Actividad enzimática de la amilasa

Enviado por Agustín Garrido

Resúmen

La ?-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la
saliva humana y cataliza la degradación del
almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal.
El almidón está formado por dos tipos de
moléculas: la amilosa y la amilopectina, ambos
polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por
cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces ?- C1-C4,
mientras que la amilopectina tiene, además de estos
últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas
ramificadas. La ?-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la
amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y
ramificadas (oligosacáridos) como productos.

Para medir la actividad enzimática de la ?-amilasa, se
utilizará un test colorimétrico que detecta el
almidón. Para ello se contará con una
solución de iodo/ioduro de potasio (I2/IK), ya que el
almidón en presencia de esta solución adquiere una
coloración azulada característica. Esto tiene una
explicación física: el iodo se coloca en el
interior de la hélice que forma la amilosa (en las
regiones hidrofóbicas), formando un complejo de color
azul. Cuando la ?-amilasa actúa, degrada la amilosa, se
desintegra la hélice y por tanto en presencia de I2/IK ya
no dará una coloración azul.

Por lo tanto, en este TP mediremos la desaparición de
sustrato (evidenciada por el test colorimétrico) para
determinar la actividad de la enzima. Además, analizaremos
cómo afectan las distintas condiciones en que actúa
la enzima (pH, temperatura, concentración de NaCl),
así como los efectos que pueden causar diferentes
pretratamientos (proteinasa, calor).

La dilución óptima nos indicará
cuánto debemos diluir la saliva para que se logre el
efecto acromático dentro del rango propuesto (2-8
minutos).

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Enviado por Agustín Garrido