Análisis microbiológico del agua

2. Marco
   teórico
3. Experimentos
4. Objetivos
5. Conclusión
6. Bibliografía
7. Anexos

INTRODUCCIÓN:

Los miembros de la familia
Enterobacteriaceae son bacilo gram negativos, inmóviles o
móviles con flagelos. Peritricos se desarrollan en
medios
artificiales y todas las especies forman ácido o
ácido y gas a partir de
glucosa. Su composición antigénica es un mosaico
que interrelaciona serológicamente varios géneros y
aun familias, muchas de estas bacterias son
parásitos de animales y otros
patógenos.

Para enjuiciar la calidad de las
aguas se recorre a parámetro físico químico
y biológico. Los parámetros bacteriológicos
tienen mayor importancia para dictámenes higiénicos
; es preciso hallar el número de gérmenes
saprófilos o de coli y de bacterias
procedentes del intestino humano como indicadores de
la
contaminación.

Conviene destacar la importancia que tienen las
cifras de coli y coliformes, pertenecientes a las enterobacterias
que fermentan lactosa con producción de gas y
ácido. Para determinar el número de estas bacterias
se suele emplear medio selectivo de endo.

MARCO
TEÓRICO

Bacteria
Coliforme:

Incluyen E. Coli y otras bacterias que se asemejan
morfológica y fisiológicamente. Estos M.O. con
frecuencia difieren entre si en características pequeñas. Las
bacterias coliforme suelen encontrarse en el aparto intestinal
del hombre y
animal. E. Coli, rara vez se encuentra fuera del
intestino

Las bacterias coliformes son bacilos cortos, gram negativos
que fermentan la lactosa y forman ácido y gas.

Son anaeróbios
facultativos, se multiplican a mayor rapidez a temperatura
entre 30 y 37 ºC, crecen a gran abundancias en medios
corrientes, como caldo y agar.

La colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de
metileno) tienen 2 a 4 mm de diámetro, un centro grande de
color oscuro e
incluso negro, y tienen brillo verde metálico cuando se
observan con luz
refleja.

Se han creado otras pruebas para
diferenciar tipos de bacterias coliformes, suelen emplearse 4 y
se han juntado sus iniciales en la palabra nemotécnica
IMViC (Indol, Rojo Metilo (R.M.), Borges –
Proskauer (V:P) y utilizada de citrato.

La reacción de IMViC de algunas bacterias coliformes
como E.coli ++ –, significa que el M:O: produce Indol y es
positivo al rojo metilo y negativo al V.P.

Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa
y positiva.

Se considera que todas las bacterias coliformes, tienen
importancia en el H2O desde el punto de vista
sanitario aunque muchos autores an tratado de diferenciar el tipo
fecal (e.coli) y el nofecal (A: aurogenes)

Análisis sanitario del H2O

El diagnostico de las colonias coliformes en la muestra de
H2O se basa en la capacidad de dicho M:O: para
producir gas a partir de la lactosa.

Filtración:

Es un medio eficaz de eliminar M.O. y otras sustancias de
suspensión del H2O.

Cloración:

Es el método
más eficaz de hacer potable el H2O. La cantidad
de cloro que se agrega depende del grado de contaminación del abasto hídrico y
su contenido de sustancias orgánicas. El cloro mata la
mayor parte delas bacterias no esporágenas. El
H2O clorada, en consecuencia no siempre es
estéril, pero suele brindar seguridad para
consumo por el
ser humano.

Recuento de Coliformes en Filtro de Membranas (Método):

Se hace pasar parte de la muestra por una
membrana de filtración de acetatos de celulosa con poros y
diámetro tal capte la bacteria, en tanto que permita el
paso libre del H2O.

La membrana de filtración se coloca
asépticamente en una caja de Petri en un cojincillo
absorbente saturado con una sal nutritiva P. Ej., caldo M. Endo,
se incuba a 24 ºC durante 24 horas. Después se
examina la membrana con microscopio de
poca potencia y se
cuentan las colonias verdes violáceos con resplandor
metálico, si considera que son bacterias coliformes.

H2O potable:

Sea limpia, fresca, sin olores o sabores desagradables o que
causen rechazo de quien lo consume y sin sustancias
químicas o M.O. nocivos.

Ventajas del uso de Filtro de
membrana para las H2O:

2. Rapidez en la obtención de resultados
3. Ahorro de manos de obra, medios, materiales
   de vidrios, y coste de los materiales
   si el filtro se lava y se vuelve a utilizar.
4. Pueden exponerse los organismos a medio de enriquecimiento
   muy fácilmente durante un corto tiempo y a una
   temperatura
   conveniente.

Inconvenientes de Uso:

1. No hay indicación de formación de gas
   (algunas H2O tienen gran cantidad de organismos
   fermentadores de la lactosa sin producción de gas capaces de crecer en el
   medio).
2. La filtración por membrana es inadecuada para
   H2O con mucha turbidez y bajos recuentos, porque el
   filtro llega a obturarse antes de que pase agua
   suficiente.
3. Cantidades grandes de organismos no coliformes capaces de
   crecer en el medio pueden interferir en el crecimiento de los
   coliformes.

Experimento # 1:

"Contaje de
aeróbios
totales"

la muestra tomada en una tubería o H2O de
chorro, después de haber agregado 10 ml de esta muestra al
envase que contenía 0,1 de peptona y con dilución
de 10-1, 10-2 y 10-3 , rotulada
como Am (10-1, 10-2 y 10-3).

Aquí en este experimento se realizó el paso de
siembra en profundidad.

El resultado dio negativo, no hubo presencia de bacteria
aeróbios, por lo tanto el contaje de bacterias aerobias
totales, no fue posible por lo antes ya mencionado.

Después se dejó por 24 horas mas y tampoco se
observó ningún crecimiento, o sea, dio negativa la
prueba, es decir, no se determinó la presencia de
aeróbios en los experimentos
realizados.

Descartamos las placas, pero antes realizamos una
inoculación con E.coli; una placa y un tubo.

El agar empleado fue el agar para el recuento.

Este resultado nos indica que la muestra tomada cumple con la
norma COVENIN 2614-1994 (1ª revisión) que dice:

5.2.1: es envase previamente esterilizado, debe destaparse
únicamente en el momento preciso de la captación y
finalizado esta deberá cerrar de inmediato

5.2.2: durante la toma de muestra, el envase deberá
sujetarse por la base y evitar cualquier contacto extremo que
contamine la tapa o la boca del mismo.

También está H2O, cumple con las
normas
COVENIN, donde dice en 3.2, que el H2O tratado es
aquella que ha sido sometida a uno o varios procesos
químicos o físicos para su adecuación como
H2O potable.

Experimento # 2

(Coliformes totales)

en esta experiencia la siguientes 6 placas fueron rotuladas
(10-1, 10-2 y 10-3), con Agar
violeta Rojo Billis (VRBA), a esta placas le agregamos 1 ml de la
muestra (a cada una de las 6 placas).

Estas placas la incubamos x 24 horas a 37 ºC, aquí
no se presentaron crecimiento de coliforme; el cual nos indica,
que el H2O tratado este experimento está
debidamente saneada, como lo estipula la norma COVENIN, que el
H2O potable debe ser limpia, fresca, sin sabores ni
olores desagradables o que cause rechazo de quien la consume.

Esta prueba dio negativa, no hubo crecimiento de bacterias
coliforme, por lo ya señalado anteriormente por lo que se
considera que el agua es de
calidad o como
lo dice COVENIN: agua de
calidad es la expresión de todos los factores
físicos, químicos y microbiológicos que
están presentes en el H2O.

Si la prueba fuese positiva, las colonias tienen que ser roja,
dada por los pigmentos.

La finalidad de esta experiencia es de observar crecimiento de
coliformes totales, en este caso la Escherichia coli que es la
especie clásica de este grupo.

Experimento # 3

Número Mas Probable de Coliformes (NMP)

En este experimento, agarramos 9 tubos con caldo nutriente
amarillo, le agregamos 1 ml de la muestra agregada en los envase
de 0,1 peptona y rotulada 10-1;
10-2;10-3.

Cada tubo tiene un tubo Durjam invertido en su interior, si en
el interior de este tubo, después de 24 horas no hay
formación de gas la prueba es negativa, no hubo
crecimiento de presunto coliforme, y efectivamente este fue el
resultado obtenido, no hubo presencia de gas en el interior del
tubo Durjam.

Nota: cada tubo contenía 10 ml de caldo L.S.T.

Con respecto a N.M.P de coliforme COVENIN dice en 7.2.3, se
considera tubo positivo en la prueba presuntiva aquellas que
presenten cualquier cantidad de gas en el tubo Durham y / o
Turbiedad después de 24 a 48 horas de
incubación.

Este resultado no fue el nuestro, pero para demostrar lo
señalado anteriormente, que si no hay presencia de gas, es
porque la prueba es negativa, según COVENIN, o sea, que el
H2O utilizada para este análisis ha sido adecuadamente
físico o químico analizada, para considerarla agua
potable.

Cabe destacar que la estimación del N.M.P., se basa en
la presunción de que las bacterias se hallan naturalmente
distribuida en un medio líquido.

Experimento # 4

NMP de estreptococos fecales:

Aquí se procedió igual que el experimento # 3,
pero aquí se utilizó caldo glucosado (color rojo)cuando
la prueba resulta positiva cambia de un color púrpura a
amarilla, pero como no hubo reacción de este
microorganismo no presentó el color ya señalado,
por lo que se puede indicar que no hubo crecimiento de
estreptococos fecales.

A pesar de que el medio estaba nutrido con 0,1 peptona, no se
presentó crecimiento, ya que H2O está
totalmente curada, por los medios requeridos por COVENIN y el
desarrollo
está totalmente inhibido.

También hay que tener en cuenta que esto es posible,
cuando se cumple con las normas o pasos
necesarios para una buena toma de muestras para analizar.

Nota:

Los estreptococos fecales son bacterias entéricas que
viven en el intestino de los animales de
sangre
caliente u del hombre, debido
a que S. Fecalis abunda en el intestino grueso del hombre, su
presencia en los H2O significa contaminación fecal.

Experimento # 5:

Numeración de organismos mediante técnicas
de filtración

Para este experimento se trabajó con agar MacKonkey.
Aquí se hace pasar parte de la muestra por una membrana de
filtración de acetato de celulosa con poros y
diámetro tal (0,45 diámetro) que capte la bacteria
en tanto que permita el paso libre del H2O.

La membrana de filtración se coloca
asépticamente con una pinza en una caja de Petri en un
cojincillo absorbente con una solución nutritiva, y se
incuba a 37 ºC a 24 horas.

Después se examina la muestra con un contador de
colonias, estas colonias deben ser verdes violáceas con
resplandor metálico (bacterias coliformes).

Cabe decir que este experimento fue realizado por la
técnica Nubia de Pérez, fue demostrativo, dio
positivo, pero como la prueba anterior nos dieron negativas no lo
consideramos como punto de discusión.

El H2O tomada para este análisis fue del grupo 6, los
resultados de ellos todos dieron positivos.

Esta Técnica tiene muchas aplicaciones
útiles:

1. Se puede examinar grandes volúmenes de
   H2O; teóricamente casi cualquier volumen de agua
   se puede filtrar a través del disco y los
   microorganismos de cualquier volumen
   quedaran en el disco.
2. La membrana se puede pasar de un medio a otro con el
   propósito de seleccionar y diferenciar los
   microorganismos.
3. Se obtienen resultados más rápidos, que con
   los métodos
   convencionales.
4. Se logran estimaciones cuantitativas de ciertos tipos de
   bacterias como coliformes, cuando se usan los medios
   apropiados.

H2O del "Equipo 6"

• Tomada de un envase fijo (pipote)
• Hora 11 de la mañana.

COVENIN 5.1.3 (2614:1994)

"Para la captación de muestras en depósito
estanques u otras H2O confinadas sin corriente
apreciable, se sumerge el recipiente invertido y se desplaza en
sentido horizontal creando una corriente artificial. Se extrae la
muestra y se cierra el recipiente rápidamente".

5.1.4

"Para muestras de H2O confinadas en
depósitos, estanques u otros a profundidades
específicas se debe utilizar un muestreo,
diseñado de manera tal que el H2O fluya a
través de un tubo el fondo de envase de
recepción"

con respecto a la hora, fecha y lugar donde fue tomada,
COVENIN lo señala en 5.5

Objetivo General:

• Determinación del número mas probable de
  bacterias coliformes en agua potable.
• Determina presuntos Streptococcus fecalis en la muestra de
  agua.

Objetivos Específicos:

• Determinar la veracidad del tratamiento implementado en las
  H2O potables y hasta que punto reduce el crecimiento
  de las coliformes.

CONCLUSIÓN:

Para detectar la presencia de estos microorganismos como E.
Coli, se debe aplicar pruebas
bioquímicas correspondientes (serie colorimétrica,
IMViC, etc) para agua potable no debe contener ningún
agente patógeno.

Así se considera cuando en 100 ml de agua no se
encuentran agentes enfermedad, y por tanto no esté
presente tampoco la especie E. Coli. Se estima que una persona en
promedio excreta al día miles de millones de estos
microorganismos que viven mas tiempo en agua
que los patógenos. El agua que
contenga pocos patógenos por litros puede estar lo
suficientemente contaminada para causar algunas enfermedades.

Como estas especies Enterobacteriaceae tienen gran
semejanza en su aspecto morfológico y características de cultivo, es necesario
recurrir a pruebas bioquímicas para
diferenciarlas.

1. Capacidad para producir Indol. E. Coli lo produce y Ent.
   Aerógenes no.
2. Los dos microorganismos producen ácido de la
   glucosa, sin embargo, E.coli produce pH mas bajo
   lo qu ehace que vire al rojo de metilo mientras que Ent.
   Aerogenes no cambia el color.
3. E. Coli no produce acetilmetilcarbinol mientras que Ent.
   Aerogenes sí lo hace.
4. Utilización de citrato de sodio. Ent. Aerogenes
   es capaz de utilizar el citrato de sodio como su única
   fuente de carbono. E.
   Coli no se desarrolla en estas circunstancias.

BIBLIOGRAFÍA

Libro: Microbiología

Autor: CARPENTER

Año: 1969 1ª edición

Editorial: Interamericana S.A. México

Libro: Método Microbiológico

Autor: C.H. Collins; Patricia M. Lyne

Año: 1989

Editorial: ACRIBIA; S.A. Zaragoza –
España

Libro: Microbiología

Autor: Pelczar / Reid /Chan

Año: 1994 2ª edición

Editorial: McGraw – Hill

COVENIN 2614 : 1994 (1º revisión)

3047 : 1993

Anexos

Diagrama de Flujo que usan la plantas
purificadoras de H2O:

Para ver el gráfico seleccione la
opción "Descargar" del menú superior

Tabla Nº 1:

Índices de NMP y límites de
confianza de 95 % para variar combinaciones de resultados
positivos y negativos, cuando se utilizan 5 tubos con 10 ml de
muestra.

Tabla Nº 2:

Índices de NMP y límites de
confianza de 95 % para variar combinaciones de resultados
positivos y negativos, cuando se utilizan 5 tubos con 10 ml de
muestra.

Tabla Nº 2:

Número más probable por 100 ml. Usando un
tubo de 50 ml, cinco tubos de 10 ml y cinco tubos de 1
ml

Documento cedido por:

JORGE CASTILLO