- Evaluar la acción de factores químicos
que afectan el crecimiento bacteriano.
Objetivos Específicos:
- Conocer la capacidad inhibidora del cristal
violeta. - Determinar la acción antiséptica y
antibiótica en presencia de microorganismos gran
positivos y gran negativos. - Considerar diferentes concentraciones y tiempos de
contacto entre microorganismos y
antisépticos
Los agentes bacteriostáticos inhiben la
tinción de las bacterias y
los agentes fungistáticos inhiben las de los hongos.
Conviene recalcar que no hay distinción entre la
acción bacteriostática y la bactericida; la
diferencia es cuantitativa mas que cualitativa; se demuestra con
un experimento simple con varias concentraciones de fenol en
caldo nutritivo.
La adición de solución de Fenol al 0,3 %
impide el crecimiento de E. Coli, pero no mata las células en
un periodo de prueba de varios días. El caldo con
solución de fenol al 1 x 100 ensayado en forma semejante
no contiene bacterias
vivas en términos de una hora.
La concentración menor de fenol es
bacteriostática para E. Coli en tanto que la
concentración elevada es bactericida. Las bacterias
morirán en solución de fenol al 0,3 x 100, pero
mientras tanto, puede demostrarse que hay células
vivas al cambiar una parte del cultivo a un medio sin fenol, en
donde se reanuda el crecimiento.
Cristal Violeta:
Algunos agentes tienen finalidad particular por medio de
genes o los lesionan específicamente. Los colorantes
básicos el violeta de cristal, reaccionan intensamente con
los ácidos
nucleicos de las nucleoproteínas, quizás por
formación de sales.
Las bacterias gran – positivas son más
sensibles que las gran – negativas diferencia asociada
quizás al carácter
ácido de las proteínas
de las células, gran – positivas.
Cloro:
Conviene cuidar el empleo de los
compuestos de cloro para asegurar concentraciones adecuadas
necesarias para la finalidad deseada, dada la habilidad del cloro
y su gran capacidad para combinarse con material extraño.
La concentración necesaria para matar las bacterias
espurogéneas en condiciones favorables son muy
pequeñas.
Cristal Violeta:
Reacciona con radicales ácidos.
Mecanismo de acción bacteriostático; probablemente
forma sales con los ácidos nucleicos.
Se emplea en medio de cultivo selectivo,
antiséptico de piel y
membrana bucales, inhibe las bacterias gran –
positivas.
El violeta cristal es un colorante básico
bacteriostático potente, especialmente contra
microorganismos gran positivos, las bacterias gran negativas son
alterada en poco grado.
Concentración:
La concentración de una sustancia química desinfectante
modifica notablemente la velocidad de
muerte de las
bacterias.
Un aumento moderado de la concentración
multiplica la velocidad de
muerte en gran
magnitud.
La concentración baja, no tienen acción
bactericida e incluso las concentraciones menores pueden
estimular el crecimiento microbiano.
Antiséptica:
Fue empleada originalmente para impedir la sepsis,
infección o putrefacción. La sepsis es causada por
los microorganismos en crecimiento; en consecuencia un
antiséptico puede inhibir la multiplicación
microbiana sin matar necesariamente al microorganismo. Por ello
los antisépticos son bacteriostáticos. Un
antiséptico es esencialmente igual a un
germicida.
Experiencia 1, Cristal Violeta:
( + ) S. Aureus
1/100 0,6 mm de distancia entre el C. Violeta y el
microorganismo
1/1000 0,2 mm de distancia entre el C. Violeta y el
microorganismo.
1/10000 no se observó distancia
( – ) Salmonella
1/100 hubo cierto crecimiento alrededor pero una
distancia corta.
1/1000 y 1 / 10000 no se observó resistencia del
cristal violeta.
Experimento # 2 Evaluación
de los antisépticos
Staphilococcus Aureus Gran + sin Peptona
- Se observó desarrollo
en 0,5 cm. - Desarrollo abundante alrededor del antiséptico
M.O. resistente. - M.O resistente al antiséptico, creció
cerca del antiséptico. - Se observó crecimiento muy cerca del
antiséptico M.O resistente.
Salmonella M.O Gran – con
peptona:
- Se observó desarrollo a
0,2 cm. Son resistentes al antiséptico - M.O resistente, desarrollo cerca del
antiséptico. - Desarrollo a una distancia de 0,1 cm. M.O
resistente. - M.O: resistente. Desarrollo cerca del
antiséptico.
Salmonella M.O Gran – sin
peptona:
- Resistente, creció cerca del
antiséptico. - Desarrollo muy cerca del antiséptico. M.O
resistente. - Desarrollo de forma muy abundante alrededor del
antiséptico. M.O. resistente. - 0,1 fue la distancia donde se desarrollaron estos
M.O. son resistentes al antiséptico.
S. Aureus Micro Organismo Gram + con
Peptona
- M.O resistente al antiséptico.
- M.O. resistente al antiséptico.
- M.O, creció a 0,4 cm del
antiséptico. - 0,3 fue la distancia donde se desarrolló. M.O.
resistente.
(+ ) S. Aureus con Peptona
- Ampicilina: se observó 1 cm de
separación entre el crecimiento microbiano y el filtro
antibiótico. - Amoxicilina: con 1,3 cm de separación se
observó una alta sensibilidad a este
antibiótico. - Cefotefan: no hubo resistencia de
este microorganismo a este antibiótico. - Polymyxine B: 0,2 mm de distancia entre el filtro y
el microorganismo.
( – ) Salmonella con Peptona
- Ampicilina: 0,5 mm de distancia entre el filtro y el
microorganismo. - Amoxicilina: 1 cm de separación entre el
filtro y la salmonella. - Cefotefan: se observó 1 cm de distancia entre
el antibiótico y el desarrollo microbiano. - Polymyxine B: 0,1 mm de distancia entre la salmonella
y el antibiótico.
(+ ) S. Aureus sin Peptona
- Ampicilina: se observó 0,8 mm de
separación entre el crecimiento microbiano y el filtro
antibiótico. - Amoxicilina: mas de 1 cm de separación entre
el desarrollo microbiano y el antibiótico. - Cefotefan: 0,2 mm de distancia entre el
antibiótico y la presencia microbiana. - Polymyxine B: 0,1 mm de distancia entre el filtro y
el microorganismo.
( – ) Salmonella con Peptona
- Ampicilina: 0,1 mm de distancia entre el filtro y el
microorganismo. - Amoxicilina: 1 cm de separación entre el
filtro y la salmonella. - Cefotefan: se observó 1 cm de distancia entre
el antibiótico y el desarrollo microbiano. - Polymyxine B: 0,6 mm de distancia entre la salmonella
y el antibiótico.
Experimento # 4:
Evaluación de los antisépticos en
contacto directo con los microorganismos:
Grupo 4
S. Aurus con Cloro:
C: desarrollo
0 a 30 mm, no desarrollo.
Grupo 6 Staphilococcus aureus – fenol al 10
%.
C: desarrollo (sin fenol)
0 y 5 mm hubo desarrollo.
10, 15, 30 no presentaron desarrollo.
Grupo 7 (S. Aureus – Fenol al 10
%)
- No hubo crecimiento en ninguno de los
tiempos. - Error personal.
Grupo 2 Salmonella – Cloro
- En ningún tiempo hubo
crecimiento de este microorganismo. - En control si
hubo crecimiento. - El cloro inhibe el crecimiento de la
Salmonella
Grupo 5, Salmonella – Fenol al 10
%
- Presentó crecimiento en control
- En el resto de los tiempos no hubo
crecimiento.
Experimento # 1, Evaluación
del Cristal Violeta
En el cristal violeta con microorganismos gran negativos
(salmonella) se observó que estos son pocos sensibles al
cristal, en el lugar donde las concentración era 1/ 100 y
en el lugar donde las concentraciones era 1 / 1000 se
tornó poco crecimiento alrededor de esta y en 1 /10000
crecieron sin excepción.
Según M. Burrows, los colorantes se usan para
teñir, y que muchos de ellos muestran gran actividad
bactericida en algunos microorganismos y otros
nó.
Esto lo podemos comprobar al observar el desarrollo de
Staphyloccocus Aureus. Al someterlo a consternaciones de 1 / 100
se observó que guardaba cierta distancia alrededor del
cristal Violeta lo que indica la sensibilidad al poder
bactericida del cristal violeta de este microorganismo, en
concentraciones de 1 / 1000 y 1 / 10000 el crecimiento fue mas
notable a menor distancia del cristal violeta, según el
Tratado de Microbiología de W. Burrows. "los
gérmenes gran negativo en su mayor parte son menos
sensibles a los colorantes que los gran positivos.
Experimento II
Evaluación de los antisépticos Ajas,
Etanol, Alcohol Iodado
y Jabonide
Salmonella con y sin peptona (gran
negativa):
Este tipo de M.O, según resultados obtenidos en
el laboratorio,
son M.O., resistentes a los antisépticos, tal es el caso
de lo mas distante que se mantuvieron del antiséptico fue
de 0,40 cm y el mas cerca fue pesado al
antiséptico.
La peptona cumple la función de
nutrir a los M.O. para que se multipliquen, ya que la misma es un
nutriente.
- En el caso de M.O Gran – con Peptona
(Salmonella): todos se mostraron con características similares, una de ellas
fue que fueron resistentes a los antisépticos y se
desarrollaron de forma abundante, y esto fue por la presencia
de Peptona, el cual permitió que se nutrieran y
desarrollaran a gran velocidad. - En el caso de M.O. Gran + sin Peptona (Salmonella):
La reacción fue la misma, los M.O. resistían a
los antisépticos y se desarrollaron de manera regular
alrededor de los mismos, a pesar de sembrarse sin peptona,
observamos la facilidad que tuvieron los M.O. de crecer
alrededor de los antisépticos.
Esto nos da a entender y según "Porter" la
capacidad de inhibición de las sustancias
químicas contra este M.O. Gran – (en este caso la
Salmonella) no fue efectiva.
También estos resultados indican que las
concentraciones presentes en el antiséptico, no eran la
suficiente, para poder
inhibir a la Salmonella, al contrario la concentración
era propicia para su desarrollo y
multiplicación.
Evaluación de los antisépticos Ajas,
Etanol, Alcohol Iodado
y Jabonide
S. Auresu Gram + sin Peptona y con
Peptona:
Aquí este tipo de M.O. se mostró en su
mayor parte resistente a los antisépticos y a la
concentración, no significa esto que la bacteria S. Aureus
en todas las placas estuvo cerca del antiséptico. En
algunos casos la separación era de 0,3 y 0,5, pero en este
rango se sigue catalogando como M.O resistente a los
antisépticos utilizados.
M.O. Gram + S. Aureus sin Peptona:
Aquí observamos Staphylococcus Aureus resistente,
pero hubo un detalle que siempre hubo separación entre el
M.O. y los antisépticos, no hubo ninguno que se halla
desarrollado totalmente cerca del antiséptico. A pesar de
no tener peptona hubo crecimiento del S. Aureus, lo que nos da a
entender que el desarrollo tanto del S aAurus como el de la
Salmonella se da con o sin peptona, ya que el medio ya estaba
nutrido por el agar.
La peptona permite el crecimiento más abundante
del M.O. en el medio.
M.O. Gram + S. Aureus con Peptona:
Se observaron S. Aurus sensibles al antiséptico
Ajas, lo que indica que la sustancia química que
actuó es efectiva, ya que inhibió el crecimiento
del microorganismo cerca del antiséptico, también
otro factor sería la concentración, el cual se
supone era alta porque no permitió el desarrollo del M.O.
esto es según Porter y Burrows
Experimento # 3:
Evaluación de la acción de los
antibióticos:
Según lo observado en la cápsula con
Staphylococcus Aureus y peptona, en la zona que contenía
ampicilina, había un distancia de aproximadamente 1 cm lo
que indica una alta sensibilidad de este microorganismo a este
antibiótico al igual que la zona en donde se encontraba la
amoxicilina, tubo una alta sensibilidad, es decir el
microorganismo es sensible a este antibiótico.
Según Joklik / Willett/Amos/Wilfert. Un
antibiótico es una sustancia química producida por
diferentes especies de microorganismos en pequeñas
concentraciones. Capaz de inhibir el desarrollo de otro
microorganismo.
En la zona donde colocamos cefotefan y polymyxine B el
crecimiento fue mas notable alrededor de este antibiótico,
el cual nos indica que estos antibióticos son poco
recomendables para el tratamiento de estos microorganismos ya que
se presenta como resistente a la acción
bactericida.
En la cápsula en donde se inoculó
staphylococcus aureus sin Peptona, el grado de sensibilidad fue
mas notable en la zona que contenía los filtros de
amoxicilina al igual que la otra cápsula con peptona, la
ampicilina tuvo un grado de menor sensibilidad que en la
cápsula con peptona. Siendo este microorganismo mas
resistente a la acción bactericida del
cefotefan.
Según M. Burrows, los staphylococcus son muy
resistentes a altas temperaturas, pero mas aun lo son a ciertos
antibióticos, cuya actividad se limita a la forma gran
negativa, y son especialmente a desarrollar resistencias a
medicamentos.
En la cápsula en donde se inoculó
Salmonella con peptona se observó que este microorganismo
es resistente a la acción bactericida de la ampicilina y
la polymyxine B, y una sensibilidad alta a los
antibióticos amoxicilina y cefotefan. El cual nos indica
que para el tratamiento de una salmonelosis es recomendable el
uso de amoxycilina y cefotefan.
Según Joklik / Willett / Amos / Wilfert, la
salmonella es uno de los agentes microbianos mas resistentes a
los factores químicos y físicos que los
demás microorganismos.
En la cápsula rotulada como salmonella sin
peptona se observa que esta era sensible a la amoxycilina y a la
cefotefan y una resistencia notable a la ampicilina y a la
polymyxine B.
Esto nos indica la alta resistencia a estos
antibióticos. Siendo de manera similar su comportamiento
con presencia de peptona y con ausencia de esta.
Este antiséptico empleado en esta placa con
bacteria con S. Aureus gram positiva con peptona es más
efectiva al igual que la sustancia química presente en el
mismo, no permitió crecimiento cerca del
antiséptico ajax, por lo tanto la concentración era
alta.
Las otras zonas si presentaron crecimiento alrededor del
antiséptico, dando a entender que esto M.O. el
Sataphylococcus Aureus es resistente a los antisépticos y
a las concentraciones presentes en los mismos.
El diámetro de la zona de inhibición
depende de la capacidad de difusión de la sustancia
química y su potencia
antibacteriana, y esto es lo que ha pasado con estas placas, la
capacidad de inhibición de esta sustancia química
no fue la suficiente para impedir el crecimiento del S. Aureus en
un medio con proteína hidrolizado como la peptona. Esto es
según Porter.
Experimento # 4
Evaluación de los antisépticos en
contacto directo con elmicroorganismo.
Fenol con S. Aureus (10 %)
Creció en el tiempo de 0 y 5
min. Esto nos indica que la concentración de fenol no
reacciona en tiempos menores a 0 y 5; aquí es menos
efectivo el fenol porque no ha empezado a reaccionar.
En los tiempos 10, 15 y 30 minutos, los M.O. en este
caso el S. Aureus, no resistió a pesar de ser cultivos
jóvenes.
El fenol es mas efectivo a mayor tiempo ay que inhibe el
crecimiento del S. Aureus a 10 % de
Concentración.
Grupo 2 (Salmonella – Cloro)
Aquí no hubo crecimiento, porque el cloro
inhibió completamente el crecimiento de la
salmonella.
La alta concentración y el gran poder de
desinfección del cloro fueron factores claves para
acelerar la muerte del
microorganismo a velocidad rápida.
La zona C fue la única en presentar crecimiento
en vista de que se sembró antes de ligar el M.O. en este
caso la salmonella con el cloro.
Antes de inocular el M.O. ya estaba muerto por la
concentración del cloro al momento de juntarlo.
Grupo 7 (S. Aureus – Fenol)
No hubo crecimiento en ninguno de los tiempos, ni en
control, esto se
debió a un error personal.
También pudo haber sido que no inoculó el M.O. y
juntó primero la sustancia química con el
mismo.
Grupo 5 (Salmonella – Fenol)
Solo creció en control, y el resto no hubo
presencia de microorganismo.
El fenol actuó de forma rápida contra el
M.O., esto nos quiere decir que el 10 % de concentración y
el antiséptico inhiben de manera efectiva el desarrollo de
este M.O. gram negativo, algo muy diferente ocurrió con el
grupo 6, donde
el Staphyloccocus aureus con Fenol, desarrollaron en el tiempo 0
y 5 respectivamente.
¿Será que la concentración afecta
afecta el crecimiento del M.O.?
todo depende del % de concentración. Un aumento
moderado de la concentración frecuentemente multiplica la
velocidad de muerte del M.O. en gran magnitud.
Ahora las concentraciones bajas no tienen acción
bactericida e incluso las concentraciones menores pueden
contribuir al desarrollo de microbiano.
El antiséptico más efectivo y que
inhibió el desarrollo del S. Aureus fue al aplicado al
M.O. positivo y con peptona, este fue el Ajas.
La salmonellla fue uno de los M.O gram negativo mas
resistentes en todas las pruebas de las
placas realizadas, soportó todas las concentraciones y
sustancias químicas que actuaron el medio.
El fenol reacciona a mayor tiempo y esto lo hace mucho
mas efectivo, en cambio en
tiempos iniciales no reacciona, tal es el caso de los tiempos 0 y
5 minutos que hubo crecimiento.
El cloro fue uno de los agentes desinfectantes
más efectivos, reacciono en todos los tiempos inhibiendo
el crecimiento del S. Aureus.
La concentración de la peptona puede variar en
límites
bastante amplios sin modificar el índice de
multiplicación bacteriana en gran grado.
Muchos antibióticos utilizados para el
tratamiento de enfermedades causados por
microorganismos, son causantes de que esto puedan crear
anticuerpos, que le sirva de protección para resistir la
acción bactericida de estos antibióticos, como el
caso de S. Aureus, se debe tener cuidado en el tratamiento con
antibióticos de manera excesiva ya que muchos
antibióticos que están presentes en el mercado
farmacéutico, ya no son inmunes a estos, la salmonella se
presenta como el microorganismo mas patógeno según
los autores y de mayor resistencia a los factores físicos
y mas aun los antibióticos y que cada día se hacen
mas resistentes a estos, como es el caso de la ampicilina y la
polimixyne B en el cual la salmonella demuestra ser muy
resistente a este antibiótico pero en cambio se
muestra muy
sensible a la amoxycilina y a la cefotefan; es por eso que se
recomienda el uso de estos dos últimos para el tratamiento
de una enfermedad donde esten presentes algunas e estos
microorganismos (salmonella).
Los colorantes on muy utilizados en los laboratorios
microbiológicos para teñir los microorganismos.
Pero se debe tener en cuenta que este también cumple
funciones
inhibidoras para algunos microorganismo y para otros no, los gram
positivos son mas sensibles a los colorantes que los gram
negativos.
FULMER / PORTER "Microbiología General"
BURROWS WILLIAMS (1974) "Tratado de
Microbiología". 20º edición. Editorial
Interamericana, S.A. México
– D.F.
JOKLIK /WLLETT/AMOS/WILFERT (1994)
"Microbiología". 20ª edición. Editorial
Médica Panamericana Buenos Aires
– Argentina.
CARPENTER, P (1969) "Microbiología", 1ª
edición. Editorial Interamericana. México
D.F.
Documento cedido por:
JORGE L. CASTILLO T.