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Análisis microbiológico del agua

Enviado por cibercrazy5000



  1. Marco teórico
  2. Experimentos
  3. Objetivos
  4. Conclusión
  5. Bibliografía
  6. Anexos

INTRODUCCIÓN:

Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son bacilo gram negativos, inmóviles o móviles con flagelos. Peritricos se desarrollan en medios artificiales y todas las especies forman ácido o ácido y gas a partir de glucosa. Su composición antigénica es un mosaico que interrelaciona serológicamente varios géneros y aun familias, muchas de estas bacterias son parásitos de animales y otros patógenos.

Para enjuiciar la calidad de las aguas se recorre a parámetro físico químico y biológico. Los parámetros bacteriológicos tienen mayor importancia para dictámenes higiénicos ; es preciso hallar el número de gérmenes saprófilos o de coli y de bacterias procedentes del intestino humano como indicadores de la contaminación.

Conviene destacar la importancia que tienen las cifras de coli y coliformes, pertenecientes a las enterobacterias que fermentan lactosa con producción de gas y ácido. Para determinar el número de estas bacterias se suele emplear medio selectivo de endo.

MARCO TEÓRICO

Bacteria Coliforme:

Incluyen E. Coli y otras bacterias que se asemejan morfológica y fisiológicamente. Estos M.O. con frecuencia difieren entre si en características pequeñas. Las bacterias coliforme suelen encontrarse en el aparto intestinal del hombre y animal. E. Coli, rara vez se encuentra fuera del intestino

Las bacterias coliformes son bacilos cortos, gram negativos que fermentan la lactosa y forman ácido y gas.

Son anaeróbios facultativos, se multiplican a mayor rapidez a temperatura entre 30 y 37 ºC, crecen a gran abundancias en medios corrientes, como caldo y agar.

La colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm de diámetro, un centro grande de color oscuro e incluso negro, y tienen brillo verde metálico cuando se observan con luz refleja.

Se han creado otras pruebas para diferenciar tipos de bacterias coliformes, suelen emplearse 4 y se han juntado sus iniciales en la palabra nemotécnica IMViC (Indol, Rojo Metilo (R.M.), Borges – Proskauer (V:P) y utilizada de citrato.

La reacción de IMViC de algunas bacterias coliformes como E.coli ++ --, significa que el M:O: produce Indol y es positivo al rojo metilo y negativo al V.P.

Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa y positiva.

Se considera que todas las bacterias coliformes, tienen importancia en el H2O desde el punto de vista sanitario aunque muchos autores an tratado de diferenciar el tipo fecal (e.coli) y el nofecal (A: aurogenes)

Análisis sanitario del H2O

El diagnostico de las colonias coliformes en la muestra de H2O se basa en la capacidad de dicho M:O: para producir gas a partir de la lactosa.

Filtración:

Es un medio eficaz de eliminar M.O. y otras sustancias de suspensión del H2O.

Cloración:

Es el método más eficaz de hacer potable el H2O. La cantidad de cloro que se agrega depende del grado de contaminación del abasto hídrico y su contenido de sustancias orgánicas. El cloro mata la mayor parte delas bacterias no esporágenas. El H2O clorada, en consecuencia no siempre es estéril, pero suele brindar seguridad para consumo por el ser humano.

Recuento de Coliformes en Filtro de Membranas (Método):

Se hace pasar parte de la muestra por una membrana de filtración de acetatos de celulosa con poros y diámetro tal capte la bacteria, en tanto que permita el paso libre del H2O.

La membrana de filtración se coloca asépticamente en una caja de Petri en un cojincillo absorbente saturado con una sal nutritiva P. Ej., caldo M. Endo, se incuba a 24 ºC durante 24 horas. Después se examina la membrana con microscopio de poca potencia y se cuentan las colonias verdes violáceos con resplandor metálico, si considera que son bacterias coliformes.

H2O potable:

Sea limpia, fresca, sin olores o sabores desagradables o que causen rechazo de quien lo consume y sin sustancias químicas o M.O. nocivos.

Ventajas del uso de Filtro de membrana para las H2O:

  1. Rapidez en la obtención de resultados
  2. Ahorro de manos de obra, medios, materiales de vidrios, y coste de los materiales si el filtro se lava y se vuelve a utilizar.
  3. Pueden exponerse los organismos a medio de enriquecimiento muy fácilmente durante un corto tiempo y a una temperatura conveniente.

Inconvenientes de Uso:

  1. No hay indicación de formación de gas (algunas H2O tienen gran cantidad de organismos fermentadores de la lactosa sin producción de gas capaces de crecer en el medio).
  2. La filtración por membrana es inadecuada para H2O con mucha turbidez y bajos recuentos, porque el filtro llega a obturarse antes de que pase agua suficiente.
  3. Cantidades grandes de organismos no coliformes capaces de crecer en el medio pueden interferir en el crecimiento de los coliformes.

Experimento # 1:

"Contaje de aeróbios totales"

la muestra tomada en una tubería o H2O de chorro, después de haber agregado 10 ml de esta muestra al envase que contenía 0,1 de peptona y con dilución de 10-1, 10-2 y 10-3 , rotulada como Am (10-1, 10-2 y 10-3).

Aquí en este experimento se realizó el paso de siembra en profundidad.

El resultado dio negativo, no hubo presencia de bacteria aeróbios, por lo tanto el contaje de bacterias aerobias totales, no fue posible por lo antes ya mencionado.

Después se dejó por 24 horas mas y tampoco se observó ningún crecimiento, o sea, dio negativa la prueba, es decir, no se determinó la presencia de aeróbios en los experimentos realizados.

Descartamos las placas, pero antes realizamos una inoculación con E.coli; una placa y un tubo.

El agar empleado fue el agar para el recuento.

Este resultado nos indica que la muestra tomada cumple con la norma COVENIN 2614-1994 (1ª revisión) que dice:

5.2.1: es envase previamente esterilizado, debe destaparse únicamente en el momento preciso de la captación y finalizado esta deberá cerrar de inmediato

5.2.2: durante la toma de muestra, el envase deberá sujetarse por la base y evitar cualquier contacto extremo que contamine la tapa o la boca del mismo.

También está H2O, cumple con las normas COVENIN, donde dice en 3.2, que el H2O tratado es aquella que ha sido sometida a uno o varios procesos químicos o físicos para su adecuación como H2O potable.

Experimento # 2

(Coliformes totales)

en esta experiencia la siguientes 6 placas fueron rotuladas (10-1, 10-2 y 10-3), con Agar violeta Rojo Billis (VRBA), a esta placas le agregamos 1 ml de la muestra (a cada una de las 6 placas).

Estas placas la incubamos x 24 horas a 37 ºC, aquí no se presentaron crecimiento de coliforme; el cual nos indica, que el H2O tratado este experimento está debidamente saneada, como lo estipula la norma COVENIN, que el H2O potable debe ser limpia, fresca, sin sabores ni olores desagradables o que cause rechazo de quien la consume.

Esta prueba dio negativa, no hubo crecimiento de bacterias coliforme, por lo ya señalado anteriormente por lo que se considera que el agua es de calidad o como lo dice COVENIN: agua de calidad es la expresión de todos los factores físicos, químicos y microbiológicos que están presentes en el H2O.

Si la prueba fuese positiva, las colonias tienen que ser roja, dada por los pigmentos.

La finalidad de esta experiencia es de observar crecimiento de coliformes totales, en este caso la Escherichia coli que es la especie clásica de este grupo.

Experimento # 3

Número Mas Probable de Coliformes (NMP)

En este experimento, agarramos 9 tubos con caldo nutriente amarillo, le agregamos 1 ml de la muestra agregada en los envase de 0,1 peptona y rotulada 10-1; 10-2;10-3.

Cada tubo tiene un tubo Durjam invertido en su interior, si en el interior de este tubo, después de 24 horas no hay formación de gas la prueba es negativa, no hubo crecimiento de presunto coliforme, y efectivamente este fue el resultado obtenido, no hubo presencia de gas en el interior del tubo Durjam.

Nota: cada tubo contenía 10 ml de caldo L.S.T.

Con respecto a N.M.P de coliforme COVENIN dice en 7.2.3, se considera tubo positivo en la prueba presuntiva aquellas que presenten cualquier cantidad de gas en el tubo Durham y / o Turbiedad después de 24 a 48 horas de incubación.

Este resultado no fue el nuestro, pero para demostrar lo señalado anteriormente, que si no hay presencia de gas, es porque la prueba es negativa, según COVENIN, o sea, que el H2O utilizada para este análisis ha sido adecuadamente físico o químico analizada, para considerarla agua potable.

Cabe destacar que la estimación del N.M.P., se basa en la presunción de que las bacterias se hallan naturalmente distribuida en un medio líquido.

Experimento # 4

NMP de estreptococos fecales:

Aquí se procedió igual que el experimento # 3, pero aquí se utilizó caldo glucosado (color rojo)cuando la prueba resulta positiva cambia de un color púrpura a amarilla, pero como no hubo reacción de este microorganismo no presentó el color ya señalado, por lo que se puede indicar que no hubo crecimiento de estreptococos fecales.

A pesar de que el medio estaba nutrido con 0,1 peptona, no se presentó crecimiento, ya que H2O está totalmente curada, por los medios requeridos por COVENIN y el desarrollo está totalmente inhibido.

También hay que tener en cuenta que esto es posible, cuando se cumple con las normas o pasos necesarios para una buena toma de muestras para analizar.

Nota:

Los estreptococos fecales son bacterias entéricas que viven en el intestino de los animales de sangre caliente u del hombre, debido a que S. Fecalis abunda en el intestino grueso del hombre, su presencia en los H2O significa contaminación fecal.

Experimento # 5:

Numeración de organismos mediante técnicas de filtración

Para este experimento se trabajó con agar MacKonkey. Aquí se hace pasar parte de la muestra por una membrana de filtración de acetato de celulosa con poros y diámetro tal (0,45 diámetro) que capte la bacteria en tanto que permita el paso libre del H2O.

La membrana de filtración se coloca asépticamente con una pinza en una caja de Petri en un cojincillo absorbente con una solución nutritiva, y se incuba a 37 ºC a 24 horas.

Después se examina la muestra con un contador de colonias, estas colonias deben ser verdes violáceas con resplandor metálico (bacterias coliformes).

Cabe decir que este experimento fue realizado por la técnica Nubia de Pérez, fue demostrativo, dio positivo, pero como la prueba anterior nos dieron negativas no lo consideramos como punto de discusión.

El H2O tomada para este análisis fue del grupo 6, los resultados de ellos todos dieron positivos.

Esta Técnica tiene muchas aplicaciones útiles:

  1. Se puede examinar grandes volúmenes de H2O; teóricamente casi cualquier volumen de agua se puede filtrar a través del disco y los microorganismos de cualquier volumen quedaran en el disco.
  2. La membrana se puede pasar de un medio a otro con el propósito de seleccionar y diferenciar los microorganismos.
  3. Se obtienen resultados más rápidos, que con los métodos convencionales.
  4. Se logran estimaciones cuantitativas de ciertos tipos de bacterias como coliformes, cuando se usan los medios apropiados.

H2O del "Equipo 6"

  • Tomada de un envase fijo (pipote)
  • Hora 11 de la mañana.

COVENIN 5.1.3 (2614:1994)

"Para la captación de muestras en depósito estanques u otras H2O confinadas sin corriente apreciable, se sumerge el recipiente invertido y se desplaza en sentido horizontal creando una corriente artificial. Se extrae la muestra y se cierra el recipiente rápidamente".

5.1.4

"Para muestras de H2O confinadas en depósitos, estanques u otros a profundidades específicas se debe utilizar un muestreo, diseñado de manera tal que el H2O fluya a través de un tubo el fondo de envase de recepción"

con respecto a la hora, fecha y lugar donde fue tomada, COVENIN lo señala en 5.5

Objetivo General:

  • Determinación del número mas probable de bacterias coliformes en agua potable.
  • Determina presuntos Streptococcus fecalis en la muestra de agua.

Objetivos Específicos:

  • Determinar la veracidad del tratamiento implementado en las H2O potables y hasta que punto reduce el crecimiento de las coliformes.

CONCLUSIÓN:

Para detectar la presencia de estos microorganismos como E. Coli, se debe aplicar pruebas bioquímicas correspondientes (serie colorimétrica, IMViC, etc) para agua potable no debe contener ningún agente patógeno.

Así se considera cuando en 100 ml de agua no se encuentran agentes enfermedad, y por tanto no esté presente tampoco la especie E. Coli. Se estima que una persona en promedio excreta al día miles de millones de estos microorganismos que viven mas tiempo en agua que los patógenos. El agua que contenga pocos patógenos por litros puede estar lo suficientemente contaminada para causar algunas enfermedades.

Como estas especies Enterobacteriaceae tienen gran semejanza en su aspecto morfológico y características de cultivo, es necesario recurrir a pruebas bioquímicas para diferenciarlas.

  1. Capacidad para producir Indol. E. Coli lo produce y Ent. Aerógenes no.
  2. Los dos microorganismos producen ácido de la glucosa, sin embargo, E.coli produce pH mas bajo lo qu ehace que vire al rojo de metilo mientras que Ent. Aerogenes no cambia el color.
  3. E. Coli no produce acetilmetilcarbinol mientras que Ent. Aerogenes sí lo hace.
  4. Utilización de citrato de sodio. Ent. Aerogenes es capaz de utilizar el citrato de sodio como su única fuente de carbono. E. Coli no se desarrolla en estas circunstancias.

BIBLIOGRAFÍA

Libro: Microbiología

Autor: CARPENTER

Año: 1969 1ª edición

Editorial: Interamericana S.A. México

Libro: Método Microbiológico

Autor: C.H. Collins; Patricia M. Lyne

Año: 1989

Editorial: ACRIBIA; S.A. Zaragoza – España

Libro: Microbiología

Autor: Pelczar / Reid /Chan

Año: 1994 2ª edición

Editorial: McGraw – Hill

COVENIN 2614 : 1994 (1º revisión)

3047 : 1993

Anexos

Diagrama de Flujo que usan la plantas purificadoras de H2O:

Para ver el gráfico seleccione la opción "Descargar" del menú superior

Tabla Nº 1:

Índices de NMP y límites de confianza de 95 % para variar combinaciones de resultados positivos y negativos, cuando se utilizan 5 tubos con 10 ml de muestra.

Nº de tubos positivos

Índice NMP/100ml

Límite de confianza de 95 %

 

 

Inferior

Superior

0

£ 2,2

0

6

1

2,2

0,1

12,6

2

5,1

0,5

19,2

3

9,2

1,6

29,4

4

16

3,3

52,9

5

³ 16

8

infinito

Tabla Nº 2:

Índices de NMP y límites de confianza de 95 % para variar combinaciones de resultados positivos y negativos, cuando se utilizan 5 tubos con 10 ml de muestra.

Nº de tubos positivos

Índice NMP/100ml

Límite de confianza de 95 %

 

 

Inferior

Superior

0

£ 1,1

0

3

1

1,1

0,03

5,9

2

2,2

0,26

8,1

3

3,6

0,69

10,6

4

5,1

1,3

13,4

5

6,9

2,1

16,8

6

9,2

3,1

21,1

7

12

4,3

27,1

8

16,1

5,9

36,8

9

23

8,1

59,5

10

³ 23

13,5

Infinito

Tabla Nº 2:

Número más probable por 100 ml. Usando un tubo de 50 ml, cinco tubos de 10 ml y cinco tubos de 1 ml

Tubos de 50 ml positivos

Tubos de 10 ml positivos

Tubo de 1 ml positivos

NMP por 100 ml

0

0

0

0

0

0

1

1

0

0

2

2

0

1

0

1

0

1

1

2

0

1

2

3

0

2

0

2

0

2

1

3

0

2

2

4

0

3

0

3

0

3

1

5

0

4

0

5

1

0

0

1

1

0

1

3

1

0

2

4

1

0

3

6

1

1

0

3

1

1

1

5

1

1

2

7

1

1

3

9

1

2

0

5

1

2

1

7

1

2

2

10

1

2

3

12

1

3

0

8

1

3

1

11

1

3

2

14

1

3

3

18

1

3

4

20

1

4

0

13

1

4

1

17

1

4

2

20

1

4

3

30

1

4

4

35

1

4

5

40

1

5

0

25

1

5

1

35

1

5

2

50

1

5

3

90

1

5

4

160

1

5

5

180+

 

Documento cedido por:

JORGE CASTILLO


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