
Inmersión 40 35 30 25 20 15 10 5 T IV 1% Inm T V 5% Inm T
VI 10% Inm Testigos 7 días 15 días 21 días
15 22 34,66666667 9,666666667 15 21,66666667 15 26 37 8,333333333
17,66666667 28,33333333 32
alturaencentímetros 0 Aunque, como se mencionó,
visualmente los tratamientos por inmersión no dieron
buenos resultados, los tres tratamientos, IV, V y VI, superaron
en cantidad promedio de entrenudos a los testigos. Al cabo de 21
días, el T.VI obtuvo mayor cantidad. En el Gráfico
N° 5, se muestra el crecimiento promedio en
centímetros, de 60 plántulas, en los tratamientos
por inmersión. Gráfico N°5 Altura Promedio
Tratamientos por Inmersión 60 50 40 30 20 10 T IV 1% Inm T
V 5% Inm T VI 10% Inm Testigos 7 días 15 días 21
días 20,33333333 31 48,83333333 12,16666667 15,83333333 22
18,5 28,16666667 48,5 13,66666667 25,83333333 37 Los tratamientos
IV y VI son los que mostraron mayor crecimiento con
relación a los testigos. Estos son datos promedio sobre
las plántulas que sobrevivieron. En el Gráfico
N° 6, se observa la tasa de supervivencia en todos los
tratamientos por inmersión sobre 60 plántulas
iniciales. 33
cantidaddeplantas Gráfico N° 6 Supervivencia Promedio
Tratamientos por Inmersión 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 7
días 15 días 21 días T IV 1% Inm 12,66666667
11 10,66666667 T V 5% Inm 11,66666667 10,66666667 9,333333333 T
VI 10% Inm 17,66666667 14,66666667 14,33333333 Testigos 15 12
11,33333333 Al cabo de 21 días, al finalizar el ensayo,
ninguno de los tratamientos por inmersión
sobrevivió el 100%. El tratamiento VI, obtuvo en promedio
un 71,65% del total de las plántulas. Los tratamientos IV,
V y los testigos llegan al 50%, menor en el T.V y apenas un poco
más en los testigos. 4.11 – GRAFICOS TRATAMIENTOS Y
CONCENTRACIONES 4.11.1 – Gráficos comparativos En el
Gráfico N° 7, se cruzan datos de cantidad de
entrenudos promedios entre los tratamientos: aspersión
(T.I) e inmersión (T.IV), con las mismas concentraciones
de esteviosidio, 1%. 34
cantidaddeentrenudos cantidaddeentrenudos (T.I), 0 4
Gráfico N° 7 ENTRENUDOS PROMEDIOS comparativo
tratamientos 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 7 días 15
días 21 días T.I 1% Aspers. 29,33333333 50
78,33333333 Testigo 32 50 77 T.IV 1% Inmers. 15 22 34,66666667
Testigo 11 21 37 En este gráfico se puede observar que a
iguales concentraciones de esteviosidio, los mejores resultados
se dan en el tratamiento por aspersión pero no supera
significativamente, en cuanto a la cantidad de entrenudos, al
testigo, sólo levemente al cabo de 21 días. En el
tratamiento por inmersión (T.IV), supera levemente al
testigo en cantidad de entrenudos. En el Gráfico N° 8,
se cruzan datos de cantidad de entrenudos promedios entre los
tratamientos: aspersión (T.II) e inmersión (T.V),
con las mismas concentraciones de esteviosidio (5%).
Gráfico N° 8 ENTRENUDOS PROMEDIO comparativo
tratamientos 100 80 60 40 20 T.II 5% Asp. Testigo T.V 5% Inm.
Testigo 7 días 33,33333333 25 9,666666667 15 días
55,33333333 40 15 10 21 días 80 60 21,66666667 16 35
cantidaddeentrenudos alturaencentímetros 0 0 En el
gráfico se observa que el tratamiento II, al 5% de
esteviosidio, da los mejores resultados en las tres fechas de
toma de datos superando a los tratamientos por inmersión y
a los testigos. En el Gráfico N° 9, se cruzan datos de
entrenudos promedio entre los tratamientos III (aspersión)
y VI (inmersión), concentración de esteviosidio al
10%. Gráfico 9 ENTRENUDOS PROMEDIOS comparativo
tratamientos 100 80 60 40 20 T.III 10% Asp Testigos T.VI 10% Inm
Testigos 7 días 15 días 21 días 27,33333333
49,66666667 86 40 51 76 15 26 37 10 22 32 El tratamiento III con
una concentración de esteviosidio al 10% aplicado por
aspersión, superó comparativamente al tratamiento
por inmersión con la misma concentración y a los
testigos al cabo de 21 días. En el Gráfico N°
10, se cruzan datos de cantidad de crecimiento promedio entre los
tratamientos: aspersión (T.I) e inmersión (T.IV),
con las mismas concentraciones de esteviosidio, 1%.
Gráfico N° 10 ALTURA PROMEDIO comparativo tratamientos
160 140 120 100 80 60 40 20 TI 1%Asper. Testigos T.IV 1% Inm.
Testigos 7 días 15 días 38,33333333 71,5 35 75,5
20,33333333 31 13,66666667 25,83333333 21 días 133,6666667
135 48,83333333 37 36
alturaencentímetros alturaencentímetros 0 9 0 Si
bien en el gráfico se puede observar un mayor crecimiento
de las plántulas del T.I 1% en relación a la misma
concentración del tratamiento IV 1% por inmersión,
este no supera al testigo. En el Gráfico N° 11 se
cruzan los datos de crecimiento en centímetros de los
tratamientos II y V, ambos con una concentración del 5% de
esteviosidio. Gráfico N° 11 ALTURA PROMEDIO 160 140
120 100 80 60 40 20 comparativo tratamientos T II 5% Asp.
Testigos T.V 5% Inm. Testigos 7 días 44,83333333 34
12,16666667 8,5 15 días 89,16666667 68,5 15,83333333 21
días 139,3333333 99 28,166666 19 El tratamiento II, 5% de
esteviosidio aplicado por aspersión, mostró el
mayor crecimiento promedio en todas las fechas de toma de datos.
Supera al testigo y al tratamiento V por inmersión y con
la misma concentración de esteviosidio. En el
Gráfico N° 12. Se cruzan los datos de crecimiento en
centímetros de los tratamientos III y VI, ambos con una
concentración del 10% de esteviosidio. Gráfico
N° 12 ALTURA PROMEDIO comparativo tratamientos 150 100 50
TIII 10% Asp Testigos T.VI 10% Inm Testigo 7 días 15
días 21 días 33,5 83 112,5 41 75,5 140 18,5
28,16666667 48,5 18 24,5 41 37
NúmerodePlantas 0 En el gráfico puede observarse
que un aumento de concentración de esteviosidio disminuye
el crecimiento. En este caso si bien el tratamiento III, 10% por
aspersión, supera al tratamiento VI, 10% por
inmersión, el testigo mostró mayor crecimiento al
finalizar el ensayo a los 21 días. En el Gráfico
N° 13, se comparan los porcentajes de supervivencia de los
tratamientos I y IV, aspersión e inmersión
respectivamente y con las mismas concentraciones. Gráfico
N° 13 SUPERVIVENCA PROMEDIO comparativo tratamientos 25 20 15
10 5 TI 1%Asper. Testigos T.IV 1% Inm. Testigos 7 días 15
días 21 días 20 20 20 20 20 20 12,66666667 11
10,66666667 16 14 14 El tratamiento I por aspersión tuvo
una supervivencia del 100% al finalizar el ensayo a los 21
días. El testigo también, pero el tratamiento por
inmersión tuvo muy baja supervivencia. En el
Gráfico N° 14 se comparan los tratamientos II y V,
aspersión e inmersión respectivamente, para los
datos de supervivencia para las tres fechas de toma de datos y
las mismas concentraciones de esteviosidio (5%). 38
cantidaddeplantas cantidaddeplantas 25 0 0 Gráfico N°
14 SUPERVIVENCIA PROMEDIO comparativo tratamientos 20 15 10 5
T.II 5%Asp. Testigo T.V 5% Inm. Testigos 7 días 15
días 21 días 20 20 20 20 19 18 11,66666667
10,66666667 9,333333333 10 9 8 En este caso, el tratamiento II,
supero a los testigos y el tratamiento V, con una tasa de
supervivencia del 100%. Si bien al cabo de 7 días no
superaba al testigo, al finalizar el ensayo no hubo
pérdidas de plántulas. En el Gráfico N°
15, se comparan los tratamientos III (aspersión) y VI
(inmersión) con una concentración al 10% de
esteviosidio en ambos casos. Gráfico N° 15
SUPERVIVENCIA PROMEDIO comparativo tratamientos 25 20 15 10 5
T.III 10% Asp Testigo T.VI 10% Inm Testigo 7 días 15
días 21 días 19,6666 19,33333 19,3333 20 20 20
17,66666667 14,66666667 14,33333333 19 13 12 39
En el gráfico puede verse que los tratamientos con mayor
concentración de esteviosidio (10%) no superan en
supervivencia al testigo en caso del T III (aspersión) y
ni en el T VI (inmersión). Sólo a los 21
días el tratamiento VI supera levemente al testigo. 4.11.2
-TABLAS DE DATOS PROMEDIO POR PLANTA A LOS 21 DÍAS Al
finalizar el ensayo, se tomaron los datos individuales promedio
por planta para: entrenudos, crecimiento (altura en cm.) y
supervivencia, a efectos de comparar tratamientos y
concentraciones luego de 21 días. En la Tabla N° 4, se
comparan los tratamientos por Aspersión en todas sus
concentraciones para los tres parámetros medidos. Tabla
N° 4 – Tratamientos por Aspersión Datos Finales
individuales tratamiento por Aspersión a los 21
días N° Entrenudos Altura en cm. % Supervivencia TI 1%
Testigo TII 5% Testigo TIII 10% Testigo 3,91 3,85 4 3,33 4,44 3,8
6,66 6,75 6,96 5,5 5,81 7 100 100 96,65 90 96,66 100 Analizando
la Tabla N° 4 los tratamientos por Aspersión en las
concentraciones más bajas (T.II 1% y T.II 5%) superan al
testigo en todos los parámetros. El tratamiento III,
supera en cantidad de entrenudos al testigo pero no en
crecimiento y supervivencia. 40
– – – Tabla N° 5 – Tratamientos por inmersión
Datos Finales individuales Tratamiento por Inmersión a los
21 días N° Entrenudos Altura cm. % Supervivencia TIV
1% testigo TV 5% testigo TVI 10% testigo 3,25 2,64 2,32 2 2,58
2,66 4,58 3,64 2,35 2,37 3,38 3,41 53,3 70 46 40 71,65 60 En la
Tabla N° 5, podemos observar que en los tratamientos por
inmersión, en todas las concentraciones, los datos
individuales por planta en los parámetros medidos, superan
a los testigos levemente pero con una supervivencia mucho menor
con respecto a los tratamientos por aspersión. CAPITULO V
Conclusiones En cuanto a tratamientos: El de Aspersión es
el que presenta los mejores resultados para los parámetros
medidos: Entrenudos, Crecimiento y Supervivencia. El tratamiento
por Inmersión produjo pérdidas de plántulas
y una pobre respuesta en todos los parámetros. Estos no
superan a los testigos ni a los obtenidos en los tratamientos por
Aspersión. En cuanto a las concentraciones de
esteviosidio: La del 1% (0,07 mg/100 ml) y la del 5% (0,35 mg/100
ml) para los tratamientos por aspersión (T.I y T.II),
dieron diferencias un poco mayores 41
con respecto a los testigos en los datos cuantitativos, pero
cualitativamente, mostraron mayor vigor, grosor de los tallos,
mayor área foliar y mayor enraizamiento. Estos
últimos datos no fueron medidos, surgen de la
observación detallada e ilustrada. El porcentaje de
supervivencia, tanto en los datos promedio generales, como en los
individuales (Tabla N° 4 y Tabla N°5), fue del 100% o
cercano (96,6% T.II) en ambas concentraciones para estos
tratamientos (T.I y T.II). Una mayor concentración de
esteviosidio, 10% (0,7 mg/100ml) produce un efecto no deseado
para la propagación por la TMA, las plántulas
tienen en el T.III, un mayor crecimiento, entrenudos largos y
delgados y una activación de las yemas axilares con brotes
muy débiles y hojas amarillentas, pequeñas y menor
tasa de supervivencia. El esteviosidio pareciera tener un efecto
exponencial a lo largo del tiempo por cuanto todas las
plántulas de Origanum vulgare que recibieron tratamientos
y que se conservaron más allá de los 21
días, presentaron un aspecto robusto, mayor vigor y
área foliar. Este efecto se prolonga durante la
rusticación en comparación con las plántulas
de Origanum vulgare que no recibieron tratamiento, esto puede
observarse en las Ilustraciones N° 78 y N° 79. En cuanto
al uso del edulcorante comercial de Stevia, que puede reemplazar
al extracto natural para ser utilizado en pequeña escala y
en los casos en que sea dificultoso la obtención o
preparación del mismo. 42
Ilustración N°78: plántulas de orégano
(sin tratamientos) durante la rusticación. Mayo 2013
Ilustración N° 79, plántulas de orégano
que recibieron tratamientos con esteviosidio (Mayo 2013) De
acuerdo a lo que se observó durante la rusticación
del orégano el efecto del esteviosidio mejoró el
vigor y la rusticidad de las plántulas, aumentó la
supervivencia y el área foliar, lo cual deja la inquietud
de seguir desarrollando, ensayando y cuantificando el efecto del
esteviosidio, 43
– – – – concentrado en el edulcorante de uso comercial, durante
la rusticación de otras especies. Para un mejoramiento de
raíces y del estado general de las plántulas,
siendo este un objetivo secundario al realizar este ensayo. Se
sugiere: Realizar ensayos con concentraciones menores de
esteviosidio, en la misma especie y en otras, por ejemplo el
tomillo (Thymus vulgaris). Que los parámetros a medir sean
área foliar y sistema radicular, además de los ya
cuantificados en el presente trabajo. Realizar ensayos durante la
rusticación incorporando diferentes dosis de esteviosidio
en el agua de riego. Repetir este trabajo utilizando como
tratamientos: Aspersión y Riego, en concentraciones de
esteviosidio de 0,5%, 1,5%, 2%, y 3%. CAPITULO VI Debate General
Trabajos anteriores realizados para evaluar la actividad del
esteviosidio como estimulador del crecimiento internodal en
plantas de maíz enano, Ruddat et al. (1963), demuestran la
efectividad del esteviosidio en el alargamiento de los entrenudos
debido a su semejanza estructural con las giberelinas, este
efecto se pudo comprobar en el Tratamiento III (10% de
esteviosidio), sin embargo, aún se debe continuar
trabajando hasta encontrar la concentración adecuada para
lograr un mejor resultado que sirva a la TMA. El extracto natural
de Stevia es activador de raíces, desinfectante del suelo,
mejorador de los cultivos, estimula el proceso
fotosintético, mejora las propiedades
organolépticas, aumenta el contenido de azúcares y
evita la oxidación post cosecha, Real et al. (2012). Los
rastrojos, tallos, ramas y raíces, que quedan en las
parcelas del cultivo de Stevia rebaudiana, se utilizan como
mejorador de suelo. Este se aplica 44
y directamente, o se tritura, y el polvo se usa para otros
cultivos, al aplicarlo al suelo disminuyen los microorganismos
patógenos aumentan los antagonistas lo cual mejora la
fertilidad, Tigrero y Landázur, (2009). También
puede utilizarse en el agua de riego, tallos pulverizados lo cual
estimula la actividad de los microorganismos benéficos. Es
interesante continuar con el uso del edulcorante de Stevia para
comprobar si tiene el mismo efecto que el extracto natural y que
pueda ser utilizado en condiciones de cultivo no controladas
totalmente, como almacigueras, estaqueros, y otras formas de
producción de plantas a pequeña escala, y que
serían de gran utilidad para los horticultores,
pequeños productores y agricultores familiares. Resulta
muy interesante el uso de extracto de Stevia en animales,
según investigaciones llevadas a cabo por la
compañía japonesa JBB, en conjunto con
Universidades e Institutos de Japón, que trabajan
activamente en este campo, han demostrado que el uso del extracto
de Stevia mejora el apetito, el crecimiento, previene
enfermedades y mejora el sabor de la carne en animales de granja,
también, previene la fatiga estival debida al calor, y
mejora la fertilidad, JBB Stevia Laboratory –(2004). Queda
el interrogante sobre si el extracto natural puede ser
reemplazado por el edulcorante de Stevia concentrado. Se espera
que el presente trabajo haga un aporte diferente a todos estos
campos y que pueda ser utilizado, por la población
más vulnerable, agricultores de subsistencia, y
pequeños productores, en otras condiciones que no sean
controladas como en el laboratorio. 45
BIBLIOGRAFÍA Claudia B. Sorol de Amarilla – (1996)
Efecto del Steviosido y del Steviol en la Germinación de
Semillas de Petunia hybrida Vilm. (Solanaceae) Rev. Asoc. Cienc.
Nat. Litoral 27 (1): 49 – 53 Francisco Real; Gustavo
Florio; Jazmín Florio “Stevia o Hierba Dulce (Stevia
rebaudiana) II PARTE” – 2012
http://wwwsunshineflorio.blogspot.com.ar/2012 Juan Tigrero y
Pablo Landázur – “Aplicaciones de la Stevia
rebaudiana” – Escuela Politécnica del
Ejército (ESPE) (2009) http://biblioteca.espe.edu.ec JBB
Stevia Laboratory – 2004 http://www.jbb-stevia.com K. Komai; J.
Iwamura; T. Morita y M. Hamada. 1985. Effect of stevioside and
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J. Pestic. Sci. 10: 113-117. M. Katsumi; B.O. Phinney; P.R.
Jefferies y C. A. Henrick – 1964 – Mutants of maiz to
some Kaurene Derivatives. Science 144: 849-850 Miguel Alonso
– “Favorece al Desarrollo de las Plantas – Uso del
Ka’a He’e en la agricultura” – ABC digital
(2007)
http://archivo.abc.com.py/suplementos/rural/articulos.php?pid=367007
M. Ruddat; A. Lang y E. Mosettig. (1963). Gibberellin Activity of
Steviol, a Plant Terpenoid. Naturwissenschaften 50:23.
http://anterior.inta.gov.ar/extension/prohuerta/institucional/poa2011.pdf
46