utilizando como fuente la hormona GNRH
(fertagyl)
El objetivo
principal del presente estudio es analizar la variabilidad de
resultados al momento de la extracción de embriones en
conejos, utilizando dos tratamientos, donde un grupo de
conejas serán superovuladas y otra grupo será el
control negativo,
Los animales
utilizados fueron 10 conejas de la raza Newzelad White (Nueva
Zelanda Blanco), cinco fueron tratadas con la hormona y cinco
como control negativo, siguiendo la aplicación de 0.2ml de
la hormona GnRH (20m
g, Fertagyl®
intervet, México.) por la vía
intramuscular, para posteriormente después de la
aplicación las hembras fueron cubiertas por el macho, a
las 48hrs. se procedió al sacrificio de las hembras, y
extraer el tracto reproductor, se colocó en bolsas de
plástico
que contenían 350 ml. de PBS y someter los tractos a la
extracción de los embriones, cada coneja que fue
superovulada brindo más y mejor calidad en los
embriones y además se determinó que la
aplicación de Fertagyl sirve también como
estimulante para la cópula pues las conejas
En la actualidad
las técnicas
de superovulación y extracción de embriones son
cada vez más frecuentes en el área de la reproducción asistida, siendo México
uno de los países que mas alejado esta de estos avances,
teniendo un atraso biotecnológico de casi 8 años de
las potencias europeas, por ello es importante de realizar
estudios en materia de
transgénesis y clonación animal, pero antes se debe
impulsar las ciencias
básicas de estos conocimientos de manera en que la
extracción de embriones y fertilización in
vitro sea común en el campo de la medicina
veterinaria,
así pues debemos estandarizar técnicas y protocolos para
extracción de ovocitos, embriones, y fertilización
in vitro, teniendo como experimentos
principales los de mayor facilidad por economía y
fácil manejo (Conejos, Hámster’s, Ratones
etc.) además de que son especies politocas y se pueden
recuperar en grandes cantidades y para después ser
aplicados en especies mayores , Vacas, Yeguas, Borregas(
monotocas) y debe ser menos los errores pues es más
difícil su obtención y en menor
número.
Las investigaciones
han demostrado que las relaciones altas de LH: FSH afectan la
capacidad del ovario para responder a los tratamientos con
gonadotropinas exógenas.
El efecto de altos contenidos de LH en los
preparados para superovulación, ha sido bien demostrado
por Mapletoft y col. (1990) al incrementarse la dosis de
preparados conteniendo LH en niveles por encima de los
considerados óptimos. Estos produjeron un deterioro en la
calidad de los embriones.
Estudios sobre situación de inducción a la superovulación con
GnRH reportados por Escriba y col. (2001) demuestran que al ser
inyectadas por vía intramuscular las conejas con GnRH
(20m
Fertagyl, Intervet, México) el
tracto reproductor de la coneja responde con descargas de LH y
FSH optimizando la maduración de los folículos y la
liberación de los mismos y la calidad de los embriones se
ve afectada mejorando los resultados de cantidad y calidad de los
embriones.
Se cree que al aplicar GnRH accionaremos los mecanismos
de liberación de LH y FSH con ello logra la
inducción de la coneja a la producción y maduración de
más óvulos de los que ya produce, así pues
las conejas superovuladas aceptarán al macho por la
cantidad de hormonas
circulantes en su organismo, que han ejercido a la
superovulación y la calidad de los embriones será
superior en cantidad y calidad así como la eficiencia
reproductiva de las conejas superovuladas.
Así también se pretende establecer una
alternativa para las granjas para aumentar la producción
de número de gazapos, apoyados en los estudios de
fertilización y también el estudiar la mecánica de las biotecnologías
reproductivas.
El objetivo consistió en determinar y comprobar
que la GnRH es un método
alternativo para la superovulación al ya establecido con
PMSG así como el estudiar el mecanismo endocrino de la
reproducción a la maduración de los
folículos y realizar una constratastación entre los
2 tratamientos: superovuladas y el control negativo; y de los
embriones recopilados se evaluarán para determinar la
conveniencia de el tratamiento en calidad y cantidad, de
embriones producidos por cada grupo de conejas, así como
aprender el manejo de animales de laboratorio y
sus aplicaciones en biotecnologías reproductivas como los
tratamientos hormonales.
El presente trabajo se
encuentra ubicado en el Sector cunícola de la Facultad de
Medicina Veterinaria y
Zootecnia de la Universidad
Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, en las instalaciones
de la posta Zootécnica, que se encuentra localizada en el
municipio de Tarímbaro Michoacán la cual tiene la
siguiente descripción.
Se localiza al norte del Estado, en las
coordenadas 19º48' de latitud norte y 101º10' de
longitud oeste, a una altura de 1,860 metros sobre el nivel del
mar. Limita al norte con Copándaro y Cuitzeo, al este con
Alvaro Obregón, al sur con Morelia y Charo, y al oeste con
Chucándiro. Su distancia a la capital del
Estado es de 12 kms.
Material biológico.
Los animales utilizados fueron 10 conejas de la raza
Newzelad White (Nueva Zelanda Blanco), cinco fueron tratadas con
la hormona y cinco como control negativo, las cuales fueron
seleccionadas del sector cunícola del área de
engorda, de acuerdo al cronograma de actividades
establecido.
También se utilizaron sementales del sector para
las cruzas de las conejas, los sementales son pertenecientes a
las razas manejadas en el sector, se hace mención con
más detalle en los cuadros del control de
montas.
La hormona utilizada, para el protocolo de
superovulación fue FERTAGYL® iNTERVET,
MEXICo. La cual es un equivalente de la hormona de
liberación de
gonadotropinas (GnRH), y fue utilizada como tratamiento de
superovulación en la especie cunícola.
Para la selección
de las conejas a utilizar se requirió de 5 jaulas tipo
americano con dimensiones de (90X60X40) propiedad del
CMEB (Centro Multidisciplinarlo de Estudios en Biotecnología) para albergar a 2 conejas
cada una de ellas, las cuales fueron flameadas y desinfectadas,
así mismo los comederos de tolva y bebederos de
chupón, para albergarlas posteriormente, fueron separadas
necesitando de 5 jaulas más repitiendo el proceso de
desinfección, y a las 2 semanas después se
procedió a realizar el pesaje de las hembras, para
determinar su madurez de acuerdo al peso, obteniéndose la
1era Tabla de pesos contenida en los anexos, para lo
cual se requirió de una balanza de pesas perteneciente del
sector, maraca OKEN, con capacidad para 20 kg.
El alimento suministrado a las conejas fue CONEJINA "N"
el cual es perteneciente a la casa comercial purina. El
2do pesaje de las conejas se realizo de acuerdo
cronograma de actividades, para determinar su madurez sexual de
acuerdo al peso, y se dio el Vo. Bo para la segunda etapa del
experimento. La cual consistió en la aplicación de
0.2ml de la hormona GnRH (20m g,
Fertagyl® intervet, México.)
por la vía intramuscular, para posteriormente
después de la aplicación las hembras fueron
cubiertas por el macho, se hicieron 2 tratamientos, cada uno de
los cuales comprendían 5 conejas cada uno, además
se repitió la monta, una monta a las 10:00 de la
mañana, y una monta a las 5:00 de la tarde.
Después de las 48 hrs. de la monta se
procedió al sacrificio de las hembras por el método
de desnucamiento manual, para lo
cual se requirió del equipo de matanza como cuchillos
victorinox y chaira para afilar, se procedió al corte de
la yugular y al corte de extremidades (posteriores y anteriores
así como de la cola ), desprendimiento de la piel, se
procedió la fractura de la zona pélvica, corte con
escarpelo de los ligamentos sostentores del aparto reproductor,
para de ahí se extraer el tracto reproductor,
después del eviscerado se colocó en bolsas de
plástico que contenían 350 ml. de PBS
(Dulbecco’s Phosfate buffered saline, Sigma
BioSciences) y se trasportaron al CMEB donde se continuo el
proceso.
En el Centro Multidisciplinarlo de Estudios en
Biotecnología apoyados por el Dr. Marco Cajero
Juárez, se procedió a retirar el tejido adiposo, se
requirió de Etanol al 70 %, mechero de busen, instrumental
quirúrgico, del cual se hará una descripción
de material utilizado: Tijeras de mayo, así como Tijeras
de Metzenbaum, Pinzas de Rochester -Pean, Pinzas de Ochsner,
Pinzas de Kelly, Pinzas de mosquito de Halsted y como la
utilización de una campana de flujo laminal
(LABNCO) y de cajas de petri ( SIGMA) para
la remoción de los tejidos
grasos.
El tracto reproductor fue tomado con las pinzas curvas
de y con las pinzas de dientes de ratón y se
removió el tejido con ayuda de las tijeras curvas, para
después ser colocados en las cajas de petri, previamente
llenadas con PBS (Dulbecco’s Phosfate buffered saline,
Sigma Bio Sciences) y así se realizo la
remoción se todos los tejidos.
Posteriormente en el área del quirófano,
con ayuda de agujas Luer Lock 1.60 x 35 mm 15 Gx1x
1 / 3 sin
punta, se hizo también un corte trasversal en los cuernos
uterinos para después introducir una aguja y ser armada
una jeringa con 5ml de PBS (Dulbecco’s Phosfate buffered
saline, Sigma Bio Sciences) para el lavado canulado de los
cuernos uterinos y al ser colectados en tubos falcón para
ser centrifugados a 20 000 RPM LEC/ CENTRAL GP8 x 6:00
minutos a 10 º C y el sobrenadante (la fase acuosa) se tira
y la pastilla se recupera y se resuspende en 25 ml de PBS
(Dulbecco’s Phosfate buffered saline, Sigma Bio
Sciences) y se centrifuga a 20 000 RPM x 6:00 minutos a 10
º C y el sobrenadante (la fase acuosa) se tira y la pastilla
se recupera y se resuspende en 5 ml de PBS y se limpia con
Hialuridaza (Bio Select), para romper las células
del cúmulos de granulosa y observar en un microscopio
invertido (ZEISS GERMANY), se evaluaron las cantidades y
calidades de embriones de las hembras superoovuldas y no
superovuladas, como se especifica en el área de
Resultados.
Se procedió a congelar a los embriones con DMSO
de (SIGMA BIOSCIENCES) y se congelaron en el ultra
congelador REVCO .
Las expectativas del trabajo se cumplieron como se
esperaban y los resultados se expresan de la manera
siguiente:
EMBRIONES | |
No. Coneja | No. embriones |
1 | 38 |
2 | 35 |
3 | 33 |
4 | 39 |
5 | 36 |
6 | 20 |
7 | * |
8 | 17 |
9 | * |
10 | 16 |
Total | 234 |
* Conejas : no montadas pos signos de
falsa gestación (inducida por ellas al
contacto)
Cuadro No. 1 Número total de
embriones por coneja, las primeros 5 fuerón tratdas con
GnRH y las otras cinco como control.
Cada coneja que fue superovulada brindo más
y mejor calidad en los embriones que se extrajeron
denotándose la realidad entre los tratamientos utilizados,
quedando comprobada nuestra hipótesis inicial que nos
planteamos.
Como se pude observar el Cuadro No.1, la
cantidad de embriones que nos dieron las hembras tratadas con
Fertagyl. Se muestra y se
confirma con la grafica 1.
Gráfica 1: Se muestran
los dos tratamientos y su número en cada uno de los
casos
* No produjeron embriones por que no aceptaron la
monta del macho.
Con ello pues se observa la marcada diferencia
entre el No. de embriones colectados de cada uno de los
demás tratamientos.
Se determinó que la aplicación de
Fertagyl sirve también como estimulante para la
cópula pues las conejas que no aceptaban al macho en el
primer intento después de ser inyectadas y transcurrido un
lapso de tiempo 2 o 3
hrs. aceptaron la monta denotándose la coloración
rojiza de la vulva, señal eminente de celo y
aceptación al macho.
Se comprobó la hipótesis que se
planteo que al inducir la superovulación con la GnRH se
maduraron los folículos más pronto y en mayor
número y por ende al momento de la ovulación la
tasa de fertilidad aumentó considerablemente, pues los
embriones recopilados con las hembras donde se aplicó el
tratamiento fue mayor número y fueron de mejor calidad, al
hacer una valoración de acuerdo a los revisiones
literarias.
Concluyendo que la aplicación del
tratamiento es buena cuando se requiera de mayor número de
crías o bien para razas de baja prolificidad, como es el
caso de las razas de producción de piel como lo es el
Castor Rex.
Además de mejorar la fertilidad, las
técnicas de superovulación, sincronización,
recolección y congelamiento de embriones son las herramientas
básicas de las biotecnologías
reproductivas.
También se determinó que a parte
de superovular a las conejas el tratamiento vuelve a las conejas
aun más receptivas al momento del celo y aceptan la copula
de 3 a 4 hrs. después de la aplicación de Fertagyl
por vía intramuscular.
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1991.
BLANCA AURORA MARTINÉZ
CORTÉS,
BERMUDEZ GÓMEZ LUIS
EDUARDO,
LEDESMA TAFOLLA
RIGOBERTO,
ROBLES SOLORIO ADRIAN,
HURTADO PINEDA ALEJANDRO,
SILVA SOLORZANO SILVIA,
ARIEL JIMENEZ TORES,
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y
ZOOTECNIA,
MARCO CAJERO
JUÁREZ,
CENTRO MULTICIPLINARIO DE ESTUDIOS EN
BIOTECNOLOGÍA
Yoshio Ivan Macswiney
UNIVERSIDAD MICHOACAN DE SAN NICOLAS DE
HIDALGO,
Este artículo se realizó en la
Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo en la
Facultada de Medicina Veterinaria y Zootecnia y fue
presentado en la V jornada de investigación veterinaria de la
Universidad.