Efecto de algunos reguladores del crecimiento y el Fitomás-E en la micropropagación de Musa sp. variedad FHIA-18 (AAAB)
RESUMEN
En la actualidad, diversos cultivares de musáceas
son cultivados usando las técnicas
de cultivo de tejidos,
constituyendo la base de la propagación masiva de plantas vigente
en muchos países. El Fitomás-E, bioestimulante de
origen cubano obtenido a partir de la Caña de azúcar
(Saccharum officinarum L.) abre nuevas posibilidades al
ser utilizado por primera vez en condiciones in vitro. El
objetivo de
este trabajo fue
evaluar el efecto del Fitomás-E en la
micropropagación del banano FHIA-18. En la fase de
multiplicación in vitro se empleó un medio
de cultivo con las sales y vitaminas MS
(Murashige y Skoog, 1962), Tiamina (1,0 mg.l-1),
sacarosa 3,0 % y 6-bencilaminopurina (BAP) (0,0; 2,0; 4,0 y 6,0)
mg.l-1, obteniéndose 2,48 brotes por explante a
razón de 4,0 mg.l-1; posteriormente se
evaluó el efecto del Fitomás-E a concentraciones de
(0,1; 0,5; 1,0) ml.l-1 solo y combinado con BAP 4,0
mg.l-1 lográndose 1,5 brotes a 0,1
ml.l-1 Fitomás-E combinado con 4,0
mg.l-1 BAP. Durante el enraizamiento in vitro
se empleó un medio de cultivo con las sales MS, sacarosa
4,0 % y (0,1; 0,5) ml.l-1 de Fitomás-E solo y
combinado con ácido indol-3-acético (AIA) (1,3
mg.l-1), evidenciándose un incremento en la
emisión de raíces en todos los tratamientos
combinados. En condiciones de aclimatización el
Fitomás-E (0,1 ml.l-1) junto al tratamiento con
10 mg.l-1 de ácido naftalenacético (ANA)
favorecieron el porcentaje de supervivencia de las
plantas.
Palabras claves: aclimatización,
bioestimulante, cultivo de tejidos, in vitro,
propagación.
ABSTRACT.
At the present, diverse musaceas cultivares is
cultivated using the tissue culture techniques, constituting the
base of the massive propagation of plants in many countries. The
Fitomas-E, bioestimulante of Cuban origin obtained starting from
the Sugarcane (Saccharum officinarum L.) opens new
possibilities when used for first time under conditions in
vitro. The objective of this work was to evaluate the effect
of the Fitomas-E in the micropropagación of the banana
FHIA-18. In the multiplication phase it was used a culture medium
firstly with the salts and vitamins MS (Murashige and Skoog,
1962), Tiamine (1,0 mg.l-1), sucrose 3,0% and
6-benzylaminopurine (BAP) (0,0; 2,0; 4,0 and 6,0)
mg.l-1, being obtained 2,48 buds by explante to reason
of 4,0 mg.l-1; later on the effect of the was
evaluated Fitomas-E to concentration of (0,1; 0,5 and 1,0)
ml.l-1 alone and combination with 4,0
mg.l-1 BAP obtained 1,5 buds whit the combination 0,1
ml.l-1 Fitomas-E and 4,0 mg.l-1 BAP.
Rooting was used a culture medium with the salts MS, sucrose 4,0
% and (0,1; 0,5) ml.l-1 of Fitomas-E alone and
combinate with indole-3-acetic acid (IAA) (1,3
mg.l-1), being evidenced an increment in the emission
of roots in all the combined treatments. Under acclimatization
conditions being shown that the Fitomas-E (0,1 ml.l-1)
joint to the treatment with 10 mg.l-1 of naphthalene
acid (NAA) favored the percentage of survival of the
plants.
Key words: acclimatization, bioestimulante,
tissue culture, in vitro, propagation.
INTRODUCCIÓN
Los plátanos y bananos constituyen a nivel
mundial el principal alimento para cerca de 400 millones de
personas, con una producción anual de alrededor de 95.1
millones de toneladas, representando los cultivos de mayor
importancia económica en los países tropicales y
subtropicales después del arroz, trigo y maíz
(López et al., 2000).
En el continente Americano, Ecuador es el
primer exportador de banano a nivel mundial y el segundo
productor en el mundo de esta fruta; sembradas mayormente por
cultivares tipo "Cavendish" (SICA 2002).
La entrada a Cuba en
noviembre de 1990 de la enfermedad conocida como "Sigatoka negra"
causada por el hongo patógeno, Mycosphaerella
fijiensis Morelet, afectó la producción de las
empresas
estatales dedicadas a estos cultivos (Orellana et al.,
2002). A partir de estudios realizados con materiales
procedentes de la Federación Hondureña de Investigaciones
Agrícolas (FHIA), se procedió al desarrollo de
plantaciones de clones que ocupan 8 000 ha, con buenos resultados
productivos (Barranco 2001).
En nuestros días se efectúan ensayos con
sustancias estimuladoras del crecimiento
vegetal entre ellas el Fitomás-E obtenido en Cuba a
partir de la Caña de azúcar, lo que constituye una
ventaja desde el punto de vista económico. Los estudios
realizados son restrictos a condiciones de maceta o en campos
abiertos, por tanto, comprobar sus efectos en condiciones in
vitro y semicontroladas de casa de cultivo es un campo en el
que no se ha avanzado y abre nuevas posibilidades para la
investigación, al poder ser
empleado en combinación con otros reguladores del
crecimiento en los medios de
cultivo.
Teniendo en cuenta, que actualmente tanto en Cuba como a
nivel internacional no existe información sobre el efecto del
Fitomás-E en la micropropagación de bananos, se
propuso como hipótesis de trabajo que con la
aplicación del Fitomás-E en los medios de cultivo
es posible incrementar el coeficiente de multiplicación,
el enraizamiento in vitro y la aclimatización de
las vitroplantas de FHIA-18. Para cumplimentar esta
afirmación se planteo como objetivo, evaluar el efecto del
Fitomás-E en la micropropagación de Musa sp.
variedad FHIA-18 (AAAB).
MATERIALES Y MÉTODOS
La investigación se desarrolló en el
Centro de Estudios de Biotecnología Vegetal de la Universidad de
Granma, Cuba, en el período Enero – Mayo, 2007. Como
material vegetal inicial se emplearon vitroplantas de Musa
sp. cv. FHIA-18 (AAAB), procedentes de la "Biofábrica" de
Granma, en fase de establecimiento in vitro.
Los reguladores del crecimiento fueron adicionados al
medio de cultivo antes de su esterilización. l pH de los
medios de cultivo se utilizó el pHmetro Basic 20
(CRISON)® ajustándose a 5,8 previo a la
esterilización en autoclave vertical (BK-75)® a 121
ºC de temperatura y
1,2 Kgf.cm-3 de presión
durante 20 minutos.
Se emplearon frascos de vidrio de 250 ml
de capacidad con 30 ml de medio de cultivo semisólido
gelificado con 8,0 gramos de Agar-E (BIOCEN)®. El cocinado de
los medios de cultivo se realizó con empleo de un
Microwave marca
(LG)®.
Los medios de cultivo se mantuvieron en condiciones de
reposo durante tres días antes de su empleo para comprobar
que mantuvieran las condiciones de asepsia necesarias para su
utilización.
Los trabajos de laboratorio se
realizaron bajo condiciones asépticas en cabina de flujo
laminar horizontal, empleando para su desinfección
alcohol 70%.
El instrumental empleado se esterilizaron con esterilizador
eléctrico modelo
(STERI-250)® a 250 ºC de temperatura. El manejo de los
brotes para la disección, corte y extracción de los
tejidos fenolizados, se realizó en platos de aluminio
esterilizados en autoclave durante cuarenta minutos.
Los experimentos en
condiciones in vitro se desarrollaron en cámara de
crecimiento con empleo de la luz solar entre 3
500 y 4 000 lux, temperatura constante de (28 ± 2) ºC
y humedad relativa de (80 – 85) %.
Durante la fase de multiplicación se realizaron
tres subcultivos a medio de cultivo fresco cada 21 día
momento en el cual se realizaron las evaluaciones experimentales;
en la fase de enraizamiento se efectuó un solo cultivo con
evaluación a los 28 días, a partir
de este momento las vitroplantas pasaron a su
aclimatización con evaluaciones a los 15 y 30
días.
En condiciones in vitro se colocó un
explante por frasco de cultivo y se evaluaron 20 explantes por
tratamiento, representando cada frasco una repetición por
tratamiento; en las condiciones ex vitro se evaluaron 20
vitroplantas por tratamiento representando cada muestra una
repetición.
Se empleó un diseño
experimental completamente aleatorizado, dado las condiciones de
homogeneidad en las que se desarrolló la
investigación. Los datos cumplieron
los supuestos de distribución normal a través de las
pruebas de
Kolmogorov-Smirnov y la homogeneidad de varianza mediante la
prueba de Bartlet.
Se efectuó un análisis de varianza clasificación
simple y para la comparación múltiple de medias se
empleo la prueba de Tukey (0,05) mediante el programa
computacional SAS® versión 8,2 para ambiente del
sistema operativo
Windows de
Microsof®; los datos porcentuales fueron procesados mediante
una prueba de comparación de proporciones del paquete
estadístico STATISTIX versión 6,0.
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