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Modelo matemático del crecimiento de bacterias



    1. Concepto y expresión
      matemática del crecimiento
      bacteriano
    2. Concepto de muerte de un
      microorganismo
    3. ¿Qué necesita
      un microorganismo para crecer?
    4. Detección y medida del
      crecimiento
    5. Ciclo de crecimiento de
      poblaciones
    6. Factores físicos y
      químicos que influyen en el crecimiento
      bacteriano
    7. Caso real
    8. Conclusiones
    9. Bibliografía
    10. Anexo

    CONCEPTO Y
    EXPRESIÓN MATEMÁTICA DEL CRECIMIENTO
    BACTERIANO.

    Entendemos por crecimiento microbiano el aumento
    del número de microorganismos a lo largo del tiempo. Por
    tanto, no nos referimos al crecimiento de un único
    microorganismo
    (ciclo celular) sino al demográfico de una población. En este tema nos centraremos en
    el crecimiento de bacterias, el estudio que se hace puede
    servir también para entender el crecimiento de levaduras y
    de otros hongos. El
    crecimiento de los virus se produce
    de otra forma diferente y será tratado al final de este
    capítulo.

    Denominamos ciclo celular al proceso de
    desarrollo de
    una bacteria considerada de forma aislada. A lo largo del ciclo
    celular, tiene lugar la replicación del material de la
    bacteria, la síntesis
    de sus componentes celulares, el crecimiento para alcanzar un
    tamaño doble del inicial y su división por
    bipartición de la bacteria para dar lugar a dos células
    hijas. La duración del ciclo celular coincide con el
    tiempo de generación y depende, en general, de los mismos
    factores de los que depende este.

    El crecimiento de una población resulta de la
    suma de los ciclos celulares de todos sus individuos. Este
    crecimiento suele ser asincrónico puesto que cada
    microorganismo se encuentra en un punto diferente del ciclo
    celular. Por consiguiente, en un momento determinado en una
    población se encuentran células que acaban de
    dividirse, otras que están replicando su ADN y
    elongándose, otras que están iniciando la
    división celular, etc.

    En un crecimiento sincrónico todas las
    células se encuentran simultáneamente en la misma
    fase del crecimiento celular. Los cultivos sincrónicos son
    muy difíciles de mantener por lo que su importancia
    está principalmente ligada a los estudios básicos
    de biología
    microbiana. Sin embargo, en la naturaleza,
    las bacterias del
    suelo se
    encuentran en condiciones de crecimiento próximas a la
    fase estacionaria (en la que se produce una cierta
    sincronización del cultivo) y, por consiguiente, durante
    cierto tiempo las poblaciones naturales probablemente se
    comporten como relativamente sincrónicas.

    Las poblaciones de bacterias pueden crecer de una
    forma explosiva acumulando grandes números en un
    periodo de tiempo muy reducido. Puesto que el efecto nocivo
    (infecciones o intoxicaciones) de los microorganismos depende de
    su número en la mayoría de los casos, entender
    cómo se produce el crecimiento microbiano es importante
    para poder evitar o
    reducir dichos efectos nocivos.

    Se denomina crecimiento equilibrado a
    aquél en el que todos la biomasa, número de
    células, cantidad de proteínas,
    de ADN, etc., evolucionan en paralelo. El crecimiento equilibrado
    probablemente ocurra en muy contadas ocasiones en condiciones
    naturales.

    Por tanto, es principalmente un concepto de
    aplicación en el laboratorio.
    Sin embargo, es útil porque permite estudiar el
    crecimiento de microorganismos.

    Las bacterias crecen siguiendo una progresión
    geométrica
    en la que el número de individuos se
    duplica al cabo de un tiempo determinado denominado tiempo
    de
    generación (ô). De esta forma,
    podemos calcular el número de bacterias (N) al cabo de un
    número de generaciones (n) usando la ecuación
    siguiente:

    N = N0 2n

    siendo N0 el número de células en el
    momento actual. El número de generaciones se puede
    calcular de la siguiente forma:

    n = t / ô

    donde t es el tiempo transcurrido.

    Los tiempos de generación de bacterias creciendo
    en ambientes favorables pueden ser muy cortos (valores de
    ô de 20 min). Esto lleva a que una única célula (N0
    = 1) creciendo con un ô = 20 min, llegue a poder producir
    4.7 x 1021 células en 24 horas.

    Si la bacteria crece en un medio líquido, las
    células que se producen en cada división
    continúan su vida independientemente en la mayoría
    de los casos formando una suspensión de
    células libres.

    Cuando una célula aislada comienza a crecer sobre
    un substrato sólido, el resultado del crecimiento al cabo
    del tiempo es una colonia. Se denomina unidad formadora
    de
    colonia (UFC) a una célula viva y aislada
    que se encuentra en un substrato y en condiciones ambientales
    adecuadas y produce una colonia en un breve lapso de
    tiempo.

    Una UFC también puede corresponder a más
    de una célula cuando éstas forman parte de grupos unidos
    fuertemente (estreptococos o diplococos, por ejemplo) ya que cada
    grupo
    formará una sola colonia.

    Cuando algunos tipos de bacterias o de levaduras
    patógenas crecen sobre superficies forman
    biopelícuas (biofilms) en los que las
    células se asocian entre sí mediante capas de
    polisacáridos que forman una película que recubre
    la superficie sobre la que se encuentran las
    células.

    Los biofilms son muy importantes porque los
    microorganismos que los forman resultan más resistentes a
    antibióticos y al ataque de células del sistema inmune y,
    por consiguiente, las infecciones que producen son más
    difíciles de tratar. La presencia de biopelículas
    es un problema serio en los implantes
    ortopédicos, catéteres, etc. El sarro de los
    dientes es un ejemplo de biofilm.

    CONCEPTO DE
    MUERTE DE UN
    MICROORGANISMO.

    Desde el punto de vista microbiológico, un
    microorganismo muere cuando pierde de forma irreversible la
    capacidad de dividirse. El fundamento de esta definición
    es que si un microorganismo ha perdido la capacidad de dividirse
    no podrá formar una colonia sobre un medio de cultivo y no
    será posible detectar su presencia por los métodos
    microbiológicos tradicionales.

    Es decir: cuando no se produce aumento en el
    número de microorganismos no hay crecimiento. Sin embargo,
    un microorganismo puede estar muerto desde el punto de vista
    microbiológico y continuar desarrollando una actividad
    metabólica que se traduzca, por ejemplo, en
    liberación de toxinas.

    Por otra parte, hay que considerar que la capacidad de
    multiplicación (crecimiento) de un microorganismo puede
    verse transitoriamente afectada por lesiones o por las
    condiciones físicas o químicas del entorno. En
    estos casos, podríamos considerar como muertos
    microorganismos que pueden reanudar su crecimiento si las
    condiciones son de nuevo favorables.

    ¿QUÉ NECESITA UN MICROORGANISMO
    PARA CRECER?

    El aislamiento de bacterias a partir de muestras
    naturales se realiza, en la mayoría de los casos, mediante
    la producción de colonias aisladas en
    cultivos sólidos.

    El crecimiento explosivo de las bacterias produce un
    gran número a partir de una única célula
    inicial de forma que, tras un periodo de tiempo de
    incubación en las condiciones ambientales
    adecuadas, se produce una colonia de individuos
    iguales.

    Para crecer, un microorganismo necesita nutrientes que
    le aporten energía y elementos químicos para la
    síntesis de sus constituyentes celulares.

    Dependiendo de la fuente de carbono que
    utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en:

    • autotrofos: si es el CO2
      atmosférico (microorganismos que
      fotosintetizan)
    • heterotrofos si utilizan carbono
      orgánico.

    Los microorganismos de importancia clínica son
    todos ellos heterótrofos.

    La fórmula elemental de un microorganismo
    es, aproximadamente,
    C4H7O2N lo que supone que
    los componentes de las células son: carbono que
    representa alrededor del 50% del peso seco, oxígeno
    (32%), nitrógeno (14%) y debe estar disponible,
    normalmente, en forma de NH4 o de aminoácidos a
    los que se pueda tomar su grupo amino; fósforo (3%)
    y debe estar en forma de PO43-,
    azufre que representa en torno al 1% y
    procede de aminoácidos sulfurados o de
    SO42-; y otros elementos traza entre
    los que se encuentran Fe, K, Mg, Mn, Co, Mb, Cu y Zn.

    La elaboración de medios de cultivo que
    permitan aislar microorganismos a fin de iniciar posteriores
    cultivos puros requiere proporcionar los nutrientes antes
    citados y, en ciertos casos, algunos aminoácidos o
    vitaminas que determinados tipos de microorganismos no
    pueden sintetizar.

    Los medios de
    cultivo se pueden clasificar en definidos cuando su
    composición química se conoce
    totalmente y complejos cuando no es el caso porque
    están compuestos por mezclas de
    extractos de materiales
    complejos (extracto de levadura, extracto de carne,
    etc.).

    Por otra parte, los medios de cultivo pueden ser
    líquidos o bien sólidos si se
    añade algún agente solidificante que no sea
    consumible por los microorganismos (normalmente
    agar).

    En función de
    los microorganismos que pueden crecer en ellos, los medios pueden
    ser:

    • selectivos cuando favorecen el crecimiento de
      ciertos microorganismos mientras suprimen el de otros (por
      ejemplo, el medio SPS para clostridios),
    • diferenciales cuando alguno de sus componentes
      permite identificar las colonias de un tipo de microorganismos
      (por ejemplo medios con hematíes para identificar
      colonias de microorganismos hemolíticos)
    • selectivo-diferenciales cuando combinan las
      dos características anteriores (por ejemplo, el agar de
      MacConkey para identificar Escherichia
      coli
      ),
    • medios de enriquecimiento que permiten aislar
      un tipo determinado de microorganismo a partir de una mezcla
      una población mixta de gran tamaño.

    DETECCIÓN Y
    MEDIDA DEL CRECIMIENTO

    Existen diferentes sistemas para
    detectar y medir el crecimiento de microorganismos; los
    principales son: recuento directo, medida de la masa de las
    células, recuento d viables, medida del número de
    partículas, medida de parámetros bioquímicos
    y medida de la actividad metabólica.

    • Recuento directo: consiste en la observación al microscopio de
      volúmenes muy pequeños de suspensiones de
      bacterias. Se usan unos portaobjetos especiales denominados
      cámaras de Petroff-Hausser. Para que la medida
      sea correcta es necesario que la densidad de
      células sea del orden de 105 por ml.
    • Medida de la masa de células: el
      sistema se basa en que las células en suspensión
      dispersan la luz causando la
      turbidez del cultivo. La turbidez depende de la masa en
      suspensión y, por tanto, midiendo esta se puede estimar
      aquella. Este es el parámetro de medida más
      fácil de usar en los cultivos de laboratorio. La
      densidad de células debe ser del orden de 105
      por ml.
    • Recuento de viables: consiste en sembrar un
      volumen
      determinado de cultivo o muestra sobre
      el medio de cultivo sólido adecuado para estimar el
      número de viables contando el número de colonias
      que se forman puesto que cada una de estas deriva de una UFC.
      Para que la medida sea correcta desde el punto de vista
      estadístico, es necesario contar más de 300
      UFC.

    En ciertas ocasiones en las que la densidad de
    microorganismos es demasiado baja, éstos se pueden
    recolectar por filtración a través de una
    membrana (de 0.2 µm de tamaño de poro) y posterior
    colocación de la membrana en un medio de cultivo
    adecuado para que se formen las colonias.

    • Medida del número de partículas
      usando contadores electrónicos de partículas.
      Estos sistemas no nos indican si las partículas
      corresponden a células vivas o muertas; pero nos pueden
      dar una idea del tamaño de las partículas.
    • Medida de parámetros bioquímicos
      tales como la cantidad de ADN, ARN, proteínas,
      peptidoglicano, etc. por unidad de volumen.
    • Medida de actividad metabólica de las
      bacterias como que respiran producen una disminución del
      potencial redox del medio en que se encuentran como
      consecuencia del consumo de
      oxígeno (utilización de colorantes
      sensibles a oxidación-reducción tales como el
      azul de metileno).

    CICLO DE CRECIMIENTO
    DE POBLACIONES.

    En un cultivo bacteriano en medio líquido, se
    pueden diferenciar cuatro fases en la evolución de los parámetros que
    miden el crecimiento microbiano:

    • Fase lag o de adaptación: Durante la
      que los microorganismos adaptan su metabolismo
      a las nuevas condiciones ambientales (de abundancia de
      nutrientes) para poder iniciar el crecimiento exponencial.
    • Fase exponencial o logarítmica: en ella
      la velocidad de
      crecimiento es máxima y el tiempo de generación
      es mínimo. Durante esta fase las bacterias consumen los
      nutrientes del medio a velocidad máxima. La
      evolución del número de células durante
      esta fase se explica con el modelo
      matemático descrito anteriormente. Esta fase corresponde
      a la de infección y multiplicación dentro del
      organismo del agente infeccioso.
    • Fase estacionaria: en ella no se incrementa el
      número de bacterias (ni la masa u otros
      parámetros del cultivo). Las células en fase
      estacionaria desarrollan un metabolismo diferente al de la fase
      de exponencial y durante ella se produce una acumulación
      y liberación de metabolitos secundarios que pueden tener
      importancia en el curso de las infecciones o intoxicaciones
      producidas por bacterias.

    Los microorganismos entran en fase estacionaria bien
    porque se agota algún nutriente esencial del medio,
    porque los productos de
    desecho que han liberado durante la fase de crecimiento
    exponencial hacen que el medio sea inhóspito para el
    crecimiento microbiano o por la presencia de competidores u
    otras células que limiten su crecimiento.

    La fase estacionaria tiene gran importancia porque
    probablemente represente con mayor fidelidad el estado
    metabólico real de los microorganismos en muchos
    ambientes naturales.

    • Fase de muerte: se produce una
      reducción del número de bacterias viables del
      cultivo.

    Las fases, parámetros y cinética de
    crecimiento discutidas para el caso de los medios
    líquidos se presentan también en los
    sólidos. La cinética de crecimiento, en este
    caso, sólo se puede seguir utilizando unos sistemas de
    detección especiales siendo el más sencillo, la
    medida del número de células viables por unidad
    de superficie o por unidad de masa.

    FACTORES
    FÍSICOS Y QUÍMICOS QUE INFLUYEN EN EL CRECIMIENTO
    BACTERIANO
    .

    • Temperatura: Cada microorganismo tiene una
      temperatura
      de crecimiento adecuada. Si consideramos la variación de
      la velocidad de crecimiento en función de la temperatura
      de cultivo, podemos observar una temperatura
      mínima
      por debajo de la cual no hay crecimiento; a
      temperaturas mayores se produce un incremento lineal de la
      velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta
      que se alcanza la temperatura óptima a la que la
      velocidad es máxima. Por encima de esta temperatura
      óptima, la velocidad de crecimiento decae bruscamente y
      se produce la muerte
      celular.

    El aumento de la velocidad de crecimiento con la
    temperatura se debe al incremento generalizado de la velocidad
    de las reacciones enzimáticas con la temperatura. Se
    denomina coeficiente de temperatura a la relación
    entre el incremento de la velocidad de reacción y el de
    temperatura. En términos generales, la velocidad de las
    reacciones bioquímicas suele aumentar entre 1.5 y 2.5
    veces al aumentar 10ºC la temperatura a la que tienen
    lugar.

    La falta de crecimiento a temperaturas bajas se debe a
    la reducción de la velocidad de las reacciones
    bioquímicas y al cambio de
    estado de
    los lípidos de la membrana celular que pasan
    de ser fluidos a cristalinos impidiendo el funcionamiento de la
    membrana celular.

    La muerte celular a altas temperaturas se debe a la
    desnaturalización de proteínas y a las
    alteraciones producidas en las membranas lipídicas a
    esas temperaturas.

    Es importante tener en cuenta que a temperaturas
    bajas, el metabolismo celular es lento y las células
    paran de crecer; aunque suelen morir. Sin embargo, cuando la
    temperatura es superior a la óptima, se produce la
    muerte celular rápidamente y las células no
    pueden recuperar su capacidad de división si baja
    posteriormente la temperatura. Esto permite esterilizar por
    calor y no
    por frío.

    Hay varios tipos de microorganismos en
    función de sus temperaturas de crecimiento
    mínima, máxima y óptima.

    Tipo de microorganismo

    Temperatura

    mínima

    Temperatura

    óptima

    Temperatura

    máxima

    Mesófilo

    5 – 15

    30 – 45

    35 – 47

    Psicrófilo

    -5 + 5

    12 – 15

    15 – 20

    Psicrótrofo

    -5 + 5

    25 – 30

    30 – 35

    Termófilo

    40 – 45

    55 – 75

    60 – 90

    Los microorganismos psicrótrofos son
    mesófilos que pueden crecer a temperaturas bajas. Por
    tanto, se les puede considerar como psicrófilos
    facultativos. Esto es importante desde el punto de vista
    aplicado porque cuando se encuentran contaminando alimentos, son
    capaces de crecer en condiciones de refrigeración (4 – 8ºC) y de
    producir infecciones en los consumidores del alimento (30 – 35
    ºC).

    Desde el punto de vista clínico, los
    microorganismos capaces de producir infecciones en pacientes
    son los mesófilos y algunos psicrótrofos ya que
    sus temperaturas óptimas de crecimiento coinciden con
    las corporales.

    • Actividad de agua
      (aw)
      : Se denomina actividad de agua a la relación
      entre la presión
      de vapor de agua del substrato de cultivo (P) y la
      presión de vapor de agua del agua pura (P0). El valor de la
      actividad de agua está relacionado con el de la humedad
      relativa (HR).

    El valor de la actividad de agua nos da una idea de la
    cantidad de agua disponible metabólicamente. Por
    ejemplo: comparemos el agua pura
    donde todas las moléculas de agua están
    libremente disponibles para reacciones
    químicas con el agua presente en una
    disolución saturada de sal común (NaCl) donde una
    parte importante de las moléculas de agua participa en
    la solvatación de los iones de la sal disuelta. En este
    último caso, la actividad de agua mucho menor que en el
    primero. conforme aumenta la cantidad de solutos en el medio,
    disminuye su actividad de agua.

    El agua es un substrato en muchas reacciones
    bioquímicas (proteasas y lipasas, por ejemplo). Cuando
    no hay agua disponible, estas reacciones se detienen y el
    metabolismo se para. Esta falta de agua también detiene
    muchas de las enzimas que
    podrían degradar las estructuras
    biológicas. Por ello, las células que no crecen
    por falta de agua no mueren rápidamente: los sistemas de
    degradación tampoco funcionan y no las
    degradan.

    Es decir: cuando un microorganismo se encuentra en un
    substrato con actividad de agua menor que la que necesita, su
    crecimiento se detiene. Esta detención del crecimiento
    no suele llevar asociada la muerte del microorganismo, sino que
    éste se mantiene en condiciones de resistencia
    durante un tiempo más o menos largo. En el caso de las
    esporas, la fase de resistencia puede ser considerado
    prácticamente ilimitada.

    La gran mayoría de los microorganismos requiere
    valores de actividad de agua muy altos para poder crecer.
    Los valores
    mínimos de actividad para diferentes tipos de
    microorganismos son, a título orientativo, los
    siguientes: bacterias aw>0.90, levaduras aw>0.85, hongos
    filamentosos aw>0.80.

    Como puede verse, los hongos filamentosos son capaces
    de crecer en substratos con actividad de agua menor (más
    secos) de la que permite el crecimiento de bacterias o de
    levaduras. Por esta razón se puede producir deterioro de
    alimentos de baja actividad de agua (por ejemplo, el queso o
    almíbares) por mohos (hongos filamentosos) y no por
    bacterias.

    En función de su tolerancia a
    ambientes con baja aw, los microorganismos que pueden
    crecer en estas condiciones se clasifican en
    halotolerantes, halófilos y
    xerófilos según toleren o requieran
    condiciones salinas o hipersalinas, respectivamente.

    La reducción de la actividad de agua para
    limitar el crecimiento bacteriano tiene importancia aplicada en
    industria
    alimentaria. La utilización de almíbares,
    salmueras y salazones reduce la actividad de agua del alimento
    para evitar su deterioro bacteriano.

    • pH: Es un parámetro crítico en
      el crecimiento de microorganismos ya que cada tipo de
      microorganismo tiene un rango de pH en el que
      puede vivir adecuadamente, fuera de este rango
      muere.

    El pH intracelular es ligeramente superior al del
    medio que rodea las células ya que, en muchos casos, la
    obtención de energía metabólica depende de
    la existencia de una diferencia en la concentración de
    protones a ambos lados de la membrana
    citoplásmica.

    El pH interno en la mayoría de los
    microorganismo está en el rango de 6,0 a 8,0. Los rangos
    de pH tolerables por diferentes tipos de microorganismos son,
    también, distintos. Hay microorganismos
    acidófilos
    que pueden vivir a pH=1.0 y otros
    alcalófilos que toleran pH=10.0.

    Hay que considerar que, como consecuencia del
    metabolismo, el pH del medio de crecimiento suele tender a
    bajar durante el cultivo. Por otra parte, la bajada del pH del
    medio que producen ciertos microorganismos les confiere una
    ventaja selectiva frente a otros competidores.
    Así, por ejemplo, las bacterias lácticas que
    producen grandes cantidades de ácido láctico como
    consecuencia de su metabolismo primario reducen el pH del medio
    a valores inferiores a los soportables por otras bacterias
    competidoras (llegan a bajar el pH del medio hasta 4.5). De
    esta forma, las bacterias competidoras mueren y las
    lácticas se convierten en la población
    dominante.

    La bajada del pH se puede deber a varios factores, uno
    de los cuales es la liberación de ácidos
    orgánicos de cadena corta (fórmico,
    acético, láctico) por ciertas
    bacterias.

    En este sentido, hay que tener en cuenta que la
    acción bactericida de estos ácidos
    orgánicos de cadena corta es más potente que la
    debida únicamente a la bajada del pH que producen. Esto
    es, los ácidos orgánicos de cadena corta son
    tóxicos para algunas bacterias por sí
    mismos.

    El efecto letal del pH ácido sobre los
    microorganismos tiene aplicación en la
    conservación de alimentos acidificándolos. De
    esta forma, la adición de ácido acético en
    forma de vinagre permite la conservación de alimentos
    perecederos (escabeches, por ejemplo) y la producción de
    ácidos en el curso de fermentaciones naturales permite
    alargar la vida de los alimentos (coles fermentadas, por
    ejemplo).

    • Potencial redox: nos indica la capacidad del
      substrato para aceptar o donar

    electrones, esto es: sus características
    oxidantes o reductoras. Uno de los factores que
    intervienen en el potencial redox, aunque no el único,
    es la concentración de oxígeno
    [O2].

    Hay microorganismos que requieren ambientes oxidantes
    para crecer, mientras que otros necesitan ambientes reductores.
    El metabolismo de ambos tipos de microorganismos presenta
    diferencias notables. El requerimiento de condiciones oxidantes
    o reductoras no debe confundirse con la necesidad de presencia
    o ausencia de oxígeno para que se produzca el
    crecimiento.

    En general, cuando un microorganismo requiere un
    ambiente
    oxidante se dice que desarrolla un metabolismo oxidativo
    (o respirativo) mientras que los microorganismos que
    requieren ambientes reductores (o menos oxidantes) realizan un
    metabolismo fermentativo.

    Un microorganismo es aerobio cuando necesita
    oxígeno para vivir y es anaerobio cuando o bien
    no lo necesita (anaerobios facultativos como las
    bacterias entéricas, o como Saccharomyces
    cerevisiae
    ; o anaerobios aerotolerantes como las
    bacterias lácticas) o cuando muere en presencia de
    oxígeno (anaerobios estrictos como los
    clostridios).

    Hay microorganismos que, aunque viven en presencia de
    oxígeno, no son capaces de utilizarlo como aceptor final
    de electrones y deben desarrollar un metabolismo fermentativo
    (los estreptococos, por ejemplo).

    Por otra parte, hay microorganismos que pueden
    desarrollar ambos tipos de metabolismo. Esto es: en presencia
    de oxígeno desarrollan un metabolismo oxidativo y en su
    ausencia, fermentativo. El rendimiento de los procesos
    fermentativos es menor que el de los respirativos: las
    bacterias y las levaduras producen menos biomasa cuando crecen
    fermentando que cuando lo hacen respirando.

    En el curso de ciertas reacciones metabólicas
    redox se forman compuestos altamente reactivos
    (radicales libres, formas superóxido) que pueden
    dañar las proteínas, membranas y ácidos
    nucleicos produciendo la muerte de las células. Las
    células se defienden de estos compuestos reactivos
    mediante las enzimas de: superóxido dismutasa
    (SOD) y catalasa. Los anaerobios estrictos carecen de
    SOD y de catalasa o tienen niveles muy bajos de
    estas enzimas de forma que no pueden sobrevivir en presencia de
    oxígeno. La detección de estas enzimas tiene
    valor taxonómico.

    CASO
    REAL:

    Propagación de células del
    Lactobacillus casei a escala de
    laboratorio para la elaboración de una bebida
    multifuncional probiótica, con el fin de evaluarla en el
    tratamiento y prevención de enfermedades
    gastrointestinales.

    El Lactobacillus casei, es una bacteria ácido
    láctica que es utilizada para la elaboración de
    productos lácteos
    fermentados, conocida por tener excelentes efectos
    nutricionales, además de un sabor agradable, teniendo un
    efecto promotor de la salud, esto a
    través de la microflora intestinal y modulación del sistema inmune.

    La cepa de Lactobacillus casei ha demostrado tener
    efecto sobre los problemas
    gastrointestinales de niños
    de corta edad, demostrando la disminución de la
    presencia y frecuencia de diarrea,
    además de parásitos intestinales patógenos
    como la Giardia lamblia y sobre la flora intestinal.
    Esto se logró hallando una concentración celular
    mediante bioensayos de laboratorio, a determinados periodos de
    tiempo y con características semejantes, por duplicado
    para optimizar cada uno de los procesos.
    Se realizó a nivel de laboratorio, mediante recuentos en
    cámara de Newbauer, realizando esto en tratamiento por
    duplicado de lo cual se obtuvieron los resultados de fermentar
    la bebida por 4 horas a una temperatura de 40°C y sin
    agitación.

    Bioensayo para estudiar el comportamiento
    del inóculo de 3 y 2 horas de incubación, sin
    aplicar agitación.

    BIOCONVERSIÓN ESCALA DE LABORATORIO (2
    L)

    Acidez inicial: 19 °D Inóculo:
    3%,

    Temperatura empleada: 40 °C. r.p.m. No se
    presenta

    Recuento del inóculo: 1,0 – 2,0 *
    109 cell / ml Volumen del inóculo: 60
    ml.

    Volumen de trabajo: 2000 ml. Tiempo de proceso: 6
    horas

    Tiempo de incubación del inóculo:
    3 y 2 horas.

    Resultados del crecimiento celular para el
    inóculo de 3 y 2 horas de incubación, sin aplicar
    agitación

    Tiempo de Incubación

    3 horas de incubación sin
    agitación

    2 horas de incubación sin
    agitación

    Cell / ml

    °D

    Cell / ml

    °D

    0

    1,3*108

    19

    9,2*107

    19

    1

    2,4*108

    26

    2,3*108

    25

    2

    1,2*109

    47

    1,6*109

    35

    3

    1,4*1010

    85

    1,7*1010

    82

    4

    1,5*1010

    105

    1,9*1010

    97

    5

    1,7*1010

    107

    1,6*1010

    100

    6

    1,5*1010

    113

    1,5*1010

    112

    Gráfico -Resultados del crecimiento celular para
    el inóculo de 3 y 2 horas de incubación sin aplicar
    agitación-

    Inferencia.

    La fase Lag o de adaptación es relativamente
    larga (1 hora) si se compara con organismos que se reproducen en
    sólo 20 o 30 minutos.

    La fase exponencial dura 2 horas por lo tanto cuando las
    bacterias tienen 2 horas de haber sido cultivadas es cuando se de
    el mayor consumo de nutrientes que les permite incrementar su
    velocidad de crecimiento para infectar al objetivo; por
    lo tanto en el caso del yogurt es beneficioso que se reproduzca e
    incluso se podría acelerar esa reproducción aumentando la cantidad de
    nutrientes del medio, pero si lo que se quisiera es erradicar o
    contrarrestar el crecimiento bacteriano, es en esta fase en la
    que se debe aplicar o bien un antibiótico o bien alterar
    las condiciones del medio de cultivo para dificultar la
    absorción de nutrientes y por ende perjudicar la
    reproducción bacteriana y así proteger al organismo
    de la infección bacteriana.

    En la fase estacionaria ya no hay ni
    multiplicación ni infección. En el caso de la
    bacteria de yogurt es en esta fase en la que entran en
    acción ejerciendo su actividad gastrointestinal sobre la
    flora intestinal y otros organismos patógenos.

    CONCLUSIONES

    • El crecimiento bacteriano puede considerarse como el
      crecimiento de poblaciones de muchos millones de células
      cuyas características son esencialmente estadísticas, y el comportamiento de
      la
      célula individual es tomado como una
      frecuencia.
    • El crecimiento de las bacterias en cultivo puede
      determinarse midiendo experimentalmente el incremento de la
      materia
      celular (protoplasma) o del incremento del número de
      células.
    • Las posibilidades fisiológicas de los
      microorganismos se relacionan inversamente con sus necesidades
      nutricionales, ya que, la síntesis de componentes
      celulares a partir de materia inorgánica o compuesto
      inorgánicos simples es obviamente un proceso más
      complejo de lo que sería si los productos de partida
      fueran sustancias orgánicas complejas
      químicamente más parecidas a los constituyentes
      finales de la célula.
    • Los microorganismos probióticos juegan un
      papel importante en el desarrollo de nueva flora intestinal y
      de sustancias capaces de disminuir los patógenos como
      bacterias, virus y parásitos.

    RECOMENDACIONES

    • Al hacer uso de un medio gráfico es muy
      importante realizar un buen análisis de la curva de crecimiento
      bacteriano, ya que esto permite crear un cultivo que
      podrá ser catalizado ya sea positiva o negativamente
      según sea el resultado o producto que
      necesitemos generar.
    • Para el caso específico del Lactobacillus
      casei recomendamos que si se desea aumentar o agilizar la
      producción se agregue en la fase exponencial un
      concentrado del producto en lugar de agregar un concentrado de
      nutrientes, pues si bien es cierto que en esta fase las
      bacterias absorben la mayor cantidad de nutrientes,
      perderán tiempo en sintetizarlos y empezar a dividirse;
      si en cambio se agrega un concentrado del producto se ahorra el
      tiempo de síntesis y las bacterias empiezan de inmediato
      su multiplicación.

    BIBLIOGRAFÍA

    Consultados 2 de julio de 2005, 9:30 p.m.

    ANEXO

    GLOSARIO

    • Agar: elemento solidificante muy utilizado
      para la preparación de medios de cultivos. Se
      licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo
      y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas
      excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las
      bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en
      él.
    • Cepa: variante genética específica de un
      organismo. Conjunto de individuos de una misma especie
      existente en una colonia o cultivo.
    • Inóculo: inoculum (microbio)
      pequeña cantidad de un producto que contiene bacterias y
      que se toma, por ejemplo, para hacer un cultivo, una resiembra
      o infectar determinados animales de
      experimentación.
    • Metabolito: metabolito
      (Bioquím.) producto del metabolismo
      inmediato.
    • Microflora intestinal: la microflora
      intestinal son bacterias intestinales cuya principal
      función es fermentar la sustancias aportadas por los
      alimentos (por ejemplo, las fibras alimentarias), que no pueden
      digerirse en el intestino delgado. Esta fermentación produce, entre otras
      moléculas, ácido láctico y ácidos
      grasos de cadena corta (acético, propiónico y
      butírico.
    • Probióticos: las sustancias
      probióticas (bacterias vivas) y las prebióticas
      (componentes alimentarios de los que viven éstas). Las
      bacterias buenas o "probióticas" ayudan a mantener un
      equilibrio
      bacteriano saludable, estimulan la inmunidad intestinal y
      evitan la aparición de organismos patógenos que
      causan las alteraciones estomacales e intestinales.

    Algunos ejemplos de alimentos probióticos son:
    ciertos yogures, productos lácteos fermentados y otros
    alimentos como verduras y productos de soja
    fermentados.

    GRUPO DE DISCUSIÓN

    BR. KARLA GRISELL MENA DURÁN

    BR. HILDA MARISELA SHUPAN PINTO

    BR. KRISCIA MIREYDA REYNOSA MENDOZA

    BR. JENNIFER MARICELA GUZMÁN
    MELGAR

    UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

    FACULTAD DE QUÍMICA Y FARMACIA

    DEPARTAMENTO DE FÍSICA, QUÍMICA Y
    MATEMÁTICA

    SECCIÓN DE MATEMÁTICA

    MATEMÁTICA III CICLO 01/2005

    CIUDAD UNIVERSITARIA, 11 DE JULIO DE 2005

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