Los antibióticos son sustancias químicas
producidas por microorganismos vivos tales como, hongos o plantas, que
tienen poder de
inhibir el desarrollo o
destruir bacterias y
otros microorganismos en soluciones
débiles.
Los antibióticos se pueden clasificar
en:
- Naturales: Sintetizados directamente por
microorganismos - Semisintéticos: Son aquellos que siendo
sintetizados por microorganismos, se utiliza su
núcleo-estructura y
se modifica por agregación de ciertos radicales
químicos. - Sintéticos: Son aquellos
antibióticos sintetizados por el hombre
una vez que se ha conocido su forma natural.
Cada antibiótico tiene dos formas de acción:
- Bactericidas: Entre los cuales están la
penicilina, neomicina, polimixina, etc. - Bacteriostáticos: Ej. : tetraciclinas,
cloramfenicol, eritromicina, etc.
Es importante conocer también las medidas de
actividad de los antibióticos, por ejemplo: La Penicilina
se mide por su acción sobre la cepa H. de estafilococo o
la cepa 209 y se expresa en unidades Oxford, que nos representa
la cantidad de penicilina que disuelta en 1 ml. de diluyente
produce un halo de inhibición de 24 mm. de
diámetro.
La actividad de todos lo demás antibióticos
distintos a la penicilina, se expresan en microorganismos de
droga pura
cristalina. Una unidad Oxford de penicilina es igual a 0,6
microorganismos de penicilina pura cristalizada.
Los antibióticos para ser estudiados, deben ser
sometidos a un antibiograma, el cual consiste en un estudio
"in Vitro", de la sensibilidad y susceptibilidad del
microorganismo
causante de la enfermedad frente a los diversos
antibióticos.
Luego de realizar el antibiograma podremos ver la capacidad
que tiene un antibiótico de actuar sobre un número
determinado de especies y también observar la capacidad
que posees ciertas bacterias de crecer y multiplicarse en
presencia de un antibiótico.
Los antibiogramas se pueden realizar mediante dos métodos:
1. Método de
dilución en serie (en tubo): Que es un método
Cuantitativo que se realiza en tubos, mediante el cual se puede
titular exactamente la sensibilidad de una cepa bacteriana a un
determinado antibiótico.
2. Método de difusión del
antibiótico en agar (en placa de Petri): Que es un
método cualitativo, donde observamos cuan susceptible es
el microorganismo al determinado antibiótico. (Será
explicado con más detalles en el desarrollo del trabajo).
A continuación daremos a conocer los materiales que
fueron utilizados en el laboratorio de
microbiología.
Material Diverso:
- Pie de Metro
- Portaobjetos
- Tórula
- Estufa de Cultivo
- Aceite de Inmersión
- Cristal Violeta
- Lugol
- Alcohol – Acetona
- Fucsina
- Microscopio
- Placa de Petri
- Pinza de Plástico
- Antibióticos en tableta
Nuestra muestra fue
obtenida de la saliva de un perro sano de 5 años de edad,
de acuerdo a la muestra, procedimos a hacer el antibiograma y la
tinción de gram para diagnosticar el tipo de bacteria y
así completar nuestro trabajo.
a) Realización del Antibiograma:
- Procedimiento:
–Utilizamos el método de difusión del
antibiótico en agar.
- Empleamos una placa de Petri con una cepa de 5 mm. de
altura de medio Muller-Hinton. ( Se utiliza este medio ya que
nos permite obtener resultados comparables) - Empleamos antibióticos en tabletas a dosis
conocidas - Se sembró en forma homogénea una
suspensión de microorganismos problema , en este caso
utilizamos una tórula de algodón estéril, impregnada con
saliva de un perro sano de 5 años de edad,
extendiéndola en toda la superficie de la placa - A continuación dejamos secar la superficie de la
placa por 5 a 10 minutos. - Sobre la superficie de la placa, colocamos los
antibióticos en tableta en su respectivo lugar, (como
muestra la figura 1), utilizando para ello una pinza
esterilizada. - Luego se incubó la placa por 24 horas y
posteriormente se midió el diámetro de
inhibición producido por cada uno de los
antibióticos, mediante el pie de metro. - Los resultados fueron los siguientes:
Antibiótico | Diámetro del halo |
A. | 39 mm. |
B. | 38 mm. |
C. | 30 mm. |
D. | 19 mm. |
- Al analizar la tabla de datos con los
diámetros de inhibición producidos por cada
antibióticos, obtuvimos los siguientes
resultados: - Antibiótico A. (Amoxicilina):
Presentó un diámetro de halo de 39 mm., lo que
podemos concluir que el antibiótico tiene un gran poder
inhibitorio hacia la bacteria, ya que la amoxicilina
actúa sobre las bacterias Gram (+) y Gram (-). La
bacteria que utilizamos en el antibiograma, al realizarle la
tinción de Gram resultó ser Gram (+), con esto se
comprueba el efecto del antibiótico sobre la
bacteria. - Antibiótico B. (Enrofloxacino):
Presentó un diámetro de halo de 38 mm., a lo cual
concluimos que al igual que el antibiótico A,
presentó un gran poder inhibitorio hacia la bacteria, ya
que el enrofloxacino actúa al igual que los
antibióticos anteriores, sobre bacterias Gram (+) y Gram
(-). La bacteria que utilizamos en el antibiograma, al
realizarle la tinción de Gram resultó ser Gram
(+), con esto se comprueba el efecto inhibitorio del
antibiótico sobre la bacteria. - Antibiótico C. (Doxiciclina):
Presentó un diámetro de halo de 30 mm., a lo cual
concluimos que tiene poder inhibitorio por la bacteria, pero en
menor magnitud respecto a los dos antibióticos
anteriores, ya que este antibiótico actúa sobre
bacterias Gram (+) y bacterias Gram (-).La bacteria que
utilizamos en el antibiograma, al realizarle la tinción
de Gram resultó ser Gram (+), con esto se comprueba el
efecto inhibitorio del antibiótico sobre la
bacteria. - Antibiótico D. (Neomicina):
Presentó un diámetro de halo de 19 mm., a lo cual
concluimos que tiene bajo poder inhibitorio por la bacteria ya
que este antibiótico a diferencia de los tres
anteriores, actúa sólo sobre bacterias Gram (-)
La bacteria que utilizamos en el antibiograma, al realizarle la
tinción de Gram resultó ser Gram (+), con esto se
comprueba el bajo efecto inhibitorio del antibiótico
sobre la bacteria.
b) Realización de la tinción de
Gram:
- Procedimiento:
– Se hizo un frotis con la muestra obtenida por
nosotros y se fijó a la llama
– Se cubrió la superficie del frotis con
cristal violeta durante 2 minutos
– Se botó el exceso de colorante y se
cubrió con lugol durante 1 minuto
– Se decoloró el frotis con alcohol –
acetona rápidamente
– Se lavó con agua y se
dejó escurrir
– Se tiñó con fucsina durante 10
segundos
– Se lavó con agua
– Se secó el frotis y se examinó en el
microscopio
Los resultados observados en el microscopio nos
llevaron a los siguientes resultados:
- Se encontraron bacterias Gram (+), ya que presentaron
coloración Violeta. - Con la ayuda de la Dra. Maier identificamos que
nuestra muestra contenía una gran cantidad de bacterias
del género
Corynebacterium.
La importancia que tiene conocer los antibiogramas
como futuros Médicos Veterinarios es realmente importante,
ya que con este simple método podemos hacer un diagnóstico más certero frente a los
distintos cuadros que puedan presentar nuestros pacientes.
Además de realizar el antibiograma, también
realizamos como complemento la tinción de gram para poder
diagnosticar de manera correcta el tipo de bacteria que
contenía nuestra tórula. De acuerdo a los
resultados vemos que en general los halos de inhibición
fueron bastante grandes lo que quiere decir que nuestra bacteria
(Corynebacterium) es muy sensible a los diversos
antibióticos usados en este trabajo, excepto el
antibiótico neomicina el cual presentó un halo de
inhibición más pequeño que los anteriores
debido a que el espectro que abarca la neomicina son Gram (-), y
nuestra bacteria era Gram (+), fundamentalmente se explica por
eso.
Marianela Abeleida
Roberto Astudillo Cancino
Escuela de Medicina Veterinaria
Unidad de Microbiología