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La utilizacion de la prueba de acido desoxiribonucleico (ADN) para la aplicación de la justicia en mexico




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    Indice
    1.
    Prologo

    2. Introducción

    3. Antecedentes
    y Marco teórico

    4. Estructura del ADN
    5. El ADN y la medicina
    forense.

    6. Técnicas de analisis de estos
    polimorfismos en genética forense.

    7. Analisis de los polimorfismos de ADN
    por PCR

    8. Resultados y
    discusión

    9. Conclusiones y
    recomendaciones

    10. Bibliografía

    1.
    Prólogo

    La medicina forense
    ha tenido notables avances particularmente en los últimos
    20 años, motivados por los nuevos conocimientos de
    bioquímica e ingeniería
    genética, además del uso extensivo de microprocesadores
    y circuitos
    integrados, que permite construir ordenadores
    cibernéticos de alta velocidad y
    capacidad, asi como modernos aparatos para la medicina y
    analisis clínicos. La denominada "prueba de ADN" que se
    desarrolla en la década de 1980, a raíz de un
    avance científico espectacular en el campo de la genética
    forense con el descubrimiento de las regiones hipervariables del
    ADN, ha venido a dar un notable impulso a la medicina forense.
    Esta prueba, relativamente sencilla, ha permitido apoyar la
    investigación criminalista en forma
    espectacular, de tal forma que gran cantidad de reclusos
    sentenciados a pena de
    muerte, han sido liberados al aplicarse con recursos del
    Estado y de
    ONGs la prueba, para comprobar su inocencia. La prueba ha
    demostrado su versatilidad y facilidad de uso. En México se
    aplica solo en casos muy específicos por la
    Procuraduría General de la Republica, y muy poco por las
    Procuradurías de Justicia de
    las Entidades Federativa, alegándose la carencia
    crónica de recursos de que
    adolece nuestro país.

    Este trabajo presenta una evaluación
    y antecedentes de lo que significa el ácido ribonucleico
    para la genética,
    de cómo evoluciona de un concepto
    Mendeliano de los genes a un concepto
    matemático y de bioquímica, de los procedimientos de
    analisis de ADN descubiertos desde la década de 1980, de
    la situación de la medicina forense en México y de
    las razones culturales, técnicas,
    históricas y de valores que
    afectan la aplicación universal de esta prueba en los
    estudios criminalísticos.
    El propósito es dar una perspectiva y un punto de vista
    sobre la cuestión que sirva para el analisis y el debate de la
    aplicación de la prueba como herramienta cotidiana en la
    aplicación de la justicia en Tamaulipas y en
    México.
    El documento esta preparado sobre la base de información bibliográfica,
    periodística, entrevistas y
    asesorías de expertos. Mi agradecimiento especial para
    todas las personas que colaboraron.
    Ciudad Victoria, Tamaulipas, Otoño del 2003.
    Ernesto Garcia Marin

    2. Introducción.

    El ácido desoxirribonucleico y ribonucleico, ADN
    y ARN, son componentes químicos del núcleo celular.
    En el siglo veinte se ha descubierto su responsabilidad total en la transmisión
    genética de la herencia y la
    preservación de la vida. Estos componentes son los
    "programas
    operativos" de los procesos
    químicos – biológicos, físico –
    químicos, bioquímicos y fisiológicos de la
    vida en la tierra.
    Todos los seres vivos, incluidos los virus lo
    contienen.

    Las características del ADN han permitido su
    aplicación en la medicina forense particularmente por los
    descubrimientos de analisis de la década de 1980.
    Actualmente es de uso generalizado en los países
    desarrollados para la investigación criminalística, para lo cual se han creado
    organizaciones
    que normalizan las pruebas de
    analisis y conjuntan una base de datos de
    las poblaciones humanas particularmente de Europa y
    Norteamérica.

    La aplicación en México de la prueba de
    analisis de los polimorfismos del ADN en la medicina forense es
    aun muy limitada, en contrapartida con países que como
    Argentina con
    menor economía su uso se ha
    generalizado.

    Nuestra hipótesis es que el uso de la prueba de ADN
    en México no es generalizada por la falta de voluntad de
    los personajes que tienen que ver con la toma de
    decisiones, asi como por la falta de participación y
    reclamo ciudadano.
    El documento realiza un analisis retrospectivo y de perspectiva
    de lo que significa el ADN y sus polimorfismos, la
    aplicación de la prueba de este analisis en la medicina
    forense y su aplicación en la criminalística mexicana. Evalúa la
    aplicación que se ha realizado en México y en que
    casos particulares se ha utilizado y porqué.
    También se evalúa la situación actual de su
    uso para la impartición de la justicia en la
    federación en general y en las entidades federativas en lo
    particular. Se discute sobre la base de los resultados su uso en
    el país, las razones y sinrazones de su aplicación
    en la justicia, todo en un marco de crítica racional sobre
    la base empírica obtenida.

    3. Antecedentes y marco
    teórico

    Desde el inicio de la humanidad la gente se pregunta
    como se heredan los caracteres de padres a hijos, y aunque muchas
    veces los hijos se parecen mas a un padre que al otro,
    generalmente sus características son una mezcla de ambos
    progenitores y de los abuelos. Durante siglos la humanidad ha
    estudiado empíricamente la mejora de la raza con buenos
    resultados como para seleccionar razas de caballos más
    veloces, perros más
    dóciles, maíces más productivos, flores
    más bonitas, etcétera, y lo han hecho mediante el
    control de la
    reproducción seleccionando a los individuos
    con las características buscadas para cruzarlos
    controladamente. Sin embargo no existía ningún
    método
    científico para predecir el resultado del vástago
    buscado. Hasta el año de 1865 un monje agustino Gregorio
    Mendel
    descubrió que la herencia esta
    determinada por un factor discreto, que después se
    conocieron como genes, los cuales son heredados de los padres. Su
    estudio riguroso y matemático permitió que la
    genética se transformara de arte a ciencia. El
    inicio con los padres de guisantes y contando el número de
    hijos con diferentes características de color,
    estableciendo asi relaciones proporcionales de la herencia que se
    cumplían conforme a pronostico aunque en ocasiones
    había variaciones. En su trabajo en ves de ver a la planta
    de chícharos entera Mendel se
    enfocó en las características de los frutos,
    encontrando colores verde y
    amarillo. Como resultado de sus experimentos
    él concluye razonablemente que los padres tenían
    dos pares de genes, que los genes no se mezclan, que la herencia
    sigue ciertas reglas y que los genes son cosas reales. Mendel
    publicó su trabajo en 1865 con el título "Experimentos de
    Hibridación de Plantas" y les
    envió copias a muchos científicos en diferentes
    países, sin embargo su concepto abstracto del gen no se
    apreció por los naturalistas de la época, que
    estaban en le paradigma solo
    de clasificar y categorizar seres vivos. Asi que el trabajo de
    Mendel fue confirmado por tres científicos independientes
    hasta 1900. Ya en esa época se aceptaba a la célula
    como la unidad más pequeña e indivisible de vida y
    se concluye que los genes están dentro de la célula. El
    estudio de la célula
    y el comportamiento
    de los cromosomas en la
    reproducción celular confirmó el
    concepto de gen de Mendel en el siglo 20. Al estudiar la
    división celular o mitosis usando
    tinturas se pudo apreciar el proceso de
    transmisión de herencia en el ámbito celular y se
    enfocó el problema en el ámbito molecular esto es
    ¿ en qué parte del núcleo de la célula
    estaban los genes conceptualmente descubiertos por Mendel? La
    genética Mendeliana no puede explicar completamente la
    salud y el
    comportamiento
    humano. Los genetistas de la primera mitad del siglo
    erróneamente pensaron que podría mejorarse la raza
    humana mediante mejoras cruzas y de hecho llevaron a los
    experimentos barbáricos y horripilantes de los Nazis de
    1933 a 1945 que desacreditó la eugenesia
    humana.

    El ácido ribonucleico, ADN, como un componente
    químico del núcleo celular fue descubierto mas o
    menos en la misma época en que Mendel y Darwin publicaron
    sus hallazgos. Pero a principios del
    siglo 20 las proteínas
    grandes eran consideradas como mejores candidatos para poder
    transmitir la herencia celular. Aunque se sabía que el ADN
    es una molécula grande, su estructura es
    un sistema
    monótono de repetición de cuatro moléculas,
    como si fuera un polímero, por lo que se desacreditaba con
    posibilidades de transmisión hereditaria. Además no
    tenía ninguna función
    especifica en el metabolismo o
    fisiología celular que pudiera evidenciarse
    en la época por los estudiosos.

    Los trabajos posteriores de Archibal Garrod en 1902
    confirmados posteriormente por George Beadle y Edward Tatum en
    1941 confirmaron que el ADN y las proteínas
    son moléculas clave en el núcleo de la
    célula. Posteriormente se descubre que un gen genera una
    proteína y que los genes están constituidos de ADN.
    Que las bacterias y
    virus tienen
    ADN también y que la molécula de ADN esta
    configurada como una escalera retorcida y que una mitad de la
    escalera esta templada para copiar toda, que el ácido
    ribonucleico ARN es un intermediario o mensajero entre el ADN y
    la proteína. La molécula de ADN se compone de A, T,
    C y G (adenina, guanina, citosina y timina) que según el
    orden elaboran el código
    o programa de
    fabricación de proteínas y por ende la construcción celular, de tejidos y
    organismos como el hombre. Las
    siglas del ácido desoxirribonucleico, formado por un
    azúcar
    (2- desoxi-D-ribosa), ácido fosfórico y bases
    nitrogenadas Su estructura es
    la de una doble hélice en la que las bases se encuentran
    situadas en el interior de la molécula y los grupos fosfato se
    disponen en el exterior. Las bases nitrogenadas se unen siempre
    del mismo modo (adenina con timina y guanina con citosina) a
    través de puentes de hidrógeno.

    El ADN se presenta físicamente en el
    núcleo de la célula empaquetado a distintos
    niveles, formando los cromosomas.
    Reciben la denominación de ácidos
    nucleicos porque el ADN fue aislado por primera vez del
    núcleo celular, pero tanto el ADN como el ARN se
    encuentran también en otras partes de las células.
    Hay dos tipos de ácidos
    nucleicos: el ácido desoxirribonucleico (ADN) y el
    ácido ribonucleico (ARN). Son componentes principales de
    las células, y
    constituyen, en conjunto, entre el 5 y el 15% de su peso seco. Un
    gen es una secuencia de nucleótidos de ADN y el ARN
    informa si algo se ha modificado. Algunos virus almacenan
    información genética de ARN de tal
    forma que el ARN fue la primera molécula genética
    en la evolución de la vida en la tierra. Las
    mutaciones son cambios en la información genética y
    algunos tipos de mutaciones son automáticamente reparadas.
    El ADN es el soporte físico que contiene toda la
    información genética de un organismo,
    definiéndose como gen cada una de las porciones de su
    molécula que se pueden traducir en una proteína. El
    orden en que se presentan las cuatro bases es el que determina el
    código
    genético.

    El ADN fue aislado por primera vez de las células
    del pus y del esperma de salmón, y estudiado intensamente
    por el suizo Friedrich Miescher, en una serie de investigaciones
    comenzadas en 1869. Lo llamó nucleína debido a su
    participación en el núcleo celular. Se necesitaron
    casi 70 años de investigación para poder
    identificar por completo los sillares principales y la estructura
    del esqueleto de los ácidos nucleicos.

    A fines del siglo 20 con el avance de las modernas
    técnicas y aparatos de analisis
    químico con ayuda de computadoras
    de alta capacidad de proceso se
    deriva en una prueba que ha venido a revolucionar la medicina
    forense genética.

    4. Estructura del
    ADN

    La molécula de ADN está constituida por
    dos largas cadenas de nucleótidos unidas entre sí
    formando una doble hélice. Las dos cadenas de
    nucleótidos que constituyen una molécula de ADN, se
    mantienen unidas entre sí porque se forman enlaces entre
    las bases nitrogenadas de ambas cadenas que quedan
    enfrentadas.

    La
    unión de las bases se realiza mediante puentes de
    hidrógeno, y este apareamiento está condicionado
    químicamente de forma que la adenina (A) sólo se
    puede unir con la Timina (T) y la Guanina (G) con la Citosina
    (C).

    Figura
    1. Estructura molecular del ADN. Fuente: Dolan Laboratories.
    2003.

    Figura 2. Ideograma de la doble hélice del ADN.
    Fuente: Cal Teba. 2001.

    La estructura de un determinado ADN está definida
    por la "secuencia" de las bases nitrogenadas en la cadena de
    nucleótidos, residiendo precisamente en esta secuencia de
    bases la información genética del ADN. El orden en
    el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena en el
    ADN es, por tanto, crítico para la célula, ya que
    este orden es el que constituye las instrucciones del programa
    genético de los organismos.

    Conocer esta secuencia de bases, es decir, "secuenciar"
    un ADN equivale a descifrar su mensaje
    genético.

    La estructura en doble hélice del ADN, con el
    apareamiento de bases limitado ( A-T; G-C), implica que el orden
    o secuencia de bases de una de las cadenas delimita
    automáticamente el orden de la otra, por eso se dice que
    las cadenas son complementarias. Una vez conocida la secuencia de
    las bases de una cadena, se deduce inmediatamente la secuencia de
    bases de la complementaria.

    El modelo de la
    doble hélice de Watson y Crick ha supuesto un hito en la
    historia de la
    Biología.
    La figura 3 muestra un
    ideograma de cómo es la estructura ideada.

    Figura 3. Ideograma de la célula y la estructura
    de ADN en el núcleo de la misma. Fuente: Dolan
    Laboratories. 2003.

    El ADN (ácido desoxirribonucleico) es el material
    genético de la célula y aparece en forma de
    filamentos débilmente entrelazados a modo de ovillo,
    denominados cromatina, en el núcleo de cada célula.
    Justo antes de que la célula se divida, la cromatina se
    espiraliza y se forman los cromosomas. La molécula de ADN
    es una larga doble hélice enrollada sobre sí misma,
    semejante a una escalera de caracol. En ella, dos ramales
    compuestos de moléculas de azúcar
    (desoxirribosa) y fosfatos, se conectan gracias al apareamiento
    de cuatro moléculas denominadas bases, que forman los
    eslabones de la escalera. En los eslabones, la adenina se aparea
    con la timina y la guanina con la citosina. Así mismo,
    cada par de bases está unido por un enlace de
    hidrógeno. Un gen es un segmento de ADN que tiene una
    determinada función y
    está constituido por una secuencia específica de
    bases.

    5. El ADN y la medicina
    forense.

    El analisis de ADN y sus implicaciones forenses son
    analizados por varios científicos, particularmente de
    Estados Unidos
    y Europa. Cal Teba,
    Mª Luisa (2001) señala que desde hace casi un siglo
    para estudiar las variaciones entre individuos en medicina
    forense se utilizan los llamados Polimorfismos Genéticos o
    Marcadores Genéticos – Moleculares. Son caracteres
    estables que se transmiten por herencia Mendeliana simple y
    constituyen una expresión de la diversidad genética
    entra individuos en la misma especie.

    En la capacidad que tiene el ADN de hacer copias o
    réplicas de su molécula, es un proceso fundamental
    para la transferencia de la información genética de
    generación en generación. Esta capacidad es el
    fundamento del analisis que se aplica en la metodología de la medicina forense como
    veremos mas adelante. Las moléculas se replican de un modo
    semiconservativo. La doble hélice se separa y cada una de
    las cadenas sirve de molde para la síntesis
    de una nueva cadena complementaria. El resultado final son dos
    moléculas idénticas a la original

    Figura 4. Proceso esquemático de
    replicación de una molécula de ADN. Fuente: Dolan
    Laboratories. 2003.

    Las características que debe poseer un marcador o
    identificador genético serian entonces según Cal
    Teba (2001):

    • Patrón de herencia bien
      establecido
    • Elevado polimorfismo
    • Alto grado de heterocigosidad.
    • Detección fiable de los alelos
    • Datos poblacionales de frecuencias alélicas
      genotípicas y/o fenotípicas
      establecidas.
    • Herencia independiente de otros marcadores
      usados.
    • Tasa de mutación baja.
    • Analizable mediante un método
      simple, rápido y reproducible.
    • Requerir poco material para el analisis.

    Hace pocos años en medicina forense los analisis
    estaban basados en marcadores genéticos convencionales
    tales como antígenos eritrocitarios (de eritrocitos) y
    leucocitarios, proteínas séricas o del suero de la
    sangre, y
    enzimas
    (catalizadores de digestión o construcción biológica) de
    eritrocitos. En la década de 1980 se presenta un avance
    científico espectacular en el campo de la genética
    forense a raíz del descubrimiento de las regiones
    hipervariables del ADN (Jeffreys, 1985). A partir de ese momento
    se empieza a generalizar en la medicina forense de los
    países desarrollados el uso de la prueba de ADN para
    identificador de características y herencias
    genéticas y va disminuyendo el uso de las pruebas
    convencionales, debido a la alta estabilidad, variabilidad
    bioquímica del ADN y a la alta sensibilidad de la
    técnica de analisis. Asi que hoy en día la prueba
    predilecta y más confiable para el estudio de casos de
    genética forense es la llamada prueba de ADN motivo de
    este estudio.

    Como vimos anteriormente, el ADN es la molécula
    que contiene toda la información genética del
    individuo, dicho de otra forma es el programa de constitución del organismo. El genoma
    humano esta compuesto por 3.3 mil millones de pb. En él
    existen dos tipos de ADN:

    1. El ADN expresivo que es el 30%, también
      llamados codificante tiene una función conocida, por
      ejemplo la expresión de un gen cuyo producto
      final es una proteína. Soporta gran presión
      selectiva por lo que tiene una variabilidad de regiones
      limitada.
    2. El ADN no codificante que es el 70%. Comprende
      funciones de
      ADN transcripcionalmente inactivas de funciones
      diversas como promotores de genes y en muchos casos de
      función desconocida o de función aparente. Este
      tipo de ADN puede ser altamente polimórfico y tiene
      mucha importancia para la identificación forense de
      individuos. Se puede dividir en:
    • ADN de copia única, y
    • ADN de copia múltiple.
    1. ADN Repetido en Tandem que es el 10% del genoma.
      Según Vogt (1990) las secuencias de estos se repiten por
      el genoma de dos maneras:
    2. Tipo I: grandes bloques formados por repeticiones de
      distintas unidades de longitud variable, corresponden a los
      satélites clásicos I a IV y al
      satélite afloide.

      Tipo II: pequeños bloques distribuidos a lo
      largo de todo el genoma, con un numero variable de unidades
      de repetición secuencial. Pertenecen a este grupo
      minisatélites y microsatélites.

      ADN Satélite: las secuencias repetitivas se
      reproducen en grandes bloques de diversas unidades de
      complejidad variable, con una longitud de 100 Kb a varios Mb.
      Este tipo de ADN no se transcribe y al organizarse de un modo
      tan complejo es difícil su aplicación en la
      medicina forense.

      ADN Minisatélite: los bloques de este tienen
      una longitud de 0.1 a 40 Kb y el término se refiere a
      Jeffreys et al. (1985)

      ADN Microsatélite: tienen un tamaño
      muy pequeño de hasta 400 pb, por lo que son
      idóneos para la prueba de PCR usada en forense.
      También se conocen como Short Term Tandem
      Repeat
      STR, ya que la repetición oscila entre 4 a
      7 pb. Se encuentran en todo el genoma

      En el genoma humano los satélites no se distribuyen al azar. Se
      localizan en las regiones subterminales de los cromosomas que
      son los implicados en los fenómenos de
      replicación sobre todo en la línea germinal
      masculina.

    3. ADN Repetitivo Disperso que es del 15 al 20% del
      genoma. Esta representado por dos familias que se diferencian
      en el número de nucleótidos en la unidad de
      repetición.

    SINE Short Interpersonal Nuclear Elements: son
    menores de 500 pb y representan el 10% del genoma. La familia
    más representativa y mejor estudiada es la Alu. Las
    secuencias de la Alu son más abundantes en el genoma
    humano. Hay otras familias como la NTS Non Transcribe
    Spacer.
    LINE Long Interpersonal Nuclear Elements:
    suponen del 2 al 5% del genoma y tienen secuencia de mas de 500
    pb. La LINE 1 o L1 es la familia
    más abundante en los humanos y también se conoce
    como Kpm

    Polimorfismos del ADN.
    Este termino se uso por Ford en 1940 (Cal Taeba, 2001) para
    designar la aparición conjunta en un lugar de dos o
    más formas discontinuas de una especie. En el ADN
    codificante exista poca variabilidad individual y los
    polimorfismos suelen acompañarse de modificaciones
    fenotípicas. En el ADN no codificante por el contrario al
    no estar sujeto a presión
    selectiva puede soportar grandes niveles de variabilidad sin que
    produzca representación fenotípica. Esta
    característica hace que este ADN sea la mayor fuente para
    la investigación en medicina forense.

    6. Técnicas de
    análisis de estos polimorfismos en
    genética forense.

    La técnica de analisis directo del ADN y no de la
    proteína generada se ha aplicado con los descubrimientos
    de 1980 en adelante. Con el trabajo de
    Wyman y White en 1980 (Cal Teba, 2001), dieron el primer paso en
    la identificación genética por medio del ADN al
    descubrir un locus polimórfico caracterizado por un numero
    de fragmentos de restricción de longitud variable, aunque
    el verdadero uso en la medicina forense se inicia por Jeffreys y
    colaboradores en 1985.

    Los primeros polimorfismos en utilizarse fueron los
    denominados RFLPs, "Restriction Fragment Lenght
    Polymorphism
    ", basados en la longitud de los fragmentos de
    restricción. Se identificaron mediante la digestión
    de ADN con enzimas de
    restricción y posteriormente de hibridación con
    sondas. El problema de la legalidad de inmigración en el Reino Unido fue el primer
    caso resuelto con estos polimorfismos.

    Primero se usaron las sondas multilocus "Multilocus
    Probe
    ", MLPs, que detectaron múltiples loci
    Minisatélite bajo condiciones poco rigurosas de
    hibridación, dando lugar a un complejo patrón de
    bandas. Estas bandas corresponden a distintos loci con secuencias
    relacionadas entre sí y se consideró que
    serían prácticamente distintas para cada individuo
    por lo que se les llamó Huellas Genéticas o
    Huellas de DNA
    (DNA fingerprints).

    Después se comienza a utilizar sondas que
    detectan un único locus (Wong et al. 1987.) denominadas
    sondas unilocus (Single Locus Probe, SLPs) que
    proporcionan dos bandas según el carácter
    homocigótico (semen u óvulo) o
    heterocigótico (células de tejidos) del
    individuo. De esta manera se obtiene un perfil unilocus de ADN
    (ADN profile).

    En el 2003 solo las sondas unilocus debidamente
    caracterizadas están reconocidas para usos forenses. Han
    supuesto una mejora en la investigación biológica
    de la paternidad, pero aun tienen limitaciones importantes para
    su uso en criminalística.

    Un método alternativo y en determinados casos que
    el uso de sondas unilocus utilizadas en la medicina forense es el
    método de la Reacción en Cadena de la Polimerasa,
    PCR (Polimerase Chain Reaction).

    En los últimos años se ha avanzado en
    varias tecnologías encauzadas al analisis de STRs tales
    como Light Cycler®, tecnología que
    permite llevar a cabo en una misma reacción las
    amplificaciones por PCR de un fragmento de ADN; Chips o
    Arrays de ADN, que es un sistema en
    miniatura que incorpora cientos de miles de sondas en fases
    alélicas y que según los expertos promete mucho;
    Espectrofotometría de Masas, que permite el
    analisis en cuestión de segundos pero requiere de cadenas
    superiores a 100 pb. Los productos a
    analizar se cristalizan, se volatilizan y se someten a un
    campo
    eléctrico en fase gaseosa, determinándose asi
    el peso molecular del ADN en función del tiempo de
    recorrido.

    Para separar el ADN satélite del ADN
    genómico restante se somete a centrifugación en
    gradiente de densidad de Plata
    – Sulfato de Cesio obteniéndose dos bandas, la de menor
    densidad
    corresponde al ADN satélite.

    Se distinguen los tipos I, II, III y IV en
    función de su densidad que esta en relación con el
    mayor o menor contenido de GC (Singer, 1982) y representan del 2
    al 6% del genoma.

    7. Analisis de los
    polimorfismos de ADN por PCR

    La técnica de reacción en cadena de la
    Polimerasa, PCR, ha venido a solucionar muchos problemas del
    analisis de ADN. Esta es una técnica de ampliación
    in vitro. Se basa en la facilidad que tiene el ADN para
    desnaturalizarse y renaturalizarse. La reacción se lleva a
    cabo en un termociclador (aparato que genera ciclos
    térmicos) que se maneja automáticamente a tres
    temperaturas:

    • 93 -95°C para desnaturalizar el ADN
    • 50 -65° para el acoplamiento de los
      primers
    • 72° para que la polimerasa copie la cadena de
      ADN

    Algunos autores destacan que la tecnica de PCR
    permite identificar con gran exactitud el polimorfismo por lo que
    es de mucha utilidad en la
    medicina forense. Los sistemas de
    electroforesis semiautomáticos y secuenciadores
    automáticos han permitido además automatizar el
    analisis por esta tecnica
    facilitando su aplicación cotidiana y permiten errores
    mínimos si no es que nulos estadísticamente y es
    relativamente sensible con pequeñas cantidades de
    ADN.

    La tendencia actual de los laboratorios es a la
    utilización de la tecnica de STRs simples o
    hipervariables, granes multiplexes y multiplexes de STRs de
    pequeño tamaño ya que la degradación del ADN
    es inversamente proporcional al tamaño de los
    fragmentos.

    Por otra parte el ADN de la mitocondria también
    se ha utilizado en analisis para identificar genética de
    poblaciones mas no es útil para el estudio
    biológico de la paternidad, ya que este solo se hereda por
    la madre.

    El ADNmt es ideal para el analisis de cabellos y
    pelos sin bulbo, restos óseos y vestigios en los que no
    sea posible encontrar el ADN del núcleo de la
    célula.

    El cromosoma Y de herencia exclusiva paterna
    también esta suscitando interés
    antropológico y medico legal.
    Para el analisis es necesario la estandarización de las
    muestras. Para que cualquier polimorfismo de ADN pueda ser
    utilizado en la practica forense es necesario conocer unos
    valores que
    expresan la frecuencia de aparición de esta
    variación en la población. Es imprescindible que existan
    unas directrices aceptadas por toda la comunidad
    científica de la región o país con lo que se
    facilita la creación de bases de datos
    comunes y la realización de contrapericiales.

    En Europa varios países constituyeron en 1989
    European DNA Profiling Group (EDNAP). En
    Norteamérica se tiene el Scientific Working Group on
    DNA Analysis Methods (SWGDAM)
    . Representantes de ambas
    constituyen la DNA Commission of the International Society for
    Forensic Genetics
    (ISFG) que también emite
    recomendaciones anuales sobre el uso de marcadores de ADN con
    fines forenses incluyendo nomenclatura,
    estadística, gestión
    y control de
    calidad.

    La figura 4 muestra algunos
    polimorfismos de ADN amplificables mediante tecnica de PCR
    utilizados en Genética forense. En el se pueden
    diferenciar los autosómicos, los de cromosoma, los de
    minisatélite y los de Microsatélite, los de
    secuencia y los de ADN repetidos en Tandem. La figura 1
    representa el ideograma del cromosoma Y del hombre
    utilizado en medicina forense para identificación de
    poblaciones.

    Figura 5. Polimorfismos de ADN (PCR) utilizados en
    genética Forense. Fuente Cal Teba (2001)

    Figura 6. Ideograma del cromosoma Y. Fuente: Cal Teba
    (2001) modificado de Jobling et al. 1997.

    Figura 7. Localización de algunos loci
    polimórficos en el cromosoma Y humano. Fuente: Cal Teba
    (2001).

    8. Resultados y
    discusión.

    Según Martínez y Saldívar (1982) el
    desarrollo de
    la medicina legal
    en la provincia mexicana ha sido lento debido a factores
    económicos y el poco interés de
    los médicos en esta disciplina. La
    falta de local apropiado, lo reducido de sus emolumentos y la
    responsabilidad que se adquiere hace que halla
    pocos médicos en esta materia.

    Por otra parte, hemos visto que la tecnología de
    analisis de ADN para usos forenses esta disponible; los costos
    comparativos, la complejidad y la dificultad de la
    aplicación de la prueba han disminuido significativamente.
    Podría decirse que un laboratorio
    con el equipo, con personal
    técnico capacitado y un banco de datos de
    genética de ADN de la población de estudio, puede cumplir los
    requisitos de certificación para el analisis asi como
    prueba forense de aplicación en la justicia
    mexicana.

    En México la aplicación de esta prueba
    forense y de muchas otras, son aun poco empleadas. Algo tiene que
    ver con la disponibilidad o escasez permanente de recurso
    fiscales y tributarios, enfermedad crónica que padece el
    erario publico desde el periodo colonial. Y además de la
    falta de voluntad y capacidad de los personajes encargados de la
    toma de
    decisiones y la poca acción ciudadana, como sucede en
    la mayoría de las cuestiones en México, desde el
    futbol hasta
    el pago de impuestos.

    El estado de
    Tamaulipas no es por supuesto ajeno a esta problemática
    del sistema mexicano y informa que la prueba de ADN forense se
    aplica limitadamente desde hace 30 meses (Luna, 2003 Com Per.).
    Algunos médicos entrevistados en ciudad Victoria
    consideran que es importante la aplicación de la prueba,
    pero la mayoría considera que hay falta de recursos
    económicos. Por otra parte el Abogado neolonés (que
    dictara una conferencia sobre
    criminalística hace unos días) Isai Rosas Ramírez
    comenta que en el estado de
    Nuevo León está utilizándose "muy bien", y
    que esto se hace, según su parecer, por la voluntad del
    poder
    ejecutivo a través de la procuradora general de
    justicia de esa entidad, que incluso está tratando de
    elevarla a categoría de ley, para
    aplicación universal; pero, que aun hay mucha
    oposición en el congreso y que las razones que argumentan
    los legisladores locales son las de tipo económicas. Hay
    que considerar a este respecto de las leyes, que en
    México en materia de
    legislación la voluntad politica de las elites legislantes
    está históricamente supeditadas al poder
    ejecutivo prevaleciente, asi que desde la Constitución de 1917, por ejemplo, se
    elevó a categoría de ley el derecho al
    trabajo, a la vivienda, a la educación, a
    la tierra, a
    la seguridad
    social, y que aun hoy no se puede cumplir universalmente (
    Garcia Marin, 2003). Asi que el asunto de elevar a
    categoría de ley el uso de la prueba de ADN debe de ser
    visto, de nuevo, desde la óptica
    de la falta de voluntad política de los
    gobernantes mexicanos.

    En efecto, la dependencia de México para el caso
    de la prueba forense de ADN se aparece continuamente ilustrada.
    Los medios
    informativos por ejemplo el
    periódico El Economista de México, La Jornada,
    El Norte, y la revista
    Proceso encontramos 1,140 documentos
    relacionados a asuntos forenses con el ADN en los que indican que
    técnicos extranjeros harán el estudio pericial en
    algún determinado caso.

    La falta de técnicos y el poco interés
    para configurar y mantener unas bases de datos
    eficaz es un problema existente. En el caso muertas de
    Juárez
    , el Economista reporta que México
    contrató a especialistas de Estados Unidos,
    Alemania y
    Argentina para
    las investigaciones
    sobre los más de 300 casos de mujeres asesinadas en Ciudad
    Juárez, Chihuahua (norte), según informa el vocero
    de la Fiscalía Mixta que Investiga los Homicidios
    de Mujeres registrados en Ciudad Juárez. Asi, se
    contrató a Mark Benecke, de Alemania,
    especialista en exámenes de ADN y Entomología
    Forense, al argentino Raúl Zajacskowki, para capacitar al
    personal de la
    Procuraduría de Justicia Estatal y en especial a los de la
    Fiscalía Mixta en técnicas para
    preservar la escena del crimen y en servicios
    periciales.

    Hay mucha certeza sobre la validez y seguridad de la
    prueba de ADN para demostrar la vinculación delitos, como
    hemos constatado en la revisión bibliográfica de
    las pruebas científicas empíricas que lo
    demuestran. Y se observa que el avance de la tecnología
    hace que cada vez esta prueba sea más certera en sus
    conclusiones. Sin embargo aun en ocasiones se tienen dudas. Asi
    por ejemplo en Nueva York, el Economista reporta que se liberan a
    tres hombres condenados por pruebas de ADN y que fueron detenidos
    durante más de 18 años por la violación y
    muerte de una
    joven de Long Island, en 1984. Luego de someterse a una nueva
    serie de pruebas de ADN estas revelaron que eran inocentes y
    fueron liberados en 2003. Ellos habían sido condenados a
    30 años de prisión por la violación y
    muerte de una
    adolescente de 15 años, en un suburbio de Nueva York. Uno
    de ellos había confesado pero se retractó luego y
    los tres habían clamado su inocencia desde entonces. Una
    primera serie de pruebas de ADN había puesto en duda la
    condena, a principios de los
    90, pero ello no fue considerado concluyente por los jueces. Una
    nueva serie de pruebas efectuadas con tecnología
    más moderna, demostró que el esperma encontrado en
    la víctima no pertenecía a ninguno de los tres
    hombres. Luego del pago de una fianza de 300.000 dólares,
    fueron liberados en la noche del miércoles. Las nuevas
    pruebas de ADN fueron financiadas principalmente por el
    "Innocence Project", (Proyecto
    Inocencia) una ONG creada por
    una facultad de derecho neoyorquina, la Cardozo Law
    School
    , especializada en la reapertura de casos en los que
    los condenados claman su inocencia y pueden eventualmente ser
    absueltos gracias a los últimos avances en materia de
    pruebas de ADN.

    Las organizaciones
    civiles tienen un gran efecto en la promoción de la aplicación de estas
    pruebas por el efecto de los costos. Se sabe
    que la formación de empresas tipo
    ONG y otras
    asociaciones civiles de defensa ciudadana son propiciada por el
    sistema tributario fiscal de los países, por esta
    razón en los desarrollados, particularmente en EUA,
    Holanda, Inglaterra y
    otros países de Europa se han creado una gran cantidad de
    ONG en defensa de los indiciados como contrapeso a las fallas
    inherentes del sistema de justicia. En este sentido, el sistema
    tributario fiscal mexicano es muy complicado y no propicia la
    formación de estas asociaciones hasta el 2003 lo dificulta
    y en ocasiones lo imposibilita. Las reformas del 2001 han
    propiciado la integración de asociaciones civiles para
    servicios de
    salud o educación (TELETON,
    Fundación TV Azteca), pero la mayoría del resto de
    las donaciones captables no son legalmente deducibles por la ley
    del ISR. El efecto es que los servicios de ecología, de seguridad, de
    apoyo a la pobreza, entre
    otros, como los estudios para la defensa de inocentes por
    métodos
    forenses, no captan recursos económicos de donaciones en
    México, por lo que el ejemplo de lo sucedido en la
    metrópoli yorkina no es factible repetirse en
    México. De nuevo aparece la falta de voluntad.

    Otro aspecto a la demanda de la
    aplicación de la prueba de ADN queda explicado mas por
    razones de decisiones políticas
    que son aparejadas a las humanitarias que actúan a lo
    apremiante del caso que por un sistema racional. Digámoslo
    mas por una urgencia que por un aspecto crónico, mas por
    un "bomberazo" que por sistema. Asi por ejemplo realizan Plan para
    detener crímenes en Ciudad Juárez
    y se reporta
    que el Gobierno de
    México define un ambicioso plan de seguridad
    que busca detener la ola de crímenes. El ministro mexicano
    de Gobernación o del Interior, Santiago Creel, explica que
    el programa pretende combatir la inseguridad
    desde sus más profundas raíces mediante un
    trabajo coordinado
    que involucra a autoridades de todos los
    niveles y a organizaciones no gubernamentales (ONG). Admite que
    el Gobierno ha
    respondido al clamor popular
    , que exige justicia tras una
    década de impunidad, y que además cumple así
    con un llamado del Congreso y de la Comisión Nacional de
    Derechos
    Humanos (CNDH); y expresa que la situación que afecta
    a Ciudad Juárez agravia a todos los mexicanos y que
    además plantea "un gran reto para el México nuevo,
    el de la democracia y
    el de la corresponsabilidad entre gobierno y ciudadanos". Por su
    parte el alcalde de Ciudad Juárez, se suma a le
    retórica politica e informa de que "en el proyecto
    participarán 1.200 policías municipales, 300 de la
    Policía Federal Preventiva (PFP) y 200 más de la
    Policía Judicial del Estado, además de efectivos de
    la Procuraduría General de la República (PGR). Y
    ahonda diciendo "que el programa es el resultado de un conjunto
    de esfuerzos, trámites y gestiones que emprendió
    (él por supuesto) en junio del año pasado. He
    aquí el significado, se hace necesario que la demanda de un
    régimen democrático al cual esta naciendo
    México, se establezca para que sea importante aplicar las
    pruebas "costosas" de ADN, asi sea con científicos
    extranjeros. El hecho es totalmente loable, lo que es importante
    resaltar es que la aplicación de esta prueba se adolece en
    México mas por razones de prioridades políticas
    que de aspectos como la falta de recurso
    económico.

    Y los activistas sobre cuestiones políticas de
    interés particular, como los de género, no
    tardan en subir al estrado. Asi, la presidenta de la
    Comisión Especial de Seguimiento a las investigaciones de
    los asesinatos de las mujeres en Ciudad Juárez de la
    Cámara de Diputados, legisladora, del Partido del Trabajo
    (PT), también exhortó al Ejecutivo a que
    mantenga el interés sobre la violencia de
    género
    . Y recalca "que la Comisión que encabeza
    insistirá en que se instale lo antes posible un laboratorio de
    ADN en Ciudad Juárez" y señaló que ya se
    cuenta con otros equipos necesarios para la investigación,
    aunque resta la capacitación del personal.

    El uso de las pruebas de ADN se empieza a aplicar en
    México a fines del gobierno de Zedillo, en 1999 en la
    Procuraduría General de la República (PGR). En el
    caso Servicios Periciales de la PGR cuenta con 16 especialidades,
    entre ellos el laboratorio de Genética Forense, donde se
    emplean las técnicas de punta para identificar a las
    personas a través del genoma humano (ADN) y un banco de datos
    genético conocido como "Codis'' utilizado en Europa y
    Estados Unidos. Este equipo se implementó en el 2000 a
    propuesta del presidente Vicente Fox con autonomía y
    más recursos, y labora ya en forma autónoma e
    independiente a cualquier organigrama de la
    PGR, para ser utilizado tanto en investigaciones criminales como
    de particulares. Las nuevas instalaciones cuentan con las
    características de funcionalidad, espacio,
    ventilación, iluminación, comodidad y seguridad en su
    laboratorio, dando paso a los trámites de
    certificación de técnicas, equipos y personal bajo
    la norma internacional ISO-9002 en
    Servicios Periciales. Se anunció en el 2000 la
    separación de la PGR de los servicios periciales y la
    institución en respuesta – se comunicó – a la
    puesta en marcha de sus nuevas instalaciones. El proyecto tuvo un
    costo superior a
    los 30 millones de pesos, que estaba prevista por la
    administración del presidente Zedillo, con Jorge
    Madrazo Cuéllar," para fortalecer el trabajo de
    investigación que desde el pasado ha
    sido el dolor
    de cabeza de la PGR"
    .

    Por otro lado la voluntad politica federal se plasma en
    la conformación de Fiscal Especial para Movimientos
    Sociales y Políticos del Pasado de los Programas
    Jurídico Ministeriales. Los objetivos de
    los programas son el de indagar los crímenes de estado de
    las décadas de 1960 y 1970. El del primer eje,
    concerniente a los programas jurídico ministeriales
    consiste en integrar las averiguaciones previas iniciadas y que
    se deban iniciar, con motivo de las denuncias o querellas
    formuladas por hechos probablemente constitutivos de delitos federales
    de su competencia y
    entre las acciones
    destaca la recepción de los 532 casos que envió la
    Subprocuraduría de Procedimientos
    Penales "A" y el análisis y clasificación total de
    los expedientes de queja que integran el Informe Especial
    en que se contiene la Recomendación 26/2001 de la
    Comisión Nacional de los Derechos Humanos. Para tal
    efecto se utilizaran pruebas de ADN en las muestras disponibles
    para elucidar la identidad de
    las víctimas. En el Boletín No. 816 de septiembre-
    2002 la PGR informa que se inauguran curso sobre
    identificación humana por análisis de ADN y que se
    aplicarán los métodos
    más modernos para reaccionar ante diversos ilícitos
    y del 14 al 18 de mayo especialistas de la policía
    científica de Francia
    imparten en la PGR el curso Formación En Biología
    Molecular
    . Y en varios boletines sucesivos se informa sobre
    el avance en la especialidad de la aplicación de esta
    tecnología en el gobierno federal.

    Cabe destacar sin embargo que corresponde a los estados
    la investigación de homicidios en sus correspondientes
    jurisdicciones, y la aplicación de las técnicas
    periciales en las entidades pero en el caso del ADN aun hay
    atraso. En el estado de
    Tamaulipas, por ejemplo, desde hace 30 meses se adquirió
    un equipo para la prueba de polimorfismos de ADN según
    informa el Director de Servicios periciales de la
    Procuraduría de Justicia de la entidad (Luna, 2003 Com.
    Per). A cargo están dos laboratoristas clínicos que
    se entrenan en laboratorio de analisis de ADN de la
    procuraduría del Distrito Federal. En entrevista con
    una laboratorista señala que se han efectuado 150
    muestreos, que se da servicio a
    todo el estado y que las muestras de casos de otras ciudades son
    recolectadas por algún químico designado por
    servicios periciales y se trasladan bajo custodiada policial al
    laboratorio, y que desconocen el costo del
    analisis (o no lo informaron), que no disponen de una base de datos de
    ADN de la población tamaulipeca y que la están
    "formando" sobre la base de los 150 analisis efectuados desde la
    apertura. Las instalaciones de servicios periciales de del
    gobierno de Tamaulipas son de 100 m2 de laboratorio y cuarto de
    revelado; se desconoce – porque no lo informaron – el
    método o métodos usados de analisis – dice que usan
    "todos los métodos" (Tania, 2003). Para una
    estimación del costo de cada analisis podemos considerar
    que en virtud de que cada una de las dos analista tiene un sueldo
    de 6500 pesos mensuales mas prestaciones,
    el costo solo de nomina sin prestaciones
    es de 390,000 pesos en el periodo mencionado, y dividiendo en 150
    analisis arroja un resultado de 2,600 pesos por muestra analizada
    en promedio. Esto no incluye otros costos muy importantes tales
    como reactivos, gastos de
    operación, gastos de
    administración, depreciaciones y
    prestaciones al personal y otros. Asi que sobre esta poca
    utilización del laboratorio es posible que el costo sea
    muy superior a 10,000 pesos que se estima como costo promedio por
    muestra en el método de PCR. Otro dato importante es que
    en Tamaulipas no se dispone de una base de datos referencial
    requerida para validar la prueba de acuerdo al protocolo
    internacional – de lo que se pudo indagar.

    ¿Por qué la prueba no se aplica con de
    acuerdo al protocolo
    internacional en las entidades y porque sí se aplica en el
    gobierno federal? Esta pregunta la responde el Jefe del Servicio de
    Medicina Forense en Nuevo León y ex Director de Servicios
    Forenses de la PGR en la Delegación del mismo estado en
    años anteriores. La historia en esa entidad
    puede arrojar claridad a la historia de las entidades del resto
    de la republica. El estado de Nuevo León adquirió
    al mismo tiempo que la PGR
    un equipo para el analisis, a fines de la década de 1990
    al igual que Tamaulipas. En NL se encontraron con el primer
    obstáculo que fue la carencia de personal capacitado. Se
    envió personal medico y químico a Europa para
    especializarse, regresando a fines de 1990. Entonces ya se
    tenía personal y equipo. Sin embargo aun no se aplica,
    aunque los medios
    informativos y algunas personas digan lo contrario. ¿Por
    qué? Por la razón de la falta de un banco de datos
    de la población neolonesa, que al costo de mil
    dólares por analisis en promedio, por un mínimo de
    mil muestras al menos se requiere un millón de
    dólares para generar el banco de información de
    referencia genética de ADN (Hernández
    Ordoñez, Mario Alberto. 2003. Comunicación personal). El gobierno del
    estado de NL alega que no se dispone de recursos (¿o no
    hay la voluntad politica para canalizarlos?). ¿Por
    qué? Una respuesta considerada sería que la
    mayoría de los homicidios se realizan en los estratos de
    la población con menores recursos económicos por lo
    que no es de interés el aplicar la justicia expedita y
    plena como sería en el caso de la población
    más pudiente económicamente hablando. De hecho las
    pruebas de ADN para paternidad responsable casi siempre son
    pagadas por los interesados. En la cuestión de financiamiento
    privado por la escasez de recursos alegada por el gobierno,
    comentamos con el Dr. Hernández Ordoñez. Él
    considera muy factible la participación de capital
    privado para la generación del banco de datos de ADN en
    cada región del país, pero se requiere la voluntad
    de certificarle o garantizarle a la empresa el
    trabajo para recuperar la inversión, cosa que por razones de
    ideologías o intereses políticos ni siquiera se ha
    ideado por los responsables.

    9. Conclusiones

    La utilización de la prueba de polimorfismos de
    ADN en medicina forense es confiable para establecer
    consanguinidad o parentesco y sirve como huella biológica
    para identificación de personas en la escena de crimen u
    otro acto. Su uso es formalmente utilizado en los sistemas de
    justicia de las naciones desarrolladas y en México ha sido
    aceptada durante la década de 1990.

    La falta del desarrollo de
    una base de datos en cada entidad federativa permanece latente
    por lo que se requiere generalmente atraer peritos
    internacionales para casos específicos que atraen el
    reclamo generalizado de la opinión publica internacional.
    Ninguna entidad esta formalmente preparada para estudios
    forénsico de ADN por esta razón y los medios y
    jefes de laboratorio lo informan de otra manera por lo que el
    público se desorienta.

    Es recomendable fortalecer los recursos
    humanos, técnicos y de conocimiento
    para la medicina legal
    mexicana por lo que la participación de inversión privada puede ser una
    opción que cada gobierno de entidades debe idear en el
    afán de una impartición de justicia expedita. Lejos
    están quedando los tiempos del estado benefactor, nueva
    imaginación se requiere en este campo y en muchos otros de
    la impartición de justicia en México.

    10.
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    Comunicaciones personales y entrevistas.

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      Comunicación personal. Jefe de Servicios
      de Medicina Forense. Facultad de Medicina y Hospital
      Universitario. Universidad de Nuevo León. Av. Madero y
      Gonzalitos. Monterrey NL. Octubre 10 de 2003. E mail
      mahernan[arroba]ccr.dsi.uanl.mx
    2. Luna Franco, Juan José. 2003. Entrevista
      telefónica. Director de Servicios Periciales de la
      Procuraduría de Justicia de Tamaulipas. Octubre 17 de
      2003. Tel (834) 3187100.
    3. Tania. 2003. Comunicación personal.
      Laboratorista de ADN en la Direccón de Servicios
      Periciales de la Procuraduría de Justicia de Tamaulipas.
      Octubre 17 de 2003. Tel (834) 3187100.

     

     

    Autor:

    Ernesto Garcia Marin
    Doctorante en Ciencia Politica
    Universidad Internacional de America en Ciudad
    Victoria

    29 de Septiembre de 2003

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