Fotometría

Fotometría

3. Parte
   Experimental
4. Resultados y
   Conclusión
5. Bibliografía

Introducción

Los métodos
espectroscopios de análisis se basan en la medida de la
radiación
electromagnética emitida o absorbida por la materia. Los
métodos de
emisión utilizan la radiación
emitida cuando un soluto es excitado por energía
térmica, eléctrica, o energía radiante. Los
métodos de absorción, por el contrario,
están basados en la disminución de la potencia (o
atenuación) de la radiación electromagnética
como consecuencia de la absorción que se produce en su
interacción con el soluto.

Los métodos espectroscópicos se consideran
como una de las mejores y más utilizadas técnicas
instrumentales a disposición del científico, para
la adquisición de información tanto cuantitativa como
cualitativa.

Los métodos espectroscópicos se clasifican
según la región del espectro
electromagnético que esté implicada; siendo las
más importantes las regiones de rayos X,
ultravioleta, visible, infrarroja, microondas y
radiofrecuencia.

Absorción de Radiación
Electromagnética:

Se denomina absorción al proceso por el
cual una especie, en un medio transparente, capta selectivamente
ciertas frecuencias de la radiación
electromagnética.

Los métodos de absorción poseen la
considerable ventaja de producir poca o ninguna alteración
en el sistema
estudiado.

El espectro
electromagnético:

Colorímetros:

Los colorímetros utilizan el ojo humano como
detector y el cerebro como
transductor. Sin embargo, el ojo y el cerebro solamente
pueden comparar colores. Como
resultado, los métodos calorímetros requieren siempre la
utilización de uno o mas patrones en el momento en el que
se realiza el análisis. Otras desventajas consisten en
que el ojo humano responde a un intervalo espectral relativamente
limitado (400 a700 nm), y es incapaz de realizar la
comparación requerida si la solución del soluto
contiene una segunda sustancia coloreada. Finalmente el ojo no es
tan sensible a pequeñas diferencias en la absorbancia como
lo es un detector fotoeléctrico; en general, no se pueden
discernir diferencias de concentración menores del 5 por
100 aproximadamente.

Fotómetros:

Un fotómetro es un dispositivo sencillo
relativamente barato para los análisis por
absorción, posee fácil mantenimiento
y resistencia que
pueden no tener espectrofotómetros más
sofisticados. Además, cuando en el análisis no se
necesita una pureza espectral elevada (y frecuentemente es
así), el fotómetro proporciona medidas tan precisas
como las obtenidas con instrumentos más
complejos.

Espectrofotómetros:

Un espectrofotómetro está equipado con un
monocromador de prisma o red, que permite la selección
de cualquier longitud de onda dentro de la capacidad del
instrumento. Los espectrofotómetros son adecuados para
realizar medidas en las regiones ultravioleta, visibles e
infrarroja.

Determinación de la relación entre la
absorbancia y al concentración:

Los patrones de calibración para un
análisis fotométrico o espectrofotométrico
deben ser tan semejantes como sea posible a la composición
total de las muestras, y deben abarcar un intervalo razonable de
concentraciones del soluto. En raras ocasiones, o casi nunca, se
puede suponer que se cumple la Ley de
Lambert-Beer y utilizar un patrón único para
determinar la absortividad molar; todavía es aún
menos prudente basar los resultados de una análisis es un
valor de
absortividad molar obtenido de la literatura.

Parte experimental

Experimento:

• Medición cuantitativa del poder
  reductor de un glúcido con el método
  de Somogyi-Nelson.

Método:

• Someter al procedimiento
  de Somogyi-Nelson soluciones
  de glucosa de concentraciones diferentes y conocidas y
  solución de concentración
  desconocida.
• Medir en el fotocolorímetro la intensidad del
  color
  desarrollado, habiendo seleccionado previamente el filtro
  apropiado para el instrumento.

Procedimiento:

• Colocar 1 ml de solución de glucosa de
  distintas concentraciones de diferentes tubos numerados (rango
  de 6 tubos aproximadamente).
• Colocar 1 ml de solución de
  concentración desconocida (hacerlo en
  duplicado).
• Agregar a todos los tubos 1 ml de reactivo de
  Somogyi, mezclar. Tratar en igual forma el tubo
  blanco.
• Colocar todos los tubos, sumergiéndolo en
  agua
  fría de la llave, cuidando de no agitarlos para evitar
  la reoxidación del ion cuproso.
• Agregar 1 ml de reactivo de Nelson a cada uno de los
  tubos. Mezclar.
• Agregar 7 ml de agua
  destilada a todos los tubos. Mezclar.
• Seleccione el filtro apropiado para el experimento de
  acuerdo al color desarrollado.
• Medir en el fotocolorímetro el color
  desarrollado, ajustando a 100% de absorbancia del instrumento
  con el blanco de la reacción.

Resultados y Conclusión

Registro:

• Confeccionar una gráfica con los resultados
  obtenidos, colocando en la abscisa las concentraciones de
  glucosa y en la ordenada las lecturas del
  fotocolorímetro.
• Calcular el factor de calibración.
• Calcular en microgramos/ml y en
  micromoles/ml.

Cálculos:

 Para ver los cálculos
seleccione la opción "Descargar" del menú
superior

Absorbancias a distintas longitudes de
onda:

# La absorbancia del tubo blanco sirve para restarle
la Absorbancia a los demás tubos debido a que en esta no
se encuentra la concentración de glucosa.

Constante de calibración:

Determinación de la concertación de la
muestra
desconocida:

Conclusión:

La mejor longitud de onda que pasa por el origen es de
540, registrando la concentración de la muestra problema
con los datos de la
absorbancia y la constante de calibración promedio de
aquella longitud de onda. Demostrando así la ley de
Lambert-Beer que establece una proporcionalidad directa entre la
concentración e intensidad del color de una sustancia en
solución medida como absorbancia.

El papel que
cumple los reactivos de Somogyi y Nelson es: el reactivo de
Somogyi al actuar este con la glucosa el cual es una azúcar
reductor, reduce al ion cúprico en ion cuproso, en medio
alcalino caliente. El reactivo de Nelson posee ácido
arsenico-molibdoso Mo+4 el cual solubiliza al ion cúprico,
reduciéndose a Mo+2 (suboxidomolibdeno), dando un color
azul proporcional a la cantidad de glucosa presente.

Bibliografía

• Manual de laboratorio
  de Bioquímica General .
• Sook/West : Qumica Analitica, tercera
  edición.

Integrantes :

Paola Olivares G.

Claudia Durán L.

Universidad de la Serena

Facultad de Ingeniería

Escuela de Ing. En Alimentos/