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Manual de química sanguínea veterinaria




Enviado por nicky



    INTRODUCCION

    En los últimos años ha aumentado
    considerablemente el interés de
    la aplicación de los análisis clínicos veterinarios en el
    diagnostico de patologías en animales. El
    área de Química
    sanguínea tiene gran importancia en esta aplicación
    porque ofrece información adicional al veterinario para
    realizar un diagnóstico más preciso que
    conducirá al tratamiento específico, es decir, al
    tratamiento de la causa determinante de la enfermedad, en lugar
    de un tratamiento exclusivamente de los síntomas de
    ésta.

    Actualmente existe un gran número de
    pruebas
    Bioquímicas especialmente útiles en los estudios
    clínicos, y es claro que el mayor crecimiento y el mayor
    reto en patología clínica serán del
    área de la química. Por ejemplo
    cada año aumenta el número de enzimas
    mensurables que sabemos se alteran en las enfermedades y cuyos cambios
    pueden ser aplicados en el diagnóstico. En la miopatía
    nutricional de los bovinos y ovejas, el único criterio
    fiel que indica la presencia y extensión de la enfermedad
    es el nivel elevado de la transaminasa glutámica
    oxalacetica. Los valores
    fuera de lo normal de otras enzimas
    séricas también son de valor en el
    diagnóstico y determinación de la
    cuantía del daño en el hígado,
    páncreas, huesos y otros
    órganos y sistemas.

    El sodio y el potasio séricos, junto con
    alteraciones del equilibrio
    acido-base pueden ser determinados con precisión y rapidez
    suficiente para influir en el tratamiento de un paciente. La
    pericia técnica y los instrumentos necesarios para algunas
    de estas determinaciones están aumentando en complejidad y
    por esta razón algunos valiosos medios de
    diagnóstico tardan en alcanzar uso
    práctico.

    El presente manual pretende
    ofrecer al Bacteriólogo una guía de técnicas
    y procedimientos de
    Química
    sanguínea que se realizan en el Laboratorio
    Clínico Veterinario para lograr así resultados
    más óptimos y confiables.

    Para lo anterior se plantean una serie de pasos a
    seguir desde la toma de la muestra, pasando
    por las determinaciones químicas hasta la obtención
    de los resultados.

    TABLA DE
    CONTENIDO

    1. TOMA DE MUESTRA

    1.1. MATERIALES

    1.2. PREPARACION DEL SITIO DE
    PUNCION

    1.3. PUNCION Y SITIOS DE PUNCION

    2. TRANSPORTE DE
    LA MUESTRA

    3. MANEJO DE LA MUESTRA

    3.1. PLASMA

    3.2. SUERO

    3.3. CONSERVACION DE LA MUESTRA

    4. EQUIPO "AMES QUIK LAB"

    4.1. CARACTERISTICAS DEL EQUIPO "AMES QUIK
    LAB"

    4.2. OPERACIONES DE
    ENCENDIDO

    5. DETERMINACIONES BIOQUIMICAS

    5.1. GLUCOSA

    5.2. COLESTEROL TOTAL

    5.3. UREA

    5.4. CREATINININA

    5.5. ACIDO URICO

    5.6. PROTEINAS TOTALES

    5.7. ALBUMINA

    5.8. TRANSAMINASA GLUTAMICA PIRUVICA
    (GPT)

    5.9. TRANSAMINASA GLUTAMICA OXALACETICA
    (GOT)

    5.10. FOSFATASA ALCALINA (ALP)

    5.11. BILIRRUBINA TOTAL Y
    DIRECTA

    6. VALORES DE
    REFERENCIA

      1. Tijeras, bisturí, algodón,
        gasa, solución yodada, alcohol, agujas, jeringas, vacutainer,
        tubos secos, tubos con anticoagulante (EDTA), bolsas para
        descartar material contaminado.

      2. MATERIALES
      3. PREPARACION DEL SITIO DE
        PUNCIÓN
    1. TOMA DE MUESTRA

    La posición adecuada y sujeción
    efectiva del animal son esenciales para un muestreo con
    éxito. Un poco de tiempo empleado
    haciendo amigos, ganando la confianza del animal, son
    generalmente bien recompensados. La práctica apacible y
    suave deberá minimizar la necesidad de manejo
    físico humano. No solo deben ser minimizados los
    trastornos físicos y psíquicos sobre bases
    humanitarias, sino también porque la sangre tomada de
    un animal asustado, adrenalizado, puede originar resultados
    equivocados en varios análisis, por ejemplo, la glucosa y los
    ácidos grasos no esterificados.

    El sitio de punción debe estar limpio y
    libre de patógenos, esto incluye recortar el pelo, lavarlo
    con jabón, detergente o solución yodada en dos
    veces y después realizar una limpieza con alcohol. El
    corte de pelo puede ser indeseable en animales de
    exhibición por lo que es necesario pedir el consentimiento
    del dueño, en caso que el corte no sea posible por
    algún motivo la limpieza debe ser más estricta. La
    asepsia debe realizarse en sentido contrario al crecimiento del
    pelo del animal y en forma circular del centro hacia la
    periferia. Después de la punción el sitio debe
    dejarse seco, limpio y libre de sangre ya que
    cualquier humedad o materia
    orgánica favorece las infecciones.

    1.3. PUNCION Y SITIOS DE PUNCION

    La sangre venosa es
    la muestra
    más común obtenida de los animales. Las
    técnicas varían de una especie a otra, según
    la localización de los vasos sanguíneos
    convenientes y el espesor, dureza y capa de la piel.

    BOVINOS

    La sangre es
    obtenida de las venas yugular, mamaria (abdominal
    subcutánea) y caudales y de las arterias carótida,
    caudal y braquiales.

    La vena yugular puede ser destacada presionando
    con los dedos el canal yugular o usando un cordón. El vaso
    prominente se ve bien en la mayoría de las vacas lecheras
    y se palpa fácilmente en los animales obesos.
    Tiene aproximadamente 2 cm de diámetro. Se introduce en la
    vena una aguja larga calibre 14 y de 5 cm de longitud, o calibre
    16 y 10 cm de longitud.

    La acertada penetración en el vaso se
    evidencia al brotar la sangre. otra
    opción es introducir una aguja más fina (cal.18 de
    38 mm.) en ángulo de 45° con la piel a lo
    largo de la vena. Este procedimiento es
    más fácil con la aguja insertada en una
    jeringa.

    Luego de haberse introducido la aguja se hace un
    poco de succión con la jeringa, si ésta entro en el
    vaso la sangre aparecerá en la jeringa. Puede ocurrir que
    la aguja atraviese la vena y que la punta quede fuera del vaso,
    entonces, retirando la aguja lentamente se llevará la
    punta dentro de la luz de
    éste. Extraída la sangre, se quita la
    presión sobre la vena y se aplica presión manual sobre la
    punción antes de sacar la aguja y por 30 a 60 seg
    después para parar el sangrado.

    La vena mamaria se punciona en forma semejante,
    cuidando el operador de ser pateado. También es más
    difícil de limpiar la piel, pero es
    innecesario destacar la vena en la mayoría de los
    casos.

    La vena caudal se encuentra muy cerca de la
    arteria, para realizar la punción se alza la cola y se
    clava una aguja pequeña calibre 20 ó 22 de 25mm y a
    15 cm de la base de la cola verticalmente en la línea
    media hasta que penetre en el bazo. Se debe identificar la sangre
    como venosa o arterial; ésta es más roja y sale con
    mayor presión.

    OVEJAS

    La vena yugular es la más usada pero la
    vena y arterias femorales son también fáciles de
    puncionar. Se hace una partición en la lana, a veces
    previamente cortada, para exponer un área de piel limpia.
    La yugular se encuentra con frecuencia debajo de la piel pero
    puede estar incluida en el tejido adiposo. La piel es blanda y la
    aguja (calibre 18-22 de 25 mm) entra con facilidad y
    frecuentemente atraviesa el vaso. Haciendo un poco de
    succión, la sangre penetrará en la jeringa si la
    aguja se encuentra en la luz del
    vaso.

    CABALLO

    Para sangre venosa se utiliza la vena yugular. Con
    el pulgar izquierdo en el surco yugular a la mitad de su trayecto
    en el cuello, se comprime y sujeta la vena. Se clava la aguja
    (cal. 18-20 de 38 mm de longitud) en ángulo aproximado de
    15° con la piel 1 cm arriba del pulgar que está
    sujetando el vaso, se introduce 1 ó 2 cm bajo la piel, se
    aumenta el ángulo a 45° y se empuja para que entre en
    la vena. Esta penetración debe hacerse en un solo movimiento
    suave y continuo. Esto ayuda a disminuir el sangrado al sacar la
    aguja. De la carótida puede obtenerse sangre arterial poco
    más o menos como en la vaca, pero el procedimiento
    requiere práctica y no debe ser intentado en un animal
    valioso por una persona
    inexperta. Es más fácil obtener sangre de la gran
    arteria metatarsiana, situada en una canaladura sobre la cara
    antero-externa del corvejón, entre el tercero y cuarto
    huesos
    metatarsianos. Se inyecta en la piel un poco de anestésico
    local, después de unos minutos, se pincha la arteria con
    una aguja de calibre 20 y 25 mm, mantenida en ángulo recto
    con el vaso, firmemente encajado en el surco
    óseo.

    CERDO

    Se usan las venas de las orejas y la cola y la
    vena cava anterior. De una oreja se toma sangre por
    incisión de una vena con escalpelo o por punción
    con una aguja. La punción de la vena cava es peligrosa y
    deber ser practicada por una persona
    experta.

    PERRO Y GATO

    Es muy útil el servicio de un
    ayudante experto en el manejo de animales. Las
    venas cefálica y safena son usadas comúnmente en el
    perro y algunas veces en el gato. Con una mano el ayudante sujeta
    con suavidad la cabeza del animal y con la otra rodea por
    detrás, arriba del codo extendiéndolo un poco. Con
    el pulgar y los otros dedos de esta mano se fija la piel floja
    para sujetar el vaso firmemente. El operador inmoviliza el vaso
    con el pulgar e inserta la aguja (cal, 18, 22,25 o 38 mm) arriba
    de este punto.

    De la vena yugular se toma comúnmente
    sangre en el gato y algunas veces en el perro; el procedimiento es
    semejante al descrito para otras especies. La sangre arterial se
    obtiene de la vena femoral, que es palpada en su fosa. Este
    procedimiento
    es probablemente más largo y doloroso que la
    venipunción y se recomienda el uso de anestesia
    local.

    NOTA: La cantidad de muestra obtenida
    a través de la punción debe tenerse en cuenta en
    las diferentes especies, es así como para las especies
    mayores puede obtenerse por punción sin causar trastornos
    hasta 15 ml de sangre, y en pequeñas especies la muestra no se
    puede exceder de 10 ml.

    AVES

    Igualmente que para las otras especies la
    sujeción o inmovilización es de gran importancia
    para el éxito del procedimiento.
    Existen varios sitios de punción que serán elegidos
    de acuerdo a la experiencia del operador.

    La vena radial (alar), es el sitio de
    punción mas comúnmente elegido por su facilidad; se
    elige una de las dos alas, se levanta, se sujeta el ala libre
    junto con las patas del animal, seguidamente quien realizara la
    punción inmoviliza con los dedos pulgar e índice la
    vena alar, previo a esto se debe desplumar el recorrido de la
    vena con el fin de visualizarla mejor, con aguja numero 21 se
    hace inserción sobre la vena en un ángulo de
    15°, se debe tener cuidado de no extravasar ya que la pared
    de la vena es muy delgada y podría ocurrir con facilidad,
    observándose hematoma inmediatamente, si esto no sucede se
    procede a extraer la muestra,
    aproximadamente de 1 a 2 ml de sangre en aves de mayor
    tamaño, y en aves mas
    pequeñas 0,5 ml ya que una cantidad mayor puede producir
    anemias en esta especie. Otros sitios de punción menos
    utilizados son la vena atlantooccipital ubicada entre el atlas y
    la región occipital, la inserción de la aguja debe
    hacerse perpendicular al sitio antes mencionado. La
    punción intracardiaca debe realizarse con mucho cuidado ya
    que un error en ella, al puncionar las aurículas puede
    causar la muerta inmediata del animal.

    2. TRANSPORTE DE
    LA MUESTRA

    El cuidado de la muestra sanguínea hasta
    que es analizada en el laboratorio es
    importante, debe ser correctamente rotulada y conservada para las
    pruebas
    bioquímicas.

    Para el transporte y
    conservación del suero se debe esperar la
    retracción del coágulo, en nuestro medio, la sangre
    de los animales se coagula entre 20-30 minutos, sin embargo lo
    mas recomendado es esperar 1-2 horas a temperatura
    ambiente,
    cuanto más tiempo se deje
    para que esta retracción tenga lugar, mayor cantidad de
    suero se obtendrá, aunque la cantidad de suero no
    será nunca mayor de un 40% del volumen original
    de sangre. La retracción y coagulación se pueden
    producir mucho más rápido si se incuba el frasco a
    37°C durante 1 hora y después se coloca en un
    frigorífico durante media hora más; después
    de la retracción del coágulo la muestra debe ser
    refrigerada a 4°C para su transporte,
    colocándola en hielo picado o en una caja
    fría.

    Para el transporte y
    conservación del plasma no hay necesidad de esperar
    que la sangre se sedimente, después de obtenida debe ser
    refrigerada para su envío al laboratorio en
    nevera portátil con hielo seco o picado.

    El suero y el plasma no deben ser
    conservados más de 6 horas en refrigeración sin ser separados de los
    demás componentes sanguíneos, porque esto trae como
    consecuencia alteración en los diferentes metabolitos de
    la sangre a determinar y por lo tanto errores en los resultados
    del laboratorio.

    Para la conservación de la muestra se
    emplean anticoagulantes apropiados para algunas determinaciones,
    como por ejemplo: se utiliza fluoruro para la glucosa o heparina
    para la insulina, etc. Debemos tener conocimiento
    de la aplicación de estos anticoagulantes en nuestro medio
    para mejorar en lo posible el transporte y conservación de
    las muestras a nuestro laboratorio y
    evitar errores en las determinaciones.

    La transferencia de muestras de una persona a otra o
    de un lugar a otro no debe hacerse descuidadamente, la
    obtención, transporte y análisis de una muestra de sangre siempre
    debe registrarse en forma oficial. El incumplimiento de los
    procedimientos
    formales de registro
    descalifica la muestra para todo tratamiento
    ulterior.

    3. MANEJO DE LA MUESTRA

    En el laboratorio dependiendo de la muestra (suero
    o plasma) se procede de la siguiente manera:

    3.1. PLASMA

    El tubo que contiene sangre más
    anticoagulante se debe centrifugar a 1500 – 2000 r.p.m. durante
    10-15 minutos para separar las células
    del plasma. El plasma que constituye la capa más externa,
    se puede extraer entonces empleando una pipeta Pasteur o un
    cuenta gotas, y se transfiere a un tubo de almacenamiento.
    Se debe tener mucho cuidado para no alterar la capa celular, por
    lo que la pipeta no se debe poner demasiado cerca de la capa de
    células
    ya que la succión puede alterar y extraer cierto numero de
    células
    de la superficie que podrían alterar las determinaciones
    bioquímicas. Para esto se recomienda centrifugar
    nuevamente este sobrenadante y repetir el paso anterior,
    obteniendo el plasma con menos células
    interferentes.

    3.2. SUERO

    El tubo que contiene sangre sin anticoagulante se
    debe centrifugar a 1500 r.p.m. durante 10 minutos para separar
    las células
    del suero. Luego con una pipeta Pasteur se debe separar el suero
    o sobrenadante y transferir a un tubo de almacenamiento
    para la realización de las diferentes pruebas.

    La separación del suero del coágulo
    es generalmente mucho mas sencilla, cuando se emplean recipientes
    de vidrio, o de
    poliestireno especialmente tratados, puesto
    que el coagulo se retrae con suavidad de las paredes del frasco o
    del tubo y eventualmente queda como una pequeña
    protuberancia en la base, entonces el suero se puede verter o
    aspirar fácilmente con pipeta y transferir a un tubo para
    almacenamiento.
    También se recomienda como en el caso del plasma,
    centrifugar nuevamente el suero y obtenerlo libre de
    células que pueden interferir en las
    determinaciones.

    3.3. CONSERVACION DE LA MUESTRA

    Las muestras de suero o plasma previamente
    separadas de las células, pueden conservarse a temperatura
    ambiente
    (20-30°C) durante un día sin que se deterioren, en la
    parte refrigerada de un frigorífico (4°C) durante 4
    días; en el congelador (-15 a -20°C) durante una
    semana o indefinidamente. Particularmente, debe evitarse hacer
    congelaciones y descongelaciones repetidas para que las enzimas no
    pierdan su actividad inicial. Las muestras congeladas deben
    descongelarse lentamente hasta la temperatura
    ambiente, y
    entonces las muestras descongeladas se deben mezclar
    completamente por inversión. De esta manera se conservaran
    mejor los metabolitos, se obtendrán resultados mas
    acertados y diagnósticos más
    exactos.

    4. EQUIPO "AMES QUIK LAB"

    4.1. CARACTERISTICAS DEL EQUIPO "AMES QUIK
    LAB."

    El equipo AMES QUIK LAB trabaja con programas
    específicos de métodos
    prefijados, estos programas manejan
    parámetros como la longitud de onda, factor
    estándar, valores de
    referencia, etc, que están almacenados en el módulo
    QUIK LAB.

    En el trabajo de
    rutina se pueden seleccionar estos programas
    oprimiendo simplemente la tecla de la determinación
    deseada y automáticamente el instrumento selecciona los
    parámetros necesarios para la
    determinación.

    Las condiciones ambientales de trabajo tienen una
    temperatura de
    15-35°C y una humedad relativa de 15-85 %, además
    maneja dos tipos de temperatura,
    la temperatura de medida (25°, 30° y37°C) y una
    temperatura de referencia (25°, 30° y37°C), las
    cuales deben ser iguales en el momento del análisis.

    El tiempo de medida
    utilizado es de 45, 90 y 180 seg según cada
    determinación. En cuanto a la longitud de onda posee
    filtros interferenciales de precisión colocados en un
    rotor con posiciones de 440, 405, 500, 546, 578 y 620 nanometros
    aproximadamente.

    El volumen de la
    cubeta va de 500 m L a 2100 m L para técnicas micro y
    semimicro.

    4.2. OPERACIONES DE
    ENCENDIDO

    1. Encender el equipo del interruptor POWER que se
      encuentra en la parte trasera del equipo.
    2. Esperar 3 minutos la señal auditiva del
      equipo para iniciar procedimiento.
    3. Elegir la temperatura necesaria según
      cada determinación. Así:
    1. Oprimir la tecla "PROGRAM"
    2. Oprimir la tecla "3"
    3. Mediante la tecla "*" elegir la temperatura
      deseada según la técnica.
    4. Oprimir la tecla "ENTER".
    5. Oprimir la tecla "8".
    6. Mediante la tecla "*" elegir la temperatura
      interna del equipo, la cual debe ser igual a la temperatura de
      la técnica.
    7. Oprimir la tecla "ENTER" dos
      veces.

    4. Oprimir la tecla correspondiente a la
    determinación a realizar.

    EN ESTE MOMENTO EL EQUIPO ESTARA EN OPTIMAS
    CONDICIONES PARA INICIAR EL PROCEDIMIENTO DE CADA
    PRUEBA.

    5. DETERMINACIONES BIOQUIMICAS

    Las determinaciones bioquímicas en nuestro
    laboratorio se realizan utilizando suero como principal muestra,
    se prefiere trabajar con suero porque este se hemoliza menos
    probablemente que el plasma, además no contiene
    anticoagulantes los cuales pueden interferir en las
    determinaciones que se vayan hacer o pueden extraer el agua de las
    células sanguíneas originando la dilución de
    los constituyentes. Sin embargo, el plasma puede ser utilizado en
    las determinaciones de urea y glucosa porque no existe una
    diferencia muy marcada en la concentración de estos
    metabolitos en los hematíes y en el plasma, pero la
    diferencia en las concentraciones de otros constituyentes es mas
    elevada. En nuestro laboratorio se realizan con mayor frecuencia
    y con fines diagnósticos las siguientes
    determinaciones:

    5.1. GLUCOSA

    El nivel de glucosa sanguínea refleja las
    condiciones nutricionales, emocionales y endocrinas del sujeto.
    Después de la comida aumenta "hiperglucemia alimentaria"
    en animales monogastricos, pero no en los rumiantes. Durante la
    excitación aumenta probablemente como efecto de la
    liberación de norepinefrina. Por esta razón es
    costumbre obtener la sangre de individuos posabsortivos quietos,
    para determinar la "glucosa sanguínea en ayunas". La
    concentración de glucosa en lo hematíes se aproxima
    a la concentración de glucosa en plasma en la
    mayoría de los monogastricos y rumiantes jóvenes.
    Los eritrocitos de los equinos contienen también poca
    glucosa, la concentración de glucosa en el plasma excede
    generalmente a la de glucosa en sangre en 10 a 30 mg/ 100 ml en
    rumiantes y caballos adultos.

    La concentración de glucosa
    sanguínea aumenta por la norepinefrina, epinefrina y
    glucagón, tres substancias glucogenolíticas, y por
    los glucocorticoides que inhiben la utilización de la
    glucosa y estimulan la gluconeogénesis. También se
    elevan los valores de
    glucosa por diabetes mellitus asociada con
    hiperadrenocorticalismo, debido a una hipersecreción de
    las hormonas
    adrenocorticales por neoplasia o superdosificación de
    corticoesteroides, se asocia también con hipertiroidismo y
    convulsiones.

    La concentración de glucosa disminuye por
    el ayuno o por el ejercicio prolongado, por el exceso de insulina
    ya sea por un insulinoma o por dosis altas de insulina como
    terapia; en toxemia, inanición y lesiones
    hepáticas; también disminuye en
    hipoadrenocorticalismo debido a una reducción en la
    secreción de las glándulas adrenales o a una
    producción reducida de ACTH por la
    glándula pituitaria.

    RESPONSABLE.

    Bacteriólogo.

    METODO.

    GOD-POD. Test color
    enzimático. Glucosa – oxidasa –
    peroxidasa.

    PRINCIPIO.

    La glucosa es transformada por la glucosa oxidasa
    (GOD), en ácido glucónico y en peróxido de
    hidrógeno, el cual en presencia de peroxidasa (POD), oxida
    el cromógeno (4-aminofenazonal/fenol),
    convirtiéndolo en un compuesto de color rojo, el
    cual es cuantificado por el fotómetro del
    equipo.

    MUESTRA.

    Suero o plasma con EDTA.

    EQUIPO.

    QUICK LAB

    REACTIVOS.

    1 reactivo (tampón/enzimas/cromogeno)

    1 A Fenol

    La solución 1 es estable a 2-8°C
    durante 2 meses y a 15 -25°C durante 2
    semanas.

    CONDICIONES.

    El animal en lo posible debe estar en "ayunas".
    (Mínimo 8 horas).

    Evitar en lo posible la fuerza en el
    momento de la toma de muestra, para minimizar las condiciones de
    estres, que
    pueden alterar el metabolismo de
    los carbohidratos.

    LINEALIDAD.

    La linealidad del método se
    obtiene hasta 500mg/dl.

    PROCEDIMIENTO

    Preparar fotómetro a una temperatura de
    37°C.

     

    Blanco

    Standard

    Muestra

    Solución
    1

    1000 m l

    1000m l

    1000m l

    Solución
    standar

    10m l

    Suero
    problema

    10m l

    Incubar a 37°C en baño de María
    por 15 min, o a temperatura ambiente por
    30 min.

    Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
    y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estándar y
    presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
    muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES

    • Calibración del equipo.(Remitirse al
      manual del
      equipo).
    • Centrifugar muestras lo más
      rápido posible.
    • Cambio de lote de sueros multicalibradores y
      reactivos, realizar nueva calibración del
      equipo.
    • Verificar reactivos que correspondan a la
      prueba pedida y evitar agotamiento de los
      mismos.
    • Rechazar muestras hemolizadas e
      insuficientes.
    • Muestras que no se preparan el mismo
      día, refrigerar a 4ºC.
    • Confirmar la linealidad de la prueba y si es
      necesario realizar las diluciones
      respectivas.

    EXPRESION DE RESULTADOS.

    Los resultados para esta prueba en nuestro
    laboratorio, se expresan en mg/dl.

    5.2. COLESTEROL TOTAL

    El colesterol ha recibido gran atención en
    medicina humana
    porque se halla implicado en la ateroesclerosis, pero su
    importancia en las enfermedades de los animales
    domésticos no ha sido aun demostrada.

    El colesterol se encuentra en todas las fracciones
    lipídicas de la sangre. Para los fines de patología
    clínica, el colesterol se valora en el plasma como
    colesterol total y a veces se divide en dos fracciones: "libre" y
    esterificado.

    El colesterol "libre" esta unido a lípidos
    pero no esterificado.

    La mayoría de los animales pueden tener
    niveles elevados de colesterol después de alimentarse con
    grasa, también en disfunción hepática
    incluyendo la obstrucción del conducto biliar, porque la
    destrucción de las células hepáticas trae
    como consecuencia una disminución en la actividad
    metabólica del hígado y se reduce mas la
    degradación del colesterol que la síntesis, por lo
    que los niveles en sangre aumentan. En hipotiroidismo los niveles
    de colesterol aumentan porque la carencia de hormonas
    tiroideas reduce la actividad metabólica de las célula
    hepáticas así como también de las
    células de otras partes del organismo. También
    aumentan los niveles de colesterol en diabetes mellitus ,
    en nefrosis y puede presentarse un ligero incremento con infarto
    al miocardio.

    Los niveles bajos de colesterol pueden indicar
    debilidad o malabsorción de grasa pero son de muy rara
    incidencia.

    La determinación de colesterol total por el
    laboratorio es supremamente útil en el hipotiroidismo y en
    la nefrosis, en la disfunción hepática y
    diabetes mellitus se deben realizar otras pruebas mas
    especificas.

    RESPONSABLES.

    Bacteriólogos.

    METODO.

    Test Enzimático
    Colorimétrico.

    PRINCIPIO DEL ANALISIS.

    Los ésteres del colesterol son hidrolizados
    por la colesterol éster hidrolasa a colesterol libre y
    ácidos grasos. El colesterol libre existente, junto con el
    producido por la reacción, es oxidado por la colesterol
    oxidasa a colestenona y peróxido de hidrogeno.
    Este ultimo en presencia de peroxidasa oxida el cromogeno (4
    aminofenazona/ácido 2-hidroxifenilacetico) a un compuesto
    de color
    rojo.

    MUESTRA.

    Suero, plasma con EDTA.

    EQUIPOS.

    QUIK LAB

    REACTIVOS.

    1 TAMPON/ ACIDO 2-HIDROXIFENILACETICO/
    TENSOACTIVOS

    1 A TAMPON / ENZIMAS /4-
    AMINOFENAZONA / FERROCIANURO POTASICO.

    PATRON: Colesterol de 200mg/dl, listo para ser
    utilizado.

    La solución 1 es estable de 2-8 °C
    durante un mes.

    La solución de trabajo (1+2) es estable de
    2 a 8 °C durante dos semanas si esta guardada en botella
    oscura.

    CONDICIONES.

    Para un optimo resultado de laboratorio es
    preferible que el animal tenga un ayuno mínimo de 12 horas
    y que durante la toma de la muestra no se encuentre en
    condiciones de estres, esto es
    supremamente difícil en nuestro medio, pero si es posible
    realizarlo, se obtendrán resultados mas
    acertados.

    LINEALIDAD

    La linealidad del método es
    de 900 mg/dl.

    PROCEDIMIENTOS.

    Preparar el fotómetro a una temperatura de
    37°C.

     

    BLANCO

    STANDAR

    MUESTRA

    Solución
    1

    1000m l

    1000m l

    1000m l

    Solución
    standar

    10m l

    Suero
    problema

    10m l

    Incubar a 37°C en baño de María
    por 5 min, o temperatura ambiente por
    15 min.

    Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
    y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estándar y
    presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
    muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    Ver acciones
    correctivas de glucosa.

    EXPRESION DE RESULTADOS

    Los resultados para esta determinación se
    expresan en mg/dl o en mmol/L. En el laboratorio se expresan los
    resultados en mg/dl.

    5.3. UREA

    La urea es un compuesto orgánico
    relativamente simple producido por los mamíferos en el
    hígado como producto final
    del catabolismo de las proteínas.
    Es una de las substancias más difusibles en el cuerpo y se
    encuentra en todos los líquidos del cuerpo. Es
    relativamente atóxica, aunque en concentraciones altas
    desnaturaliza proteínas
    con la formación de productos
    tóxicos.

    La urea se elimina principalmente por los
    riñones, pero una porción de ella por la piel,
    sobre todo en los animales que sudan.

    Se a observado que el nitrógeno ureico
    sanguíneo no se eleva en perros, salvo
    pocas excepciones, hasta que al menos el 75% del
    riñón funcional se ha destruido, y se aconseja
    hacer la determinación en todos los pacientes
    quirúrgicos de mas de 5 años y en toda enfermedad
    en perros viejos
    antes de iniciar el tratamiento.

    La urea se aumenta en sangre por trastornos
    renales como la insuficiencia renal crónica y aguda; por
    obstrucción de las vías urinarias; excesiva
    destrucción de proteínas
    como en estados de fiebre, toxicidad o sepsis extensa.
    También se pueden aumentar los niveles de urea por una
    hemoconcentración debida generalmente a graves
    mitos o
    diarreas; cuando existe alteración de la función
    cardiaca que reduce el flujo de sangre a través del
    riñón se ve aumentada la concentración de
    urea en sangre.

    El descenso en los niveles de urea son raros,
    teóricamente pueden presentarse en asociación con
    graves enfermedades
    hepáticas o malnutrición de proteínas.

    RESPONSABLE.

    Bacteriólogo.

    METODO.

    UV a tiempo
    fijo.

    PRINCIPIO.

    La urea se hidroliza en presencia de ureasa, en amoniaco
    y dióxido de carbono. El
    amoniaco producido en esta reacción se combina con a
    -cetoglutarato y NADH en presencia de dehidrogenasa de glutamato,
    para producir glutamato y NAD. La cantidad consumida de NADH
    determinado por la disminución de absorbancia en el ultra
    violeta es proporcional a la cantidad de urea en la
    muestra.

    MUESTRA.

    Suero, plasma con EDTA y orina diluida 1:50 con
    agua
    destilada.

    EQUIPO.

    QUIK LAB

    REACTIVOS

    1 ENZIMAS/ COENZIMA/ SUBSTRATO

    1 A Tampón

    PATRON: Urea 80mg/dl. Listo para su
    uso.

    La solución 1 se mantiene estable durante 4
    semanas de 2- 8°C y durante una semana de
    15-25°C.

    CONDICIONES.

    El animal debe tener un "ayuno" de 12 horas antes
    de la toma de muestra.

    Aunque la urea es estable en suero, plasma u orina
    durante varios días bajo refrigeración, las muestras, especialmente
    la orina, deberán valorarse a las pocas horas para evitar
    la contaminación bacteriana, que
    podrían provocar una perdida rápida de la
    urea.

    LINEALIDAD.

    En suero y plasma la linealidad del método es
    hasta 300mg/dl, y 150 g/l para la orina. Para concentraciones
    altas, diluir la muestra 1:2 con agua
    destilada, repetir la valoración y multiplicar el
    resultado por 2.

    PROCEDIMIENTO.

    Preparar el fotómetro a una temperatura de
    30°C.

     

    Standar

    Muestra

    Solución de
    trabajo

    1000 m l

    1000m l

    Solución
    Standar

    10m l

    Suero
    problema

    10m l

    Leer inmediatamente colocando muestra por
    muestra.

    Colocar la solución standar y presionar la
    tecla "CALIBRATE", luego colocar la muestra y presionar la tecla
    "ANALYSE".

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    Ver acciones
    correctivas de glucosa.

    EXPRESION DE RESULTADOS.

    Los valores en el
    laboratorio se expresan en mg/dl.

    5.4. CREATININA

    La creatinina esta en el cuerpo principalmente en
    forma de fosfato de alta energía. En los músculos
    es fuente de energía. En animales jóvenes de
    crecimiento se encuentra en mayores cantidades. La creatinina es
    una substancia muy difusible y distribuida de manera uniforme en
    el agua
    corporal. Se elimina del plasma aproximadamente en la tasa de
    filtración glomerular.

    Al estudiar la excreción de creatinina,
    tiene valor el hecho
    de que los niveles séricos de creatinina casi no son
    afectados por la creatinina exógena de los alimentos, por la
    edad, el sexo, el
    ejercicio o la dieta. Por lo tanto los niveles elevados solamente
    se presentan cuando se altera la función
    renal.

    La medición de los niveles de creatinina en
    sangre proporcionan la misma información para el diagnostico y
    pronostico de la función renal que la obtenida por la
    medición del nitrógeno
    uréico.

    RESPONSABLES.

    Bacteriólogos.

    METODO.

    Picrato alcalino con
    desproteinización

    PRINCIPIO.

    La creatinina reacciona en un medio alcalino que
    no contenga proteínas
    con pricato, para formar un compuesto rojo –anaranjado
    (Reacción de Jaffe).

    MUESTRA.

    Suero o plasma.

    Orina: diluida: 1:50 con agua
    destilada

    EQUIPO.

    QUIK LAB

    REACTIVOS.

    1 Picrato de sodio…………
    44mmol/L

    2 Hidróxido de sodio……. 4.0
    N

    PATRON: Creatinina 2 mg/dl. Listo para ser
    utilizado.

    Los reactivos 1 y 2 son estables a temperatura
    ambiente de 15 a 25°C hasta la fecha de caducidad que viene
    indicada en la etiqueta.

    CONDICIONES.

    No requiere ayuno previo, porque su
    excreción depende muy levemente de la alimentación y la
    diuresis.

    No debe estar el animal sometido a estres intenso
    que puede ser causado en el momento de la toma de muestra, por la
    resistencia que
    el animal ejerza.

    LINEALIDAD.

    El método es
    lineal hasta 12 mg/dl de creatinina. Para concentraciones mayores
    mezclar un volumen de la
    muestra con un volumen igual de
    agua
    destilada, repetir el ensayo y
    multiplicar el resultado por 2.

    PROCEDIMIENTO.

    Prepara el fotómetro a una temperatura de
    30°C.

     

    Standar

    Muestra

    Solución de
    trabajo

    1000 m l

    1000m l

    Solución
    Standar

    100m l

    Suero
    problema

    100m l

    Leer inmediatamente colocando muestra por
    muestra.

    Colocar la solución standar y presionar la
    tecla "CALIBRATE", luego colocar la muestra y presionar la tecla
    "ANALYSE".

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    • Calibración del equipo. (remitirse al
      manual del
      equipo)
    • Utilizar adecuado volumen de
      muestra en las cubetas.
    • Verificar reactivos.
    • Centrifugar muestra lo más rápido
      posible.
    • Rechazar muestras hemolizadas,
      hiperlipémicas e insuficientes.
    • Refrigerar muestras que no se procesen el mismo
      día a 4ºC.
    • Confirmar linealidad de la prueba y diluir si
      es necesario.
    • Realizar periódicamente el mantenimiento del equipo.

    EXPRESION DE RESULTADOS

    Los resultados dependiendo del tipo de muestra se
    expresan así:

    SUERO: Se expresa en mg/dl o m mol/L.

    ORINA: Se expresa en mg/Kg de peso en 24
    horas.

    5.5. ÁCIDO URICO

    Este compuesto es el producto final
    del catabolismo de las purinas y pirimidinas en mamíferos
    y el producto final
    del catabolismo de las proteínas en aves y
    reptiles.

    No se conoce muy bien la significación de
    la elevación o disminución del ácido
    úrico en la sangre de los mamíferos. Como el
    ácido úrico se convierte en alantoina en el
    hígado en todas las especies, excepto en el hombre, los
    primates inferiores y el perro dálmata, se ha sugerido que
    su medición es una prueba sensible de función
    hepática.

    RESPONSABLES.

    Bacteriólogos.

    METODO.

    Test- color
    enzimático.

    PRINCIPIO

    El ácido úrico es convertido por la
    uricasa en alantoina y peróxido de hidrógeno, el
    cual en presencia de peroxidasa oxida el cromógeno (4
    aminofenazona/ácido 3.5 –dicloro – 2
    hidroxibencenosulfonico) formando un compuesto
    rojo.

    MUESTRA

    Suero, plasma con EDTA y orina diluida 1:10 con
    NaOH 0,01 N

    EQUIPO

    QUIK LAB

    REACTIVOS

    1 Tampón/enzimas /4 –aminofenazona /
    3-hidroxi-2,4,6 ácido triiodobenzoico/ potasio
    ferrocianuro

    1 A Surfactante

    PATRON: ácido úrico 6 mg/dl. Listo
    para su uso.

    La solución 1 es estable 4 semanas de 2 –
    8°C o una semana de 15 a 25°C, siempre que se mantenga en
    su botella original.

    CONDICIONES

    El animal debe tener un "ayuno" de 8 horas. Evitar
    el estres en la toma
    de la muestra porque aumentan las concentraciones de ácido
    úrico.

    LINEALIDAD

    La linealidad del método es
    hasta 30 mg/dl.

    PROCEDIMIENTO

    Preparar el fotómetro a una temperatura de
    37°C

     

    BLANCO

    STANDAR

    MUESTRA

    Solución
    1

    1000m l

    1000m l

    1000m l

    Solución
    standar

    20m l

    Suero
    problema

    20m l

    Incubar a 37°C en baño de María
    por 5 min, o temperatura ambiente por 10 min.

    Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
    y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estándar y
    presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
    muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    Ver acciones
    correctivas de glucosa.

    EXPRESION DE RESULTADOS.

    Los resultados para esta prueba en nuestro
    laboratorio, se expresan en mg/dl.

    5.6. PROTEINAS TOTALES

    Los principales contribuyentes a la presión
    osmótica del plasma sanguíneo son los iones y en
    una pequeña proporción las proteínas. Sin
    embargo, la baja constante de presión osmótica de
    las proteínas es vital para el mantenimiento
    del sistema
    cardiovascular. Se distinguen dos grandes grupos de
    proteínas del plasma: las albúminas y las
    globulinas. Se separan unas de otras por medios
    químicos sencillos y determinando la cantidad de cada
    grupo se
    obtiene la relación A-G.

    La albúmina de la sangre y las globulinas
    con excepción de algunas globulinas gamma, son
    sintetizadas en el hígado. Por lo tanto cualquier proceso que
    afecte la síntesis de albúmina disminuirá la
    relación A-G.

    La producción de anticuerpos puede ocasionar
    algunos cambios en la concentración de gamma-globulina;
    sin embargo el cambio es
    más cualitativo que cuantitativo.

    El incremento en las proteínas totales
    puede deberse a la deshidratación la cual presenta una
    hemoconcentración por vómitos o
    diarreas, también por un aumento en el nivel de globulina
    cuando no existe deshidratación, como en enfermedades
    hepáticas avanzadas (cirrosis), infecciones
    crónicas y en algunos casos de
    neoplasias.

    Una disminución en los niveles de las
    proteínas totales se debe siempre a un nivel bajo de la
    albúmina, acompañado ya sin incremento del nivel de
    globulina, o por un incremento en el nivel de globulina que es
    menor que el descenso en el nivel de albúmina. Por lo
    tanto la relación A-G disminuye. Esto puede ocurrir por:
    Perdida de albúmina en orina por nefrosis, perdidas de
    proteínas plasmáticas por hemorragias, falta de
    ingestión de cantidades adecuadas de proteínas en
    la dieta, incapacidad del hígado para producir
    albúmina por hepatitis o
    cirrosis hepática.

    Un bajo nivel de proteínas en la sangre
    origina una reducción en la presión osmótica
    coloidal del plasma que puede producir edema.

    RESPONSABLE.

    Bacteriólogos.

    METODO.

    Método al biuret.

    PRINCIPIO.

    En solución alcalina, las proteínas
    forman con los iones de cobre un
    complejo coloreado.

    MUESTRA.

    Suero, plasma con EDTA.

    EQUIPO.

    QUIK LAB.

    REACTIVOS.

    1 Reactivo biuret.

    1A agente tensioactivo.

    PATRON : Albúmina bovina,
    fracción V, 6 gr/dl. Listo para ser
    utilizado.

    La solución 1 es estable durante 6 meses de
    15 a 25°C si se almacena en una botella de
    plástico.

    CONDICIONES.

    El animal requiere un "ayuno" mínimo de 8
    hora, antes y durante la toma de la muestra deben evitarse
    situaciones de estress.

    LINEALIDAD.

    El método es lineal hasta aproximadamente
    12 g /dl de proteína total.

    PROCEDIMIENTO.

    Preparar el fotómetro a una temperatura de
    20 a 25°C.

     

    BLANCO

    STANDAR

    MUESTRA

    Solución
    1

    1000m l

    1000m l

    1000m l

    Solución
    standar

    20m l

    Suero
    problema

    20m l

    Incubar a temperatura ambiente por 20 min. Leer
    entre 20 y 60 min.

    Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
    y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estándar y
    presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
    muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

    ACCIONES CORECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    Ver acciones
    correctivas de Glucosa.

    EXPRESION DE RESULTADOS.

    En el laboratorio los resultados se expresan en g
    /dl.

    5.7. ALBUMINA

    La albúmina sanguínea es sintetizada
    en el hígado, y su disminución afecta la
    relación A-G, como ocurre en la fibrosis del
    hígado.

    Se observa hipoalbuminemia en la
    glomerulonefritis, amiloidosis, ocasionalmente en nefritis
    intersticial canina, desnutrición, diarrea parasitaria,
    malignidades hepáticas, necrosis hepática y
    hepatitis.

    No se sabe mucho acerca de casos de
    hiperalbuminemia. En la deshidratación, la cantidad
    absoluta de albúmina puede aumentar, sin embargo las
    globulinas también aumentan de modo que no varia la
    relación A-G.

    Otras causas de disminución de la
    albúmina puede ser la falta de aminoácidos
    adecuados, en la gastroenteritis la rapidez del movimiento y
    posiblemente la mala digestión contribuyen a una perdida
    mayor.

    RESPONSABLE

    Bacteriólogos

    METODO

    BCG

    PRINCIPIO

    La albúmina en una solución
    tamponada reacciona con el Verde de Bromocresol (BCG), a
    través de una reacción de enlace con el
    colorante.

    MUESTRA

    Suero o plasma con EDTA.

    EQUIPO.

    QUIK LAB.

    REACTIVOS

    Reactivo BCG

    Patrón : Albúmina bovina
    fracción V, 5 gr/dl. Listo para su uso.

    CONDICIONES.

    El animal requiere un "ayuno" mínimo de 8
    hora, antes y durante la toma de la muestra deben evitarse
    situaciones de estress.

    LINEALIDAD.

    El método es lineal hasta aproximadamente
    6g /dl de albúmina.

    PROCEDIMIENTO.

    Preparar el fotómetro a una temperatura de
    25°C.

     

    BLANCO

    STANDAR

    MUESTRA

    Reactivo
    BCG

    1500m l

    1500m l

    1500m l

    Solución
    standar

    10m l

    Suero
    problema

    10m l

    Incubar a temperatura ambiente por 1 min. Leer en
    10 min.

    Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
    y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estandar y
    presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
    muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

    ACCIONES CORECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    Ver acciones
    correctivas de Glucosa.

    EXPRESION DE RESULTADOS.

    En el laboratorio los resultados se expresan en g
    /dl.

    5.8. TRANSAMINASA GLUTAMICA PIRUVICA (GPT- ALT
    )

    Esta enzima cataliza la transferencia de un grupo a –
    amino de la alanina al ácido a -cetoglutarico. La enzima
    se encuentra en el hialoplasma de todas las células y
    existe una relación lineal entre la GPT hepática y
    el peso del animal. Siendo este el caso la determinación
    de GPT es casi especifica del hígado del perro y el gato,
    mientras que es de escaso o de ningún valor en las
    enfermedades de
    bovinos y equinos. Se ha encontrada muy elevada en la necrosis
    hepática.

    Es una enzima muy estable, y en estado de
    congelación se conserva largo tiempo. La
    ictericia no estorba la determinación de la enzima, pero
    debe evitarse la hemólisis.

    Las enfermedades hepáticas que producen
    niveles elevados de GPT comprenden neoplasias malignas, cirrosis
    y hepatitis,
    incluyendo la que se produce en el perro por el virus de la
    hepatitis
    canina infecciosa (HCI)

    RESPONSABLES.

    Bacteriólogo.

    METODO.

    Test cinético UV

    PRINCIPIO.

    a – cetoglutanato +L- alanina en presencia de GPT
    produce L –glutamato + piruvato, este a su vez +NADH +H+ en
    presencia de LDH produce lactato +NAD.

    MUESTRA.

    Suero, plasma con EDTA.

    EQUIPO.

    QUIK LAB

    REACTIVOS.

    1 Reactivo Tampón /
    substrato.

    1 A NADH/LDH

    2 a – cetoglutarato

    PIRIDOXAL 5-FOSFATO

    La solución 1 es estable de 2-8°C
    durante 3 meses y de 15-25°C durante 1
    semana.

    La solución 2 es estable de 2-8°C
    durante 4 meses y de 15-25°C durante 1 mes.

    CONDICIONES.

    El animal debe tener un "ayuno" de 8 horas como
    mínimo.

    LINEALIDAD.

    Para concentraciones mayores de 265 y 271 U/L a
    una absorbancia de 340 y 334 nm respectivamente, realizar una
    dilución 1:10.

    PROCEDIMIENTO

    Preparar el fotómetro a una temperatura de
    37°C.

     

    Muestra

    Solución 1

    1000 m l

    Suero Problema

    100 m l

    Incubar en baño de María a
    37°C

    Solución 2

    100 m l

    Colocar a temperatura ambiente durante 30
    segundos.

    Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la
    cubeta de reacción y presionar al tecla
    "START".

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    • Calibración del equipo.(Remitirse al
      manual del
      equipo).
    • Centrifugar muestras lo más
      rápido posible.
    • Cambio de lote de sueros multicalibradores y
      reactivos, realizar nueva calibración del
      equipo.
    • Verificar reactivos que correspondan a la
      prueba pedida y evitar agotamiento de los
      mismos.
    • Rechazar muestras hemolizadas e
      insuficientes.
    • Muestras que no se preparan el mismo
      día, refrigerar a 4ºC.
    • Confirmar la linealidad de la prueba y si es
      necesario realizar las diluciones
      respectivas.
    • Asegurar el mantenimiento del equipo.

    EXPRESION DE RESULTADOS

    Los resultados para esta prueba se expresan en
    U/L.

    5.9. TRANSAMINASA GLUTAMICA OXALACETICA (GOT –
    AST)

    Esta enzima hialoplasmica se encuentra en la
    mayoría de las células del cuerpo; la mayor
    concentración esta en las fibras musculares. De ahí
    su elevación en la necrosis muscular.

    La GOT cataliza la transferencia de un grupo a -amino
    del ácido aspartico al ácido a -cetoglutarico. Su
    valoración es muy útil en animales grandes como
    indicación de lesión muscular o necrosis
    hepática. La enzima se eleva considerablemente en
    miopatías por ejercicio en caballos, distrofia muscular
    aviar, en caballos durante el entrenamiento y
    en la enfermedad de los músculos blandos.

    RESPONSABLES.

    Bacteriólogos

    METODO

    Test cinético UV

    PRINCIPIO

    L –aspartaco + acetoglutarato en presencia
    de GOT (reacción reversible) produce L –glutamato +
    oxaloacetato , este ultimo con la adición de NADH mas H+
    en presencia de MDH produce L – malato
    +NAD.

    MUESTRA

    Suero, plasma con EDTA.

    EQUIPO

    QUIK LAB

    REACTIVOS

    1 Reactivo: Tampón /
    substrato

    1 A NADH/MDH/LDH

    2 a – cetoglutarato

    PIRIDOXAL 5 FOSFATO

    La solución 1 es estable de 2-8°C
    durante 3 meses y de 15-25°C durante 1
    semana.

    La solución 2 es estable de 2-8°C
    durante 4 meses y de 15-25°C durante 1 mes.

    CONDICIONES

    "Ayuno" de 8 horas
    aproximadamente.

    LINEALIDAD.

    Para concentraciones mayores de 265 y 271 U/L a
    una absorbancia de 340 y 334 nm respectivamente, realizar una
    dilución 1:10.

    PROCEDIMIENTO

    Preparar el fotómetro a una temperatura de
    37°C.

     

    Muestra

    Solución
    1

    1000 m l

    Suero
    Problema

    100 m l

    Incubar en baño de
    María a 37°C

    Solución
    2

    100 m l

    Colocar a temperatura ambiente durante 30
    segundos.

    Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la
    cubeta de reacción y presionar la tecla
    "START".

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    • Calibración del equipo.(Remitirse al
      manual del equipo).
    • Centrifugar muestras lo más
      rápido posible.
    • Cambio de lote de sueros multicalibradores y
      reactivos, realizar nueva calibración del
      equipo.
    • Verificar reactivos que correspondan a la
      prueba pedida y evitar agotamiento de los
      mismos.
    • Rechazar muestras hemolizadas e
      insuficientes.
    • Muestras que no se preparan el mismo
      día, refrigerar a 4ºC.
    • Confirmar la linealidad de la prueba y si es
      necesario realizar las diluciones
      respectivas.
    • Asegurar el mantenimiento del equipo.

    EXPRESION DE RESULTADOS.

    En el laboratorio las GOT se expresan en
    U/L

    5.10. FOSFATASA ALCALINA (ALP)

    Esta enzima hidroliza los fosfatos
    orgánicos en fosfato inorgánico y ña
    fracción orgánica. Es una enzima muy estable y
    puede ser congelada con poca o ninguna pérdida de
    actividad se halla gran cantidad en el hígado,
    riñón, mucosa intestinal y hueso. En la
    mayoría de los animales, quizá con excepción
    del gato se elimina en su forma natural por el hígado por
    lo tanto cualquier obstrucción al flujo de la bilis causa
    aumento de la enzima en el suero. El problema es determinar la
    fuente de esta elevación cuando no es patente la
    enfermedad hepática.

    Se producen elevaciones de la enzima en el suero,
    en enfermedades del bazo, hígado, riñón,
    mucosa intestinal o hueso. En la obstrucción biliar se
    eleva notablemente, las neoplasias óseas malignas causan a
    veces niveles elevados. También se puede elevar la ALP por
    una mayor actividad de los osteoclastos durante el crecimiento
    del esqueleto, por enfermedades óseas degenerativas en
    animales adultos, raquitismo, osteomalacia y en osteosarcoma.
    Durante interferencias con la excreción hepática,
    debida a una destrucción de las células
    hepáticas o a una destrucción del conducto biliar.
    Los resultados se interpretan mejor en conjunción con los
    niveles de GPT, que generalmente se encuentran aumentados en
    estos casos.

    RESPONSABLE.

    Bacteriólogo.

    METODO.

    Colorimétrico.

    PRINCIPIO.

    P-nitrofenilfosfato + H2O en presencia de
    fosfatasa alcalina produce fosfato +
    P-nitrofenol.

    MUESTRA.

    Suero o plasma heparinizado.

    EQUIPO.

    QUIK LAB

    REACTIVOS.

    1 TAMPON

    1 A substrato

    CONDICIONES.

    El animal debe tener un "ayuno" mínimo de 8
    horas.

    LINEALIDAD

    El método tiene una linealidad de 1492U/I,
    valores
    superiores a este realizar diluciones 1:10.

    PROCEDIMIENTO

    Preparar el fotómetro a una temperatura de
    37°C.

     

    Muestra

    Solución
    1

    1000 m l

    Suero
    Problema

    10 m l

    Incubar en baño de
    María a 37°C

    Solución
    2

    100 m l

    Colocar a temperatura ambiente durante 30
    segundos.

    Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la
    cubeta de reacción y presionar la tecla
    "START".

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    Ver acciones correctivas de
    glucosa.

    EXPRESION DE RESULTADOS.

    Los resultados se expresan en
    U/l.

    5.11. BILIRRUBINA TOTAL Y
    DIRECTA

    La bilirrubina es un producto de
    degradación de la hemoglobina, formada en las
    células reticuloendoteliales del bazo y de la medula
    ósea, que es transportada en el torrente circulatorio por
    diversas partículas. La bilirrubina libre o no conjugada
    no es capaz de atravesar la barrera glomerular del
    riñón. Cuando la bilirrubina libre se conjuga con
    ácido glucorónico en el hígado, se hace
    soluble en agua y es
    capaz de atravesar los glomerulos renales. La bilirrubina
    conjugada se excreta normalmente a través de la bilis. Si
    la conjugación y excreción en el hígado son
    normales el nivel sérico de bilirrubina total será
    de 1mg/dl. En el laboratorio se realiza para bilirrubina 2
    pruebas, la
    bilirrubina total (conjugada y no conjugada) y la bilirrubina
    directa (conjugada).

    La bilirrubina total aumenta si la
    destrucción de eritrocitos aumenta o si la
    conjugación de bilirrubina en el hígado es
    defectuosa.

    La bilirrubina directa aumenta si la
    excreción de bilis disminuye.

    En la hepatitis aguda
    la bilirrubina total esta aumentada, en la cirrosis
    hepática aumenta la bilirrubina total y la bilirrubina
    directa.

    BILIRRUBINA TOTAL

    RESPONSABLE.

    Bacteriólogo.

    METODO.

    Método del Acido Sulfanílico
    Diazotado.

    PRINCIPIO.

    La bilirrubina total (conjugada y no conjugada)
    reacciona en medio ácido con el ácido
    sulfanílico diazotano, en presencia de aceleradores
    formando un azocompuesto de color
    azul.

    MUESTRA.

    Suero o plasma con EDTA.

    EQUIPO.

    QUIK LAB

    REACTIVOS.

    1 Nitrito sódico.

    1 A ácido
    sulfanilico/HCL/aceleradores.

    La solución 1 es estable hasta por 4
    semanas entre 2 y 8°C y durante 3 días entre 15 y
    25°C, si se guarda en el vial original y se protege de la
    luz
    directa.

    CONDICIONES.

    "Ayuno" de 8 horas, el ayuno prolongado produce
    aumento de la bilirrubina porque parte de esta, que se almacena
    en el tejido adiposo, se libera durante la lipolisis y sale a
    circulación.

    El uso de torniquete no debe prolongarse mas de 30
    segundos.

    LINEALIDAD.

    El método es lineal hasta 30 mg/dl, para
    concentraciones mayores realizar diluciones
    1:2.

    PROCEDIMIENTO.

    Preparar el fotómetro a una temperatura de
    37°C.

     

    Blanco

    Muestra

    Reactivo 1A

    1000 m l

    Solución
    1

    1000m l

    Suero
    problema

    50m l

    50m l

    Incubar a 37°C por 3 min o a temperatura
    ambiente por 5 min.

    Leer en 1 hora.

    Colocar los blancos y presionar tecla "BLANK",
    colocar las muestras y presionar tecla
    "ANALYSE".

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    Ver acciones correctivas de
    Glucosa.

    INTERFERENCIAS.

    La luz directa solar
    a temperatura ambiente causa disminución de la bilirrubina
    en 50% en el intervalo de una hora.

    Soluciones de limpieza del material como el
    hipoclorito y dextran pueden producir turbidez que no se puede
    corregir completamente por medio de un blanco, aumentando
    los
    valores.

    Las muestras hemolizadas dan lugar a resultados
    falsamente bajos en este análisis.

    EXPRESION DE RESULTADOS.

    En el laboratorio los resultados se expresan en
    mg/dl.

    BILIRRUBINA DIRECTA

    RESPONSABLE.

    Bacteriólogo.

    METODO.

    Método del ácido sulfanilico
    diazotado.

    PRINCIPIO.

    La bilirrubina directa (conjugada) reacciona en
    medio ácido con ácido sulfanilico diazotado,
    formando un azocompuesto de color azul.

    MUESTRA.

    Suero o plasma con EDTA.

    EQUIPO.

    QUIK LAB.

    REACTIVOS.

    1 Nitrito sódico.

    1 A ácido
    sulfanilico/HCL.

    La solución 1 es estable hasta por 4
    semanas entre 2 y 8°C y durante 3 días entre 15 y
    25°C, si se guarda en el vial original y se protege de la
    luz
    directa.

    CONDICIONES.

    "Ayuno" de 8 horas, el ayuno prolongado produce
    aumento de la bilirrubina porque parte de esta, que se almacena
    en el tejido adiposo, se libera durante la lipolisis y sale a
    circulación.

    El uso de torniquete no debe prolongarse mas de 30
    segundos.

    LINEALIDAD.

    El método es lineal hasta 15mg/dl de
    bilirrubina directa, para concentraciones mayores realizar
    diluciones 1:2.

    PROCEDIMIENTO.

    Preparar el fotómetro a temperatura
    ambiente o a 37°C.

     

    Blanco

    Muestra

    Reactivo 1A

    1500 m l

    Solución
    1

    1500m l

    Suero
    problema

    100m l

    100m l

    Incubar a 37°C por 2 minutos o a temperatura
    ambiente por 5 min.

    Colocar el blanco y presionar tecla "BLANK",
    colocar las muestras y presionar tecla "ANALYSE". En absorbancia
    a una longitud de onda de 570nm.

    ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
    INACEPTABLES.

    Ver acciones de Glucosa.

    INTERFERENCIAS.

    La luz directa solar a temperatura ambiente causa
    disminución de la bilirrubina en 50% en el intervalo de
    una hora.

    Soluciones de limpieza del material como el
    hipoclorito y dextran pueden producir turbidez que no se puede
    corregir completamente por medio de un blanco, aumentando
    los
    valores.

    Las muestras hemolizadas dan lugar a resultados
    falsamente bajos en este análisis.

    EXPRESION DE RESULTADOS.

    Los resultados en el laboratorio se expresan en
    mg/dl.

    6. QUIMICA SANGUINEA
    VETERINARIA

    VALORES DE
    REFERENCIA

    EXAMEN

    PERRO

    GATO

    CABALLO

    VACA

    CERDO

    OVEJA

    CABRA

    UNIDAD

    ALBUMINA

    2.6 – 4.0

    2.4-3.7

    2.5 – 3.8

    2.7 -3.7

    2.3 – 4.0

    2.7 -3.7

    2.3-3.6

    gr/dl

    ALP (GPT)

    8.2-57.3

    8.3-52.5

    2.7-20.5

    6.9-35.3

    21.7-46.5

    14.4-43.89

    15.3-52.3

    U/l

    AST(GOT)

    8.9-48.5

    9.2-39.5

    115.7-287

    45.3-110.2

    15.3-55.3

    49-123.3

    66-230

    U/l

    BILIRRUBINA
    T.

    0.1-0.6

    0.1-0.5

    0.3-3.0

    0.0-0.8

    0.0-0.5

    0.0-0.5

    0.1-0.2

    mg/d

    BILIRRUBINA
    D.

    0.07-0.14

    0.0-0.05

    0.0-0.4

    0.0-0.2

    0.0-0.02

    0.0-0.27

     

    mg/dl

    COLESTEROL

    115.6-253.7

    71.3-161.2

    70.9-141.9

    62.1-192.5

    81.4-134.3

    44.1-90.1

    64.6-136.4

    mg/dl

    CREATININA

    0.5-1.6

    0.5-1.9

    0.9-2.0

    0.6-1.8

    0.8-2.3

    0.9-2.0

    0.7-1.5

    mg/dl

    FOSF.ALCALINA

    10.6-100.7

    12-65.1

    70.1-226.8

    17.5-152.7

    4.1-176.1

    26.9-156.1

    61.3-283.3

    U/l

    GLUCOSA

    61.9-108.3

    60.8-124.2

    62.2-114

    42.1-74.5

    66.4-116.1

    44-81.2

    48.2-76

    mg/dl

    PROT.
    TOTALES

    5.5-7.5

    5.7-8

    5.7-7.0

    6.2-8.2

    5.8-8.3

    5.4-7.8

    6.1-7.1

    gr/dl

    UREA
    (BUN)

    8.8-25.9

    15.4-31.2

    10.4-24.7

    7.8-24.6

    8.2-24.6

    10.3-26

    12.6-25.8

    mg/dl

    NOTA : LOS VALORES DE
    REFERENCIA DE ACIDO URICO SOLO TIENEN RELEVANCIA EN CANINOS Y SON
    LOS SIGUIENTES: MACHOS ADULTOS: 0.30 – 1.10 mg/100
    ml

    HEMBRAS ADULTAS: 0.10 -1.50 mg/100
    ml

    BIBLIOGRAFIA

    William Medway, D.V.M., ph.d., James
    E. Prier, John S. Wilkinson, Patología Clínica
    Veterinaria, editorial UTEHA, México,
    1990.

    B. M. Bush, Manual del Laboratorio Veterinario de
    Análisis Clínicos, editorial ACRIBIA Zaragoza
    España,
    1982.

    Maxine M. Benjamin, Compendio de Patología
    Clínica Veterinaria.

    Editorial IOWA state university press.
    1962.

    K.V.F Jubb, Peter C. Kennedy, Patología de
    los animales domésticos. Editorial LABOR.
    1973.

     

     

    Autor:

    WILDEMAN ZAPATA BUILES

    HOLTMAN DEIVER FAJARDO RINCON

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