Bacteriología – Corynebacterium,
Bacillus y Clostridium
RESUMEN.
En esta práctica realizamos el aislamiento
y la identificación de los microorganismos pertenecientes
a los géneros Corynebacterium, Bacillus y
Clostridium.
Llevamos a cabo el cultivo de microorganismos en
placas con agar sangre para
Bacillus, cuya muestra fue
tomada del aire, en placas
con agar sangre más
telurito y una placa sólo con agar sangre para
Corynebacterium, y una placa con agar sangre y un tubo
con caldo tioglicolato más carne para Clostridium,
cuya muestra
fué tierra.
Desafortunadamente no hubo desarrollo de
microorganismos en la placa con agar sangre más
telurito, ni en la placa con agar sangre, por lo tanto no
desarrollo
Corynebacterium. En la placa con agar sangre para
Bacillus tampoco hubo desarrollo. En
la placa con agar sangre para Clostridium hubo desarrollo de
colonias diferentes entre sí, en cuanto al tubo hubo
desplazamiento del tapón de cera con lo que podemos
concluir que el microorganismo realizó una fermentación.
OBJETIVOS.
* Llevar a cabo el aislamiento y desarrollo de
los microorganismos pertenecientes a las especies Bacillus,
Clostridium y Corynebacterium.
JUSTIFICACION.
Los microorganismos transmitidos por el aire se controlan
mediante técnicas físicas o agentes
químicos. El aire simplemente
representa un ambiente
especial para su aplicación. En las áreas que
reciben contaminación doméstica y son ricas
en nutrientes orgánicos, predominan las bacterias
coliformes, estreptococos fecales, especies de Bacillus,
Proteus, Clostridium, y muchas otras.
Las bacterias
Bacillus , Clostridium y Corynebacterium se agrupan en
la familia
Bacillaceae, las cuales se caracterizan por presentar
células
en forma de bastones. Todas las especies producen
endosporas.
Estas bacterias se
encuentran en toda la naturaleza, en
el agua,
suelo e
incluso en el conducto intestinal de animales. La
resistencia
natural de las esporas que producen les permite sobrevivir largos
períodos, cuando son transportadas por el aire.
Es por todo lo anterior muy importante saber
identificarlos por medio de tinciones de gram, de esporas y de
gránulos metacromáticos y así poder
determinar cuando son causantes de alguna enfermedad en el
humano.
INTRODUCCION.
Bacillus.
El género Bacillus está
compuesto por bacilos grampositivos grandes caracterizados por su
capacidad para producir endosporas. El género incluye
microorganismos aerobios estrictos y anaerobios facultativos.
Bacillus anthracis es causante de enfermedad en el ser
humano. Muchas otras especies están distribuidas en la
naturaleza y
se hallan en la mayor parte de las muestras de suelos, agua y polvo.
Ciertos miembros de dicho género han adquirido importancia
como productores de antibióticos. (1)
Bacillus
anthracis.
El carbunco (enfermedad de los animales
herbívoros, ovinos y bovinos, equinos, porcinos y
caprinos) es causado por el B. anthacis, un bacilo
grampositivo aerobio y formador de esporas. Es un bacilo recto
que mide de 3 a 5 micras de largo y de 1 a 1.2 micras de ancho,
es inmóvil. Están encapsulados durante la
proliferación en el animal infectado.
(1)
Características de su
cultivo.
Proliferan bien en placas con agar sangre. La
proliferación máxima se obtiene con un pH de 7-7.4 en
condiciones aerobias, pero se produce desarrollo en ausencia de
oxígeno. (1)
Identificación de laboratorio.
Ni los aspectos morfológicos ni las
características de cultivo habituales
permiten diferenciar al B. anthracis de las cepas
inmóviles de B. cereus, el microorganismo con el
que más fácilmente se confunde. Sin embargo, las
cepas virulentas de B. anthracis son los únicos
microorganismos que producen colonias rugosas cuando proliferan
en ausencia de un mayor nivel de CO2 y colonias
mucoides cuando proliferan en un medio con bicarbonato de sodio
en una atmósfera con un 5%
de CO2. (1)
Resistencia.
Debido a su capacidad para producir esporas, el
bacilo del carbunco es sumamente resistente a los ambientes
químicos y físicos adversos. Una temperatura de
120oC durante 15 min puede inactivar a las esporas.
Las esporas permanecen viables durante años en las
pasturas contaminadas. (1)
Determinantes de la
patogenicidad.
La patogenia del B. anthracis depende de
dos factores de virulencia importantes: una cápsula poli
(ácido D-glutámico) y una exotoxina. La
cápsula interfiere en la fagocitosis. Los efectos letales
se deben a una exotoxina que consiste en tres proteínas
características y serológivamente
activas: el antígenos protector (PA), el factor de edema
(EF) y el factor letal (LF). (1)
Epidemiología.
La incidencia del carbunco en el hombre es
baja. En la actualidad casi todos los casos ocurren en personas
no vacunadas que trabajan en las hilanderías y en lugares
donde se trabaja con fieltro. (1)
Patogenia.
Los seres humanos se infectan de una de tres
formas:
- La vía cutánea. Los
microorganismos acceden a través de pequeñas
abrasiones o cortes y se multiplican. - Inhalación. Los microorganismos son
inhalados, se multiplican en los pulmones y son barridos hacia
los ganglios linfáticos hiliares de drenaje, donde se
rpoduce una necrosis hemorrágica. - Ingestión. Rara vez los microorganismos
son ingeridos en carne infectada, con ella resultante
invasión y ulceración de la mucosa
gastrointestinal. (1)
Bacillus cereus.
Es una causa de enfermedad transmitida por los
alimentos que
se reconoce con poca frecuencia. Tiene una morfología
celular similar a la del B. anthracis pero a diferencia de
éste en general es móvil y no es susceptible a la
penicilina o al gama-fago. (1)
La intoxicación alimentaria por B.
cereus puede causar dos síncromes
clínicos:
- tiene un periodo de incubación breve de
cuatro horas. Se caracteriza por náuseas y
vómitos
severos y con frecuencia se confunde con la intoxicación
alimentaria estafilocócica. - tiene un periodo de incubación
más prolongado (17 hrs) y se caractería por cólicos abdominales
y diarrea. Habitualmente se confunde con la intoxicación
alimentaria por clostridios. (1)
Clostridium.
Los clostridios son bacilos grandes
móviles, grampositivos y anaerobios, muchos descomponen
proteínas, forman toxinas o ambas cosas. Su
hábitat natural es el suelo o el
intestino de los animales y
el hombre,
donde viven como saprófitos. Entre los patógenos se
encuentran los causantes del botulismo, tétanos, gangrena
gaseosa y colitis seudomembranosa. (2)
Morfología e
identificación.
Las esporas de clostridios tienen un
diámetro mayor al de los bastoncillos en los cuales se
forman. Casi todos los clostridios son móviles y poseen
flagelos perítricos.(2)
Cultivo.
Crecen solamente en condiciones de anaerobios,
mediante el método de
Gaspack o mediante medios
líquidos en tubos de ensaye con tejidos de
animales
(carne picada). (2)
Forma de las colonias.
Algunos microorganismos producen colonias grandes,
elevadas, con bordes enteros, otros producen colonias más
pequeñas, cuyos bordes se extienden en forma de red de finos filamentos.
Muchos clostridios producen una zona de hemólisis en agar
de sangre. (2)
Características del
crecimiento.
Los bacilos anaerobios son incapaces de utilizar
el oxígeno como aceptor final de hidrógeno; carecen
de citocromo y de citocromoooxidasa y son incapaces de destruir
el peróxido de hidrógeno porque carecen de catalasa
y peroxidasa. Pueden fermentar una variedad de azúcares;
muchos digieren proteínas.
(2)
Características
antigénicas.
Comparten antígenos, pero también
poseen antígenos específicos solubles que permiten
agruparlos por medio de pruebas de
precipitación. (2)
Clostridium
botulinum.
Se le encuentra en el suelo y
ocasionalmente en heces de animales. Es
causante del botulismo. Sus esporas son resistentes al calor.
(2)
Toxina.
Conforme se va desarrollando y durante la
autólisis de la bacteria, la toxina se libera al medio. Se
conocen siete variedades antigénicas de toxina. Estas
toxinas se encuentran entre las sustancias más
tóxicas que son conocidas. Su producción está bajo el control de un gen
viral. (2)
Patogenia.
El botulismo es una intoxicación resultante
de la ingestión de alimentos en los
cuales C. botulinum se ha desarrollado y ha producido
toxina. Los alimentos
causantes más comunes, son los alimentos
empacados al vacío o los ahumados. Las esporas germinan en
tales alimentos, La
toxina bloquea la producción o la liberación de
acetilcolina en las uniones sinápticas y neuromusculares.
(2)
Datos clínicos.
Síntomas: trastornos visuales, incapacidad
para deglutir y dificultad para hablar, parálisis bulbar,
muerte debida
a parálisis respiratoria o paro cardiaco.
(2)
Pruebas diagnósticas de laboratorio.
La toxina se puede demostrar con frecuencia en el
suero de los pacientes y ésta se encuentra en los restos
de comida no ingerida. Puede identificarse el tipo
antigénico de la toxina por neutralización con
antitoxina específica. También se puede utilizar
hemaglutinación pasiva o radioinmunoensayo.
(2)
Clostridium
tetani.
Es el causante del tétanos. Se han
distinguido varios tipos por sus antígenos flagelares
específicos. Todos ellos comparten un antígeno O
(somático) común y todos producen el mismo tipo
antigénico de neurotoxina, tetanospasmina.
(2)
Toxina.
Las células
vegetativas de C. tetani producen la tetanospasmina y la
liberan cuando se lisan. La producción de toxna está controlada
por un gen plásmido. La toxina intracelular es un
polipéptido que las enzimas
proteolíticas desdoblan en dos fracciones de alta
toxicidad. Actúa en varias formas sobre el sistema nervioso
central. Inhibe la liberación de acetilcolina
interfiriendo con la transmisión neuromuscular. Inhibe las
neuronas posinápticas de la médula espinal por el
bloqueo de la liberación de un mediodador inhibidor, esto
resulta en espasmos musculares generalizados, ataques
súbitos. (2)
Corynebacterium.
Este género incluye un grupo de
bacterias
heterogéneas. Las características comunes de los miembros de
este género incluyen:
- bacilos pleomófricos
grampositivos; - falta de formación de
endosporas; - estallido cuando se dividen las células,
con la formación de letras chinas; - metabolismo aerobio o anaerobio
facultativo; - reacción positiva para catalasa
y - reacción positiva para citocromooxidasa.
(3)
Las especies de Corynebacterium encontradas
con mayor frecuencia en los laboratorios clínicos como
patógenos oportunistas de huéspedes comprometidos o
como agente causal de difteria incluyen:
- diphtheeriae, ulcerans, aquaticum,
pseudodiphthericum (hofmannii), xerosis, renale,
pseudotuberculosis (ovis), bovis, minutissimum, haemolyticum,
pyogenes, equi, matruchotii. (3)
Habitat.
Son comunes en suelo y agua y residen
en piel y mucosas
de humanos y animales. El aislamiento continuo de especies de
Corynebacterium de sangre, LCR y otros líquidos
corporales que normalmente son estériles sugiere que el
microorganismo puede ser responsable de un proceso
infeccioso. (3)
Enfermedades.
La difteria es una enfermedad aguda, contagiosa y
febril causada por C. diphtheriae . Esta enfermedad se
caracteriza por una combinación de inflamación
local con formación de seudomembranas en la orofaringe y
daño al corazón y
nervios periféricos ocasionado por la acción
de una poderosa exotoxina. Este microorganismo es diseminado por
convalecientes y portadores sanos por vía
respiratoria.Durante la infección el microorganismo crece
en la nasofaringe o en algún lugar del tracto respiratorio
superior y elabora una exotoxina que produce necrosis e
inflamación superficial de la mucosa. Esta es absorbida a
través de la mucosa y trasportada por vía
circulatoria a órganos distantes. Estos son el corazón y
el sistema nervioso
periférico. (3)
- ulcerans también produce una
toxina parecida a la anterior. Algunas cepas elaboran una
segunda sustancia tóxica que no es una exotoxina.
(3)
Otras especies de Corynebacterium
asociadas con humanos causan enfermedad sólo en raras
circunstancias. C. hofmannii, un habitante normal de la
faringe, ha sido recuperado de la sangre de pacientes con
endocarditis bacteriana subaguda. C. xerosis, encontrado
en los sacos conjuntivales, ha sido recuperado de pacientes con
endocarditis valvular protésica. (3)
MATERIAL.
* Para Bacillus:
– 1 placa con agar sangre
* Para Corynebacterium:
– 1 placa con agar
sangre
-1 placa con agar sangre +
telurito
* Para Clostridium:
– 1 placa con agar sangre
– 1 tubo con caldo tioglicolato + carne de res
con un tapón de parafina.
RUTA CRITICA.
*
Bacillus.
Abrir la caja para ponerla incubar a 37°C
Placa con agar en contacto con el aire 48
hrs.sangre
Observar macro y
microscópicamente.* Clostridium.
Tierra
Incubar a 37°C Observar características 48 hrs. macro y
microscópicas.Caldo tioglicolato+ carne de res
contapón de parafina.*
Corynebacterium.
Incubar a 37°C observar durante 48 hrs.
características macro y micros-Inocular y sembrar
cópicas.una muestra de
Corynebacteriumen una placa de agar
sangre
Realizar lo mismo que lo anterior con la placa de
agar sangre con telurito
.RESULTADOS.
placa con agar sangre:No hubo desarrollo de
Bacillus*
Placa con agar sangre + telurito:No hubo
desarrollo alguno de Corynebacterium*
Placa con agar sangre:No hubo desarrollo alguno
de Corynebacterium
* Placa con agar sangre:Hubo desarrollo de
colonias muy diferentes entre sí.Se tomó una
colonia café, de aspecto butiráceo, 2 mm de
diámetro.-
Tinción de Gram: bacilos gram(+)-
Tinción de espora: sí se observó la
presencia de espora Por todo lo anterior podemos deducir que se
trataba de un Clostridium.
* Tubo con caldo tioglicolato + carne de res con
tapón de parafina:Hubo desarrollo de microorganismos ya
que se observó una turbidez y aparte el tapón se
desplazó hacia arriba, indicando la producción de gas.
– Tinción de Gram: bacilos
gram(+)
– Tinción de espora: sí se
observó la presencia de espora.Por todo lo anterior
podemos concluir que se trataba de un
Clostridium.
OBSERVACIONES.* El caldo tioglicolato
tiene radicales tio (SH) al igual que la carne de res que se le
agrega, y con todo esto lo que se pretende es quitar todo el
oxígeno del medio, ya que este se utiliza para los
microorganismos del género Clostridium, que son
anaerobios estrictos.
CONCLUSIONES.
* Los Bacillus son bacilos G(+), pueden
ser o no esporulados, móviles o invóviles.
Desarrollan en forma de estreptobacilos con terminaciones
redondeadas. Pueden presentar gránulos
metacromáticos o endoesporas.
* El género Corynebacterium
presenta gránulos metacromáticos, se pueden
observar en forma de L o V, empalizadas, cuerpo de maso. Pueden
ser o no capsulados, móviles o inmóviles y no
esporulados.
* El género Clostridium es un
bacilo que se observa como embarazado, pueden ser
móviles o inmóviles, capsulados o no capsulados,
esporulados. Es un anaerobio estricto.
- ARTICULO
- "TRATAMIENTO DE LAS INFECCIONES VAGINALES
RESISTENTES." - La vaginitis aguda afecta a la mayoría
de las mujeres en algún momento de su vida adulta. La
vaginitis crónica o recurrente es más que una
molestia. El punto más importante es establecer el
diagnóstico correcto. Muchos
médicos complementan el diagnóstico con estudios de laboratorio
como el pH vaginal,
la prueba de amina y el frotis microscópico preparado
con solución salina o hidróxido de potasio al
10%.Se ha observado que la mayoría de las mujeres con
vaginitis resistente son tratadas para un diagnóstico equivocado. En caso de duda
se sugiere efectuar un cultivo para hongos.Candidiasis.La candidiasis
vulvovaginal recurrente (CVVR) es la forma habitual de
vaginitis resistente. Los síntomas son prurito
crónico, ardor, irritación y dispareunia.
Candida albicans es la causal de 80 a 90% de las
CVVR.Tricominiasis.Se establece el diagnóstico con un examen
microscópico y cultivos para tricomonas. Vaginosis
bacteriana.Su diagnóstico debe confirmarse con la
medición del pH, prueba
de amina y análisis microscópico.
(4) - BIBLIOGRAFIA.(1). JAWETZ. Microbiología Médica. Editorial El
Manual Moderno.
15ª edición. 1996. Pp.834,835,836,837,838. (2).
ZINSSER. Microbiología. Editorial
Médica-Panamericana, 20ª edición.. 1997. Pp.
208,209,210,211.(3). KONEMAN. Diagnóstico
Microbiológico. Editorial Médica – Panamericana.
3ª edición. 1998. Pp. 469,470, 472,474.(4).
INFECTOLOGIA. No 5. Año 1996.
" BACILOS GRAM (+)."
Autor:
Francisco Javier Cruz
Hernández
francisco74[arroba]hotmail.com