La linfadenitis caseosa (LC) es una enfermedad crónica del ganado, caprino y ovino, que ocasiona una inflamación de los nódulos linfáticos, anorexia y muerte (1-3). Su importancia se debe a su diseminación en el noreste de México en los estados de Durango y Nuevo León (6,7), con pérdidas económicas significativas en la producción caprina (1,5,7,16). El agente etiológico es una bacteria pleomórfica Gram positiva denominada Corynebacterium pseudotuberculosis (sinónimo de C. ovis) que fue descubierta en 1888 por Nocard en 1894 similar al bacilo diftérico (1, 17,). Aunque hasta 1939 Shaw (4,21) comprobó su responsabilidad en la LC en cabras. C. pseudotuberculosis es un parásito intercelular facultativo y su acción patógena se debe a la exotoxina que libera en los nódulos linfáticos, provoca alteración intra y extra vascular de la circulación de fluidos y la sintomatología típica: anorexia, pérdida de peso, debilitamiento general y muerte (13).

Las razas de las cabras que se encuentran en México, sensibles a la LC, son: Murcina, Nubia, Alpina, Saanen y Teggenburg (7, 9). Importantes por que se utilizan como sementales de doble cría simple, lo que representa un riesgo potencial para la diseminación de la enfermedad. (1,8,10) observaron que existen otras corinebacterias asociadas a la enfermedad y según Ashfag (2) es posible aislar C. ovis en 70% de los casos.

Aunque parece ser que las cabras mexicanas es diferente de la típica LC . Sin embargo, para establecer el diagnóstico y control es necesario encontrar un sistema de identificación confiable, ya que los sistemas comunes utilizados tienen diferentes inconvenientes (15). Mientras que la clasificación de microorganismos por taxonomía numérica, basada en los principios de la taxonomía Adansoniana afirman que, el máximo de la información posible sobre la bacteria en estudio, debe ser recabada y que todas las pruebas bioquímicas se consideran de igual valor (5, 6, 14).

En la taxonomía numérica, las bacterias se clasifican con base al por ciento de su similaridad, según los resultados del análisis fenético (fenones), en función de los caracteres bioquímicos observados en bacterias usadas como referencia (4, 21, 22). Con base en el problema de la LC en los hatos de Durango y Nuevo León y las ventajas señaladas por la taxonomía numérica. Se planteó como estrategia utilizar un sistema de identificación para definir si una o varias especies están verdaderamente implicadas en la enfermedad, de esa manera aumentar la información sobre la LC, que permitan una detección rápida y un control eficaz. Por lo anterior, los objetivos del este trabajo fueron: i) Analizar la causa de la linfadenitis caseosa en cabras del norte de México ii) Aplicar la taxonomía numérica en la identificación de esos agentes etiológicos responsables de la enfermedad en esas cabras.

Origen de las bacterias- Con base en las localidades del estado de Nuevo León: Sta. Rosa, Mpio. de Apodaca, N. L., San José, Centro de Cría Caprino de la Facultad de Agronomía de la UANL, Monterrey, N. L. y Tlahualilo Centro de Cría Caprino, Durango, Dgo, en el noreste de México. Se seleccionaron cabras con sintomatología de LC.

La toma de la muestra en el animal fue el área de absceso del cuello de las cabras seleccionadas. se limpió con alcohol 95% y yodo 2 %, con un bisturí se realizó una incisión, después se presionó a ambos lados del absceso para drenarlo, la secreción que se obtuvo al principio, se desechó, el contenido se colectó en tubo estériles con tapón de rosca, lo que se mantuvieron á 5 °C, hasta su traslado al laboratorio y en menos de 24 h iniciar su aislamiento de Corynebacterium (17,19,20,22).

Aislamiento de Corynebacterium spp

En este caso se usaron isopos con fluido caseoso que se inocularon en caldo soya tripticasa (DIFCO) con 0.1 % de telurito de potasio (MERCK) esterilizado por filtración con el sistema milipore (GELMAN), estos tubos se incubaron á 30 °C por 5 días. Para su purificación se resembraron en placas de agar infusión cerebro-corazón (AICC) con 0.1 % de telurito de potasio, por 5 días y obtener cultivos axénicos. Posteriormente todos los aislados fueron conservados en AICC y se almacenaron á 8 °C.

San José: San José, Centro de Cría caprino de la Facultad de Agronomía de la UNAL. Monterrey, N. L., México. T1: Tlahualilo, Durango, Dgo, México. Sta. Rosa: Sta. Rosa, Mpio. de Apodaca, N. L., México. CBUNL: Ciencias Biológicas, Universidad Autónoma de Nuevo León, San Nicolás de los Garza, N. L. Cepa ATCC 29593, Dr. Ryo. Yanagawa, Fac. de Medicina Veterinaria, Sapporo, Japón.

Las cepas de colección de Corynebacterium utilizadas en esta investigación se presentan en el cuadro 1, como parte inicial del trabajo de identificación se realizaron observaciones al microscopio electrónico para definir la morfología y dimensiones de las células, por la técnica de tinción negativa con acetato de uranilo concentrado. (11,14).

Como base se usaron las siguientes: catalasa (6), benzidina (9), oxidasa (14), movilidad, por el método 2 (6), producción de ácido a partir de carbohidratos, se utilizaron 24 azúcares: almidón, glucosa, sacarosa, maltosa, dextrina, lactosa, manitol, glicerol, galactosa, glicógeno, inulina, celobiosa, fructuosa, inositol, salicina, adonitol, xilosa, ramnosa, arabinosa, rafinosa, melisitosa, trealosa y dulcitol a una concentración final de 0.5%, Rojo de metilo, Vogues-Proskauer. Amoniaco de xantina y tiroxina (6,15). Producción de ácido sulfhídrico (14, 15), hidrólisis de Gelatina, método 2 (6). Utilización de citratos como única fuente de carbono, método 2 (6). Hemólisis Método 1 (14, 15). Utilización de Malonato (6). Producción de indol, método 2 (14, 15). Lipólisis y proteólisis de yema de huevo (23). Arginina descarboxilasa y Ornitina descarboxilasa (6). Reducción de nitratos (6, 15). Lisina descarboxilasa (18). Hidrólisis de caseína (14). Hidrólisis de esculina. (9, 15). Ureasa (6). Resistencia a oleato y butirato (6). Crecimiento en agar Mac Conkey. Hidrólisis de Tween 80 y 20 (15, 23).

Se realizó con un programa Fortran IV para satisfacer los siguientes requerimientos:

Comparar cada uno de los aislados con las cepas de referencia para obtener el porciento de similaridad (S) entre todos los pares posibles de los aislados (5, 12, 21). Para la codificación de los datos se utilizó un 0 si la característica fue positiva, un 1 si fue negativa y un 2 si fue variable (en el caso de las cepas de referencia). Al realizar la comparación entre los caracteres (21), si la característica bioquímica de las cepas de referencia fue variable, entonces se incrementó en un 1 el conteo al que pertenece la característica de esas cepas, si no fue variable, habría dos casos, uno cuando las características de la cepa de referencia y aislado fueron distintas, que incrementó en el1 el conteo de las diferentes (MD) y el segundo cuando ambas características fueron iguales, que entonces se incrementó en 1 el conteo al que pertenezca esa característica (MP o MN).

Al finalizar todas las comparaciones de los 63 caracteres de los aislados se aplicó la siguiente fórmula. S= (MP+MN)100

MP= Característica positiva de un aislado vs cepa de referencia (conteo de positivas).

NM= Característica negativa de un aislado vs cepa de referencia (conteo de negativos).

MD= Características diferentes entre aislado y cepa de referencia.

Posteriormente se realizó la misma operación para cada aislado con cada cepa de referencia para determinar cual fue la S más alta (5, 12).

Se denominó cepas patrón o de referencia todas las de colección de Corynebacterium y cuyas características se obtuvieron de diversas fuentes bibliográficas y/o colecciones reconocidas internacionalmente.

Los resultados de las características bioquímicas que se emplearon en el análisis numérico se muestran en el cuadro 2, se designó a cada aislado con el número con que se manejaron en el laboratorio En el cuadro 3 se presentan los resultados de las características bioquímicas de las cepas de referencia, de acuerdo a la literatura consultada cuando se estableció un porcentaje (%) de similaridad de 80-100 entre los aislados. Se consideraron como de la misma especie (5,19).En el cuadro 4 se muestran que cinco aislados (3, 6, 9, 27) pertenecen a la especie de C. bovis porque cumplen con ese requisito de similaridad (12), dos de los aislados; 7 y 13 a la especie de C. equi, el aislado 2S a la especie C. pseudodiphtheriticum (23-26), al igual que los aislados 11,14 y 35 que se encuentran casi en el límite inferior y su porciento de similaridad fue de 80% (22,23). El aislado 11 pertenece a la especie de C. pseudotuberculosis (11,12), el aislado 14 a la especie de C. renale y el aislado 35 a la especie de C. xerosis. Se observaron dos aislados 12 y 17 fuera de los límites de los porcentajes de similaridad, aunque a su cercanía entre sus porcentajes; 79 y 36 Y el límite inferior 80, es posible que se trate de variedades de las especies a las que pertenecen la cepa 12 de C. renales y la cepa 17 de C. kutscheri (5,12, 27). Addo (1,5) y Ashfag (2,4,10) encontraron otras especies Corynebacterium implicadas en el problema de la LC. Lo que se corroboró en esta investigación. Sin embargo, con esta información no es posible establecer una relación directa entre la presencia de las distintas especies de Corynebacterium y la enfermedad, pues ello, requiere de otro tipo de investigación. No obstante, es posible que en la zona donde se detectaron las cabras con LC, otras especies de Corynebacterium estan implicadas. Sin embargo, como se indicó es necesaria investigación más exhaustiva como parte de una estrategia integral para ayudar a establecer la relación directa entre otras especies de Corynebacterium y la enfermedad en zonas específicas, desafortunadamente, no existe información más reciente al respecto (8,13,15).

Los resultados también indican una ligera predominancia de C. bovis en las cabras analizadas, como se ha reportado en otras partes del mundo con hatos de razas semejantes a las de este estudio (1,6,17), por lo que parcialmente se concluye que probablemente esta fue la especie de Corynebacterium causante de la enfermedad en los sitios de los estados donde se realizó la investigación (7,11,). Este trabajo, pretende llamar la atención para que futuras investigaciones utilicen la taxonomía numérica, como un método útil, ya que los procedimientos empleados tradicionalmente queden sin aportar una información más exacta sobre los microorganismos involucrados en problemas de sanidad pecuaria.