4. Principales normas de cuidado y utilización del microscopio óptico

El microscopio es un instrumento de precisión que debe tratarse con cuidado y debe manejarse correctamente para evitar errores, cansancio y pérdida de tiempo. Tenga en cuenta las siguientes consideraciones:

1. Debe mantenerse en un lugar estable. El observador debe colocarse de espaldas a los focos de luz, prefiriéndose la luminosidad amortiguada, lejos de las ventanas y sobre una mesa negra para eliminar luces parásitas y evitar una fatiga innecesaria.

2. Debe colocarse lejos del extremo del mesón, para evitar que se vuelque. La mayoría de los desperfectos se producen por golpes.

3. El microscopio se transporta verticalmente, sujeto por la empuñadura con una mano y por la base con la palma de la otra. El transporte incorrecto puede descansar todo el peso sobre el control de enfoque micrométrico, erosionando sus muescas.

4. Debe estar cubierto mientras no se usa y no debe sacársele el ocular. El polvo desgasta los componentes y se deposita en las lentes.

5. No deben tocarse los lentes oculares, objetivos ni condensador con los dedos. Las manchas de grasa y sudor los dada.

6. Las lentes deben soplarse enérgicamente con una pera de goma, no deben limpiarse con un paño seco (las partículas de polvo pueden rayarlas), ni soplando con la boca (una película líquida es muy difícil de eliminar), ni con los dedos. Si queda polvo debe emplearse papel especial o pincel que se carga electrostáticamente acercándolo a una ampolleta encendida, lo cual permite recoger las partículas.

7. Para observar hay que sentarse cómodo, en posición descansada. Las malas posiciones causan cansancio y dolores musculares.

8. Debe observarse con ambos ojos abiertos. Al estar un ojo cerrado prolongadamente, la contracción muscular y la presión sobre el globo ocular causan cansancio y a veces dolor ocular o de cabeza.

9. Debe mirarse a través del microscopio, no "en" el microscopio. Si el observador mira como si la imagen estuviese junto al ojo, la vista se cansa innecesariamente y puede producirse dolor ocular.

10. Debe haber una distancia adecuada entre el ojo y el ocular. Acérquese desde algunos centímetros poco a poco hasta observar el campo visual grande y definido.

11. Toda observación comienza con lupa y pasa ordenadamente a mayores aumentos. Esto facilita centrar y enfocar, da un campo visual inicial amplio que proporciona visión de conjunto, facilita la interpretación y permite ubicar fácil y rápidamente las estructuras. La zona de la preparación que desea observarse debe quedar en el centro del campo antes de pasar al siguiente aumento.

12. El condensador está regulado cuando se encuentra en su posición más alta o un poco más bajo. Para aumentar el contraste no conviene descenderlo excesivamente ni cerrar el diafragma, es preferible regular la iluminación con el control deslizable.

13. No debe colocarse ni retirarse una preparación estando el objetivo mayor o el objetivo a inmersión en posición de trabajo, porque pueden rayarse las lentes frontales.

14. Los movimientos de los mandos de enfoque deben ser lentos y suaves. El control macrométrico se acciona con precaución para no chocar el objetivo con la preparación, lo cual estropea la lente frontal del objetivo y rompe la preparación. No debe utilizarse el control macrométrico con inmersión. El control micrométrico debe mantenerse en posición central y accionarse un poco hacia un lado u otro. Se llega al extremo de su recorrido y se insiste, se pueden romper sus muescas, lo cual obligarla a cambiarlo.

15. La preparaciones se colocan con el cubreobjetos hacia arriba. Si la preparación está al revés, al tratar de enfocar choca el objetivo con la preparación y se daña. Antes de colocar la preparación sobre la platina compruebe la posición del cubreobjetos con la uña.

16. Si la preparación carece de cubreobjetos no debe observarse con un objetivo mayor a 10X, de lo contrario el objetivo puede chocar con la preparación y se puede rayar.

17. No debe colocarse aceite de inmersión sobre objetivos secos (lupa, menor, mayor) ni utilizarse el objetivo a inmersión como objetivo seco, porque se puede rayar.

18. Para sacar de los lentes el aceite de inmersión debe utilizarse un paño humedecido ligeramente con éter o xilol, no debe usarse alcohol, que disuelve el adhesivo de las lentes, ni algodón, que deja fibrillas pegadas al vidrio dificultando la visión.

19. No deben derramarse líquidos sobre el microscopio, si esto sucediera accidentalmente debe secarse de inmediato. No debe manejarse el microscopio con los dedos húmedos.

20. No debe dejarse el microscopio junto a un mechero encendido, por razones obvias.

21. El microscopio no debe estar encendido mientras no se usa, debe evitarse así su calentamiento excesivo. Recuerde además que su ampolleta es de alto costo y tiene una vida útil limitada.

22. Las lentes están montadas en forma muy precisa, sólo se deben limpiar externamente, sin desmontarlas. Sólo un técnico especializado puede hacerlo para una limpieza completa.

23. No se debe invertir ni ladear el microscopio sin quitar previamente el ocular, que entra por deslizamiento.

24. Cada vez que el microscopio se deja de usar debe guardarse en forma adecuada: a) ubicación lejos del borde del mesón, b) lámpara apagada, c) cable de la lámpara desenchufado, d) platina limpia y ubicada al tope superior, e) objetivo lupa en posición de trabajo, f) carro en posición central, g) condensador en su posición más alta, h) diafragma abierto.

5. Partes del microscopio óptico

Los microscopios ópticos constan de dos tipos de componentes, la parte mecánica y la parte óptica. A los componentes básicos se agregan accesorios opcionales.

A) Componentes mecánicos ("Montura"): Piezas fijas, que sirven como soporte para el sistema óptico (estativo), y piezas móviles, que intervienen en la ubicación adecuada de la preparación (enfoque y centrado).

1. Base o Pie: pieza horizontal maciza, de forma variable, pesada, situada en la parte inferior del microscopio, al que sirve de apoyo y da estabilidad. Generalmente lleva asociada la fuente luminosa.

2. Empuñadura o Brazo: pieza vertical más o menos curva que se une al tubo, a la platina y a la base. Sirve para tomar al microscopio durante su traslado y lleva los controles de enfoque. En algunos modelos corresponde a dos piezas independientes: el brazo, en la parte superior, y la columna, inferior, que se unen mediante una charnela, articulación que permite inclinar al microscopio en mayor o menor grado y adaptarlo a la altura de la vista.

3. Cabezal: pieza hueca, típicamente cilíndrica (cuando es así se le denomina "tubo") en la que se insertan los tubos portaoculares y el portaobjetivos. A través del cabezal se observa la imagen microscópica, sirviendo para sostener a los componentes ópticos y mantenerlos a la distancia correcta. Puede ser monocular o binocular. En los modelos binoculares cada montura de los tubos portaoculares está rodeada por anillos que permiten ajustar la longitud del tubo, y los tubos portaoculares pueden desplazarse horizontalmente, lo que permite graduar su distancia.

4. Portaobjetivos múltiple (revólver): pieza giratoria que sostiene a los tubos portaobjetivos de diferente aumento. Se desplaza horizontalmente para colocar en posición de observación a cualquiera de ellos.

5. Platina lisa o fija: pieza plana horizontal ubicada entre el objetivo y el condensador, con un orificio central circular que permite el paso de los rayos luminosos provenientes del condensador, y sobre el cual se coloca la preparación para ser observada.

6. Platina mecánica o móvil (Carro): dispositivo acoplado a la platina lisa que sujeta al portaobjetos y permite su desplazamiento. Es un sistema de piñones que actúan sobre cremalleras ubicadas perpendicularmente entre sí, produciendo desplazamiento horizontal en sentido lateral y anteroposterior, lo cual permite ubicar y fijar la zona de la preparación que desea observarse. lleva incorporadas dos pinzas que entran a presión y sujetan la preparación y escalas graduadas para medir sus desplazamientos.

7. Subplatina: Conjunto de piezas situadas bajo la platina y que soportan al aparato de iluminación. Su composición varía según el modelo, pero en general consiste en un aro que sostiene al condensador, el que se mueve de arriba-abajo mediante un tornillo, y también contiene anillos portafiltros, que alojan cristales que mantienen la luz adecuada constante, y un diafragma-iris, que regula la entrada de la luz y se controla con una palanca lateral, lo que permite obtener distintos tamaños del cono luminoso que entra en el condensador.

8. Controles de enfoque: dos o cuatro botones ubicados en la empuñadura o columna que desplazan a la platina fija o al cabezal, según el modelo, lo cual permite enfocar con precisión. Corresponden a uno o dos botones macrométricos, o de enfoque aproximado, y uno o dos botones micrométricos, de enfoque fino. Los botones o mandos macrométricos son más grandes y de avance rápido, sirven para buscar rápidamente un punto aproximado al del enfoque. Si hay dos botones macrométricos se enfrentan a ambos lados del brazo y están sincronizados, basta mover a uno de ellos. Los botones o mandos micrométricos producen movimientos lentos y permiten obtener un enfoque exacto. Si son dos, también están sincronizados. En algunos modelos de microscopios existe un solo botón que cumple funciones de macrométrico y micrométrico: a igual velocidad de giro el movimiento de la platina es más rápido cuanto más lejos se halla la preparación del plano de enfoque.

B) Componentes ópticos ("Tren óptico"): Piezas implicadas en la formación de la imagen. Incluye tres sistemas de lentes que funcionan armónicamente entre sí y una fuente de iluminación.

1. Condensador: Sistema de lentes convergentes de gran abertura que concentra la luz visible y la proyecta uniformemente sobre una muestra de tejido convenientemente preparada. Se encuentra montado en un armazón metálico sujeto a la parte inferior de la platina fija y puede subirse y bajarse a voluntad accionando un control ubicado lateralmente.

2. Sistema de objetivos: Complejo sistema de lentes (a veces hasta 10) ubicados próximos al objeto, que actúa como una sola lente convergente que recoge las longitudes heterocromáticas de la luz visible, entregando mayores aumentos que los del ocular y produciendo inversión de la imagen. Los objetivos participan en la primera etapa de ampliación: producen una imagen ampliada del objeto y la proyectan sobre un plano ubicado en el interior del cabezal. Cada objetivo, ubicado en el interior de un tubo (tubo portaobjetivo), puede estar formado por una lente o por un complejo sistema de lentes convergentes. Los modelos actuales presentan tres o cuatro objetivos ubicados en sendos tubos, cuya longitud se relaciona con su poder de aumento. Existen objetivos en seco y de inmersión. Los objetivos en seco ("lupa", "aumento menor", "aumento mayor") se utilizan dejando aire entre ellos y la preparación, en cambio el objetivo de inmersión se emplea colocando una gota de líquido ("aceite de inmersión"), cuyo índice de refracción es superior al del aire.

3. Sistema ocular: Formado por dos lentes plano-convexas centradas y empotradas en un tubo metálico más o menos corto (tubo portaocular), al que se acerca el ojo del observador, en cuya retina proyecta la segunda imagen aumentada. La lente superior se denomina propiamente lente ocular y la inferior lente de campo o frontal. Lentes adicionales corrigen las aberraciones cromáticas y esféricas. Los oculares son intercambiables y pueden tener diferentes aumentos. Permiten observar varias veces más amplificada la imagen que forma el objetivo.

4. Fuente luminosa: Antiguamente era un espejo, en la actualidad se utiliza mucho más una lámpara con filamento de tungsteno incandescente enrollado, de 6 a 12 V, montada sobre un portalámparas especial ubicado en la base del microscopio. La intensidad luminosa se regula en forma continua girando un botón o moviendo una palanca de control deslizante.

C) Accesorios

Se fabrican accesorios opcionales para colocar en los modelos modernos de microscopios compuestos, los que pueden colocarse temporalmente en los microscopios compuestos para desarrollar funciones especiales, otorgándole mayor flexibilidad al aparato. Entre ellos se cuentan accesorios para la observación simultánea de dos personas, condensadores de campo obscuro, obturador central para campo obscuro, accesorio de polarización, iluminador vertical, ocular graduado, accesorios para dibujo, accesorios para fotomicrografía.

6. Problemas frecuentes en el manejo del microscopio

Defectos de Iluminación:

a) Campo obscuro, sin imagen. Causas probables: l) Falta de luz. Corrección: Accione el interruptor, enchufe el cable, verifique si hay energía eléctrica o si la lámpara esta quemada. 2) Objetivo fuera de lugar. Corrección: Gire el objetivo a su posición de enfoque.

b) Campo ovalado, iluminado parcialmente. Causa probable: Objetivo fuera de lugar. Corrección: Gire el objetivo a su posición de enfoque.

c) Imagen muy obscura. Causas probables: l) Diafragma cerrado. Corrección: Desplace la palanca lateral del diafragma. 2) Condensador muy bajo. Corrección: Accione el control que sube el condensador. 3) Condensador defectuoso. Corrección: Avise para que lo repare un técnico.

d) Imagen muy clara. Causas probables: l) Diafragma muy abierto. Corrección: Desplace la palanca lateral del diafragma. 2) Condensador muy alto. Corrección: Accione el control que baja el condensador.

Defectos de Enfoque:

a) Falta de imagen. Causas probables: l) Preparación mal centrada. Corrección: Accione los controles del carro. 2) Preparación mal enfocada. Corrección: Accione el mando macrométrico.

b) Imagen borrosa. Causas probables: l) Preparación mal enfocada. Corrección: Accione el mando micrométrico. 2) Preparación al revés. Corrección: Coloque la preparación hacia arriba. 3) Suciedad en la preparación, ocular u objetivo. Corrección: Límpielos.

Imágenes extrañas:

a) Manchas o enturbiamientos irregulares, que se desplazan al mover la preparación. Causa probable: Suciedad en el cubreobjetos. Corrección: Limpie la preparación.

b) Manchas o enturbiamientos irregulares que se desplazan al mover el ocular. Causa probable: Suciedades en el ocular. Corrección: Limpie la lente ocular.

c) Manchas o enturbiamientos que desaparecen al cambiar el objetivo. Causa probable: objetivo sucio o con aceite. Corrección: Limpie el objetivo.

d) Manchas o enturbiamientos que no se desplazan ni desaparecen al mover el ocular, objetivo o preparación. Causa probable: Suciedad en la lente superior del condensador. Corrección: Limpie el condensador.

e) Líneas finas brillantes. Causa probable: Rayaduras en las lentes o trizaduras en la preparación. Corrección: De cuenta al profesor.

f) Otras alteraciones de la imagen (espacios blancos, espacios finos y rectos, grumos intensamente tenidos, bandas obscuras, círculos con bordes obscuros, etc.). Causa probable: defectos en las preparaciones (retracción del tejido, muescas en el cuchillo del micrótomo, fijador o colorante precipitado, tejido plegado, burbujas de aire, etc.). Corrección: Examine un sector de la preparación no alterado o solicite otra preparación.

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Palabras claves:
Microscopía, propiedades de las lentes, cuidados y uso del microscopio

Resumen:
Tras una introducción general sobre el microscopio, se explican los principales tipos que se utilizan en las ciencias biológicas, las propiedades de las lentes y del microscopio óptico, principales normas de cuidado y utilización del microscopio óptico, sus
partes y los problemas más frecuentes en el manejo del mismo y cómo resolverlos.

Trabajo enviado y realizado por:
Manuel Tamayo
Universidad Católica del Maule,
Talca, Chile.
mtamayo[arroba]hualo.ucm.cl


 

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