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Práctica de microscopio (página 2)



Partes: 1, 2

  1. MARCO
    TEÓRICO:

¿QUÉ ES MICROSCOPIO?

El microscopio es un instrumento óptico que
amplifica la imagen de un
objeto pequeño. Es el instrumento que más se usa en
los laboratorios que estudian los microorganismos. Mediante un
sistema de lentes
y fuentes de
iluminación se puede hacer visible un
objeto microscópico. Los microscopios pueden aumentar de
100 a cientos de miles de veces el tamaño
original

  PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO
COMPUESTO

  • Sistema óptico
    • OCULAR: Lente situada cerca del ojo del
      observador. Amplía la imagen del objetivo.
    • OBJETIVO: Lente situada cerca de la
      preparación. Amplía la imagen de
      ésta.
    • CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos
      luminosos sobre la preparación.
    • DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que
      entra en el condensador.
    • FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el
      condensador.
  • Sistema mecánico
    • SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o
      base y el brazo.
    • PLATINA: Lugar donde se deposita la
      preparación.
    • CABEZAL: Contiene los sistemas
      de lentes oculares. Puede ser monocular,
      binocular..
    • REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes
      objetivos. Permite, al girar, cambiar los
      objetivos.
    • TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que
      aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el
      enfoque correcto.

TIPOS DE
MICROSCOPIOS:

MICROSCOPIO OPTICO

por lo que la resolución de un objeto es función de
la apertura numérica; cuanto mayor Los microscopios de
este tipo generalmente producen un aumento de 1000 veces el
tamaño original. El límite lo tienen en unas 2000
veces.

Las lentes de un microscopio óptico son el
condensador, el objetivo y el ocular. La luz que entra en el
sistema debe enfocarse sobre la preparación y para esto se
utiliza el condensador. Elevando o bajando el condensador puede
alterarse el plano del foco de luz y elegirse una posición
que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada
cerca del objeto que se observa. El aumento primario del objeto
es producido por la lente objetivo y la imagen se transmite al
ocular, donde se realiza el aumento final.
Los microscopios que se usan normalmente en microbiología están equipados con
tres objetivos: bajo poder, alto
poder y objetivo de inmersión. Estos objetivos
están montados sobre una pieza que se llama revolver que
puede rotarse para alinear el objetivo deseado con el
condensador.

La imagen formada por el objetivo es finalmente
aumentada por el ocular. El aumento total de un microscopio
compuesto es el producto del
aumento de su objetivo y de su ocular. El microscopio compuesto
es capaz de conseguir aumentos considerablemente mayores que el
microscopio construido con una sola lente. Este último,
llamado microscopio simple, se usa principalmente como lupas y
cristales de aumento.

Además del aumento, una propiedad
importante de un microscopio es su poder resolutivo; esto es la
capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy
cercanos. Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor será
la definición de un objeto. Los microscopios de gran poder
resolutivo son especialmente buenos para ver pequeñas
estructuras.
El poder resolutivo de un microscopio compuesto depende de la
longitud de onda utilizada y de una propiedad óptica de la
lente conocida como apertura numérica. Como los
microscopios ópticos utilizan luz visible, la longitud de
onda está fijada y es sea la apertura, el objeto resuelto
será más pequeño.

0.5 l

d = ———–

N sen a

d: poder resolutivo; l: longitud de onda; a: mitad del
ángulo de la lente objetivo; N: índice de
refracción del medio; N sen a: apertura
numérica.

Un factor que afecta a la apertura numérica, además
de la construcción de la lente, es el medio a
través del cual pasa la luz. Mientras que el objetivo
esté separado del objeto por el aire, su apertura
numérica nunca será mayor de 1,0; para conseguir
aperturas numéricas mayores que ésta, el objetivo
debe estar inmerso en un líquido de mayor índice de
refracción que el aire. A estos líquidos se les
denomina aceites de inmersión que se utilizan con los
objetivos de inmersión obteniendo una apertura
numérica entre 1,2 y 1,4. Aún así, al
utilizarse la luz visible (longitud de onda) estos microscopios
llegan a tener un poder de resolución de aproximadamente
0,25 µm, lo que significa que las partículas con un
tamaño más pequeño de 0,25 µm no
pueden distinguirse unas de otras.

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO

Los microscopios electrónicos utilizan rayos de
electrones en lugar de la luz, lo que les permite tener un poder
de resolución muy elevado. La longitud de onda de los
rayos de electrones es de 0,005 – 0,0003 nm, muy corta comparada
con la de la luz visible (426 – 750 nm; violeta – rojo). Es
posible con el microscopio electrónico resolver objetos
separados por una distancia de 0,003 µm, comparado con los
0,25 µm de uno óptico. Los aumentos pueden llegar a
ser de un millón de veces.

A causa de la naturaleza de
este instrumento sólo pueden examinarse objetos muy
delgados; incluso una sola bacteria es demasiado gruesa para ser
observada directamente. Por lo que, para preparar muestras para
el microscopio electrónico se necesitan técnicas
especiales de cortes ultra finos. Para seccionar las células
primero deben ser fijadas y deshidratadas (etanol o acetona).
Después de la deshidratación, la muestra se
incluye en una resina y es aquí donde se realizan cortes
finos con un ultra micrótomo, por lo general equipado con
una cuchilla de diamante. Una sola célula
bacteriana puede cortarse en cinco o seis secciones muy finas. Si
sólo tiene que observarse el contorno de un organismo, no
son necesarias secciones finas por lo que se montan
células enteras que se recubren de una capa fina de un
metal pesado (oro). El rayo
de electrones es dirigido sobre la preparación y los
electrones dispersados por el metal pesado activan una pantalla
de observación produciendo una imagen. A la
primera técnica se la denomina Microscopía Electrónica de Transmisión (MET) y a
la segunda Microscopía Electrónica de Barrido
(MEB).

MANEJO Y USO DEL
MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO

  1. Colocar el objetivo de menor aumento en
    posición de empleo y
    bajar la platina completamente. Si el microscopio se
    recogió correctamente en el uso anterior, ya
    debería estar en esas condiciones.
  2. Colocar la preparación sobre la platina
    sujetándola con las pinzas metálicas.
  3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x
    (ya está en posición) o colocar el de 10
    aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

    1. Acercar al máximo la lente del objetivo a
      la preparación, empleando el tornillo
      macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente
      y no a través del ocular, ya que se corre el
      riesgo
      de incrustar el objetivo en la preparación
      pudiéndose dañar alguno de ellos o
      ambos.
    2. Mirando, ahora sí, a través de los
      oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
      preparación con el macrométrico y, cuando se
      observe algo nítida la muestra, girar el
      micrométrico hasta obtener un enfoque
      fino.
  4. Para realizar el enfoque:
  5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería
    estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un
    poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si
    al cambiar de objetivo se perdió por completo la
    imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo
    anterior y repetir la operación desde el paso 3. El
    objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la
    preparación y por ello es fácil que ocurran dos
    tipos de percances: incrustarlo en la preparación si
    se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con
    aceite de
    inmersión si se observa una preparación que ya
    se enfocó con el objetivo de inmersión.

    1. Bajar totalmente la platina.
    2. Subir totalmente el condensador para ver
      claramente el círculo de luz que nos indica la zona
      que se va a visualizar y donde habrá que echar el
      aceite.
    3. Girar el revólver hacia el objetivo de
      inmersión dejándolo a medio camino entre
      éste y el de x40.
    4. Colocar una gota mínima de aceite de
      inmersión sobre el círculo de
      luz.
    5. Terminar de girar suavemente el revólver
      hasta la posición del objetivo de
      inmersión.
    6. Mirando directamente al objetivo, subir la
      platina lentamente hasta que la lente toca la gota de
      aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y
      se adosara a la lente.
    7. Enfocar cuidadosamente con el
      micrométrico. La distancia de trabajo
      entre el objetivo de inmersión y la
      preparación es mínima, aun menor que con el
      de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy
      grande.
    8. Una vez se haya puesto aceite de inmersión
      sobre la preparación, ya no se puede volver a usar
      el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de
      aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que
      bajar la platina y repetir la operación desde el
      paso 3.
    9. Una vez finalizada la observación de la
      preparación se baja la platina y se coloca el
      objetivo de menor aumento girando el revólver. En
      este momento ya se puede retirar la preparación de
      la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de
      inmersión en posición de
      observación.
    10. Limpiar el objetivo de inmersión con
      cuidado empleando un papel especial para óptica.
      Comprobar también que el objetivo 40x está
      perfectamente limpio.
  6. Empleo del objetivo de
    inmersión:

MANTENIMIENTO Y
PRECAUCIONES

  1. Al finalizar el trabajo,
    hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en
    posición de observación, asegurarse de que la
    parte mecánica de la platina no sobresale del
    borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
  2. Cuando no se está utilizando el microscopio,
    hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se
    ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma
    prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario
    para protegerlo del polvo.
  3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se
    ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o,
    mejor, con un papel de óptica.
  4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si
    no se está utilizando el microscopio.
  5. Después de utilizar el objetivo de
    inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
    objetivo con pañuelos especiales para óptica o
    con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se
    pasará el papel por la lente en un solo sentido y con
    suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el
    objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar
    de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos
    disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su
    sujeción.
  6. No forzar nunca los tornillos giratorios del
    microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
    revólver y condensador).
  7. El cambio de
    objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo
    siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce
    de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo
    agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se
    está observando a través del ocular.
  8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si
    se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con
    un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un
    paño humedecido en xilol.
  9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los
    microscopios al finalizar la sesión práctica y,
    al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y
    revisión general de los mismos.
  1. Los procedimientos realizados con la
    manipulación del microscopio óptico compuesto
    viendo sus partes, su morfología, sus uso e
    importancia.

  2. PROCEDIMIENTOS:

    La ciencia
    que investiga los objetos pequeños utilizando este
    instrumento se llama microscopía.

    Sin este aparato seria imposible visualizar los
    microorganismos a simple vista es fundamental en el avance de
    la citología, citogenética,
    microbiología, fitopatología virología,
    bacteriología, parasitología y demás
    ciencias
    que se trabaja con microorganismos.

  3. CONCLUSIONES:
  4. BIBLIOGRAFÍA:

Hernandez, M. manual de
laboratorio,
citología e histología. UAAAN México,
Editorial Chapingo,1990.

Moellring,F.K., la microscopia desde el principio
(folleto tecnico),Carl Zeis Obertkochen/ wurtt, 1971.

 

Wildor Huanca Apaza

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

PUNO-PERÚ

 

Partes: 1, 2
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