Prevalencia de los principales microorganismos causantes de mastitis en vacas lecheras del Centro del Valle del Cauca en los años 2003 a 2006 (página 2)

Esta enfermedad constituye un importante problema tanto
para la salud pública como para la
economía del sector lechero en general. Los
cálculos mundiales recientes han revelado que la mastitis
representa el 30 % del costo total de todas las enfermedades en
el ganado lechero. Es particularmente significativo el hecho de
que estas pérdidas sean el doble de altas que las
pérdidas por infertilidad y problemas reproductivos
(Philpot, 1996).

Aunque estas pérdidas están bien
documentadas por múltiples investigaciones, el problema no
es aún comprendido en toda su magnitud por muchos
ganaderos, algunos de los cuales sólo consideran los
gastos de atención veterinaria, drogas para
el tratamiento a los casos clínicos y leche descartada
como gastos normales del manejo del rebaño, sin tener en
cuenta las pérdidas más significativas causadas por
la presencia de la forma subclínica de la
enfermedad.

La complejidad de la mastitis subclínica es el
reflejo de la diversidad de agentes causales, variedad y magnitud
de la respuesta fisiológica de estos patógenos y
variación y eficacia de las medidas de control,
razón por la cual el problema se agudece al no existir un
método único que pueda controlar las infecciones
causadas por los distintos patógenos
mastitogénicos.

Los microorganismos que causan mastitis varían
muy poco entre países, regiones, fincas y dentro de la
finca, además, la mastitis puede estar influenciada por el
tipo de ordeño y las condiciones en las que el
ordeño se practica, lo que hace necesario conocer la
propia realidad mastitica en las diversas regiones y fincas
lecheras para de esta forma implementar programas de control de
mastitis de acuerdo a los problemas
específicos.

La mastitis constituye un serio problema para la salud
pública, ya que el uso incorrecto e indiscriminado de los
antibióticos es evidente, estos contaminan la leche con
niveles cada día más elevados e inhiben la
fermentación de los cultivos bacterianos que se utilizan
en la fabricación de productos lácteos.

Dada la situación actual y ante la necesidad de
elevar la calidad de la leche y los derivados producidos, con el
propósito de competir en el mundo de la
globalización el presente trabajo tubo como objetivo
realizar un diagnóstico sobre la prevalencia de mastitis
en el ámbito de finca e identificar los posibles agentes
causales mediante el aislamiento de cultivos
bacteriológicos a nivel de laboratorio.

Lo anterior permitirá a técnicos y
productores tomar las medidas de control y de prevención
de la mastitis produciendo leche apta para el consumo
humano.

Estudios previos, han confirmado que el análisis
bacteriológico y el conteo de células
somáticas en leche son métodos confiables para
detectar los diferentes tipos de mastitis, como también
métodos más comunes como lo son el CMT que puede
ser realizado por el mayordomo o el veterinario de
confianza.

I.
PROBLEMA

La mastitis es una enfermedad infecciosa definida como
una inflamación de la glándula mamaria. Esta
enfermedad es muy compleja y costosa, y se produce como
resultante de la interacción de diversos microorganismos y
prácticas de ordeño inadecuadas; esta caracterizada
por cambios físicos, químicos y
bacteriológicos en la leche y por cambios
patológicos del tejido glandular de la ubre.

La mastitis subclínica es mucho más
dañina que la forma clínica puesto que por cada
caso clínico existen de 25 a 40 casos subclínicos y
puede disminuir hasta en un 48% la producción de
leche.

Desde el punto de vista económico, las mastitis
es la enfermedad más importante de los hatos lecheros, las
pérdidas ocasionadas por esta enfermedad puede agruparse
de esta manera: disminución de la producción,
tiempo de retiro, medicamentos, honorarios veterinarios,
pérdida del potencial genético, descarte de vacas
por cuartos perdidos.

La gran mayoría de los casos de mastitis son de
origen microbiano y el nivel de infección depende del
grado de exposición de los pezones a los patógenos
mamarios. Por lo tanto, las medidas higiénicas,
especialmente durante el proceso del ordeño son
importantes porque reducen la contaminación de los pezones
con microorganismos patógenos, cuya principal puerta de
entrada a la glándula mamaria es el conducto del
pezón. Las mastitis causadas por microorganismos
contagiosos como Streptococcus Agalactiae, Staphylococcus
Aureus, se transmiten mucho mas fácilmente durante el
ordeño ya que el principal foco de infección es la
glándula infectada; en cambio, las infecciones por
patógenos ambientales como, E Coli, Klebsiella sp,
Streptococcus Uberis, Streptococcus Dysgalatiae y
Pseudomonas, son mas frecuentes en los periodos intermedios
de los ordeños, especialmente en los animales estabulados,
debido a que los pezones se contaminan por contacto directo con
las heces fecales o por contacto con descargas vaginales, camas
contaminadas o por succión cruzada entre animales. En
consecuencia, las practicas de higiene son el complemento mas
importante de los programas de control y, en el sentido amplio de
la palabra, es la suma de todos los intentos para controlar el
ambiente de una vaca con la finalidad de minimizar el
número de patógenos mamarios que lleguen al
conducto del pezón y evitar así una
neoinfección.

¿El conocimiento de la prevalencia de las
bacterias causantes de mastitis tendrá algún efecto
sobre el manejo de los hatos en el Centro y Norte del Valle del
Cauca?

II.
JUSTIFICACIÓN

Con este estudio se pretende mediante el examen
bacteriológico de muestras de leche recolectadas
asépticamente (que son el único método
definitivo para diagnosticar una infección intramamaria)
conocer la prevalencia de microorganismos que causan mastitis
clínica o subclínica en el Centro del Valle del
Cauca; el aislamiento e identificación de los
patógenos mamarios tiene gran importancia
epidemiológica porque nos permite orientarnos sobre las
posibles soluciones, para así entender mejor la
situación de la mastitis bovina en el país y pueda
ser utilizada en el establecimiento de medidas preventivas
aceptables, que además de económicas, practicas y
factibles deben ser efectivas en la reducción de la
prevalencia de los agentes causales para erradicar las cepas con
mayor potencial patógeno.

La importancia de esta enfermedad radica no solo en que
es la mayor causante de pérdidas económicas tanto
para el productor como para la industria lechera, sino
también, para el consumidor por el deterioro de la calidad
nutritiva e higiénica de la leche, que es hoy en
día uno de los factores más importantes para poder
competir en los mercados abiertos por el TLC.

III.
OBJETIVOS

3.1. OBJETIVO GENERAL

Conocer la prevalencia de las principales bacterias
causantes de la mastitis en el Centro del Valle del Cauca en los
últimos cuatro años.

3.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS

Tomar las muestras de leche en las fincas seleccionadas
para realizar los exámenes de laboratorio.

Recopilar la información de los resultados de
cultivos en leche en los años anteriores.

Establecer el comportamiento de las bacterias comparando
los 4 años de estudio y determinar cual es la bacteria que
más incide en nuestro medio.

Determinar la resistencia de los microorganismos a los
diferentes antibióticos.

IV. MARCO
REFERENCIAL

4.1 MARCO CONTEXTUAL

El estudio se efectuará en el departamento del
Valle del Cauca, específicamente en la ciudad de
Tulúa, en las instalaciones del Instituto Colombiano
Agropecuario (ICA), ubicado en la zona norte de la
ciudad.

En esta zona del país nos encontramos a una
altitud de 973 metros sobre el nivel del mar, la temperatura
promedio es de 28ºC, con una humedad relativa del 70%
aproximadamente; la precipitación media anual es de 960mm
a 1000mm en un régimen bimodal con dos períodos
secos (Enero-Marzo y Julio-Septiembre) y dos períodos
húmedos (Abril-Junio y Octubre-Diciembre) no muy marcados.
CORPOICA, 1994.

4.2 MARCO CONCEPTUAL

4.2.1 Mastitis: El término mastitis se refiere a
la inflamación de la glándula mamaria sea cual sea
su causa. Se caracteriza por las alteraciones físicas,
químicas y casi siempre bacteriológicas de la
leche, también por modificaciones patológicas del
tejido glandular (Blood et al, 1986).

El término mastitis se deriva de las palabras
griegas "mastos", que significa "pechos" e "itis" que quiere
decir "inflamación de". La inflamación es la
respuesta de los tejidos productores de leche en la ubre a una
lesión traumática o la presencia de microorganismos
infecciosos que han ingresado a la ubre. El propósito de
la respuesta inflamatoria es destruir o neutralizar el agente
ofensivo, reparar los tejidos dañados y retornar la
glándula a su función normal (National Mastitis
Council, 1987 y Philpot & Nickerson, 1992).

4.2.2 Clasificación: Lerche, (1979) y
Hoard’s Dairyman (1997) afirman que las mastitis pueden
presentarse de dos formas como procesos no infecciosos las cuales
pueden sustituir hasta en un tercio las infecciosas y estas
últimas pueden ser contagiosas o ambientales y de acuerdo
a su sintomatología se manifiestan en mastitis
clínica y subclínica.

4.2.2.1 Mastitis Contagiosas: Son aquellas infecciones
intramamarias, trasmisibles vaca a vaca que se producen durante
el ordeño. Los microorganismos más importantes que
las definen, son Staphylococcus Aureus, Streptococcus
Agalactiae, Micoplasma y Actinomices (Hoard’s Dairyman
1997)

4.2.2.2 Mastitis ambientales: Son aquellas mastitis en
las que el patógeno proviene del ambiente donde se
desarrolla la actividad de la vaca de leche. Representa la
contaminación de la ubre en toda la vida del animal y son
la causa primera de las mastitis con manifestación
clínica en granjas de bajo recuento de células
somáticas. Por orden de prevalencia destacamos:

Gram negativas como Eschericha Coli,
Enterobacter; Klesbsiella, Pseudomonas y como Gram
positivas Streptococcus Dysgalactiae y Streptococcus
Uberis. La infección esta influenciada sobre todo por
temperatura, humedad, época de lactación estado de
lactación, parto y manejo. (Hoard’s Dairyman
1997).

4.2.2.3 Mastitis clínica: Para Kleinschroth
(1991) La mastitis clínica se reconoce por la existencia
de signos visibles como inflamación, endurecimiento, dolor
en la ubre, falta de interés por la comida y permanencia
inmóvil del animal; así como alto contenido
celular. La mastitis clínica puede variar notablemente en
su severidad dependiendo en parte al tipo de microorganismos que
la cause. (Philpot y Nickerson, 1992).

4.2.2.4 Mastitis subclínica: Según Philpot
y Nickerson (1992) es un tipo de mastitis en la que no hay cambio
fácilmente detectable en la ubre y no se observa
anormalidad en la leche. Sin embargo, la presencia de
microorganismos en la leche usualmente pueden ser demostrados por
un cultivo microbiológico, igualmente el aumento de
contenido celular y cambios en la leche, estos pueden ser
detectados a través de pruebas especiales. De acuerdo a
Kleinschroth, (1991) este tipo de mastitis tiene una frecuencia
de 20 a 50 veces superior a la mastitis
clínica.

4.2.3 Etiología: Más de 140 microorganismo
diferentes pueden causar mastitis y todos proliferan en la vaca o
en su entorno. Por eso se dice que la mastitis en el resultado de
la interacción entre la vaca, el ambiente y los
microorganismos. Este último se refiere a formas
microscópicas de vida, y en este caso, se trata de
bacterias, micoplasmas, levaduras, algas, hongos y rara vez
virus. De todo ellos, las bacterias son, por lo lejos, la mayor
causa de infección intramamaria en las vacas
lecheras.

Los patógenos más frecuentes causantes de
mastitis se agrupan en cuatro categorías:

1. Contagiosos
2. Ambientales
3. Oportunistas
4. Y otros.

Un patógeno es un microorganismo que causa una
reacción adversa en el animal que esta infectado, algunos
de ellos despiertan una reacción inflamatoria muy fuerte
en la ubre, originando un Recuento de Células
Somáticas (RCS) muy alto. Otros microorganismos son
denominados patógenos menores ya que solo causan un leve
ascenso en el RCS.

La mayoría de las infecciones de la
glándula mamaria es causada por algunos pocos tipos de
bacterias: Estreptococos, estafilococos y coliformes. La mayor
fuente de microorganismos contagiosos es la leche de cuartos
infectados. Se transmiten de una vaca a otra durante el
ordeño mediante la maquina de ordeño, las manos del
ordeñador y los paños para limpiar la
ubre.

Los patógenos ambientales provienen del medio
donde vive la vaca, ingresan a la ubre entre los ordeños
cuando los pezones están expuestos al estiércol y a
camas sucias. La mayoría de los patógenos
contagiosos generan un RCS alto. De los microorganismos aislados
de cuartos infectados, los oportunistas son los más
prevalentes, si bien solo causan una leve inflamación en
los tejidos; estos prosperan en la superficie de la ubre y de los
pezones en gran cantidad, por lo que son una fuente constante de
infección intramamaria.

Los microorganismos contagiosos más importantes
causantes de mastitis son: streptococcus agalactiae,
staphylococcus aureus, y corynebacterium bovis, esta
ultima es menos patogénica. Y por ultimo esta la
Micoplasma bovis de tamaño intermedio. Estas
bacterias originan infecciones subclínicas de larga
duración muchas veces llamadas infecciones
crónicas, con presencia abundante de microorganismos en la
leche.

Estos patógenos producen una serie de metabolitos
que posiblemente son los que intervienen en las enfermedades y en
el caso de la mastitis se señalan:

Leucocidina: Mata los leucocitos es antigénica no
es hemolítica; se encuentra acompañada de toxinas
alfa y delta y rompen pared celular.

Lipasas: Las cepas positivas a esta enzima tienden a
producir abscesos cutáneos y subcutáneos y
destruyen los ácidos grasos protectores de la piel
produciendo infecciones generalizadas cuando son
positivas.

Hialuronidasa: Es un factor de diseminación que
puede intervenir en la virulencia.

Enterotoxinas: Casi un tercio de Staphylococcus
coagulasa positiva la produce y es la responsable de nauseas
diarreas y contracciones abdominales; estos signos se presentan
cuatro horas después de haber ingeridos alimentos
contaminados, por tal razón la leche que contenga
Staphylococcus aureus debe ser considerada como un riesgo
para el consumo humano.

Los primeros reportes sobre la etiología de la
enfermedad fueron realizados por Nocard y Mollereau. En 1840
Guilleveau dio el nombre de Streptococcus sporadicae a los
organismos aislados en los casos esporádicos de mastitis y
Streptococcus contagiasae a los encontrados en los casos
de mastitis enzoóticas.

En 1884, Roseambach aisló y clasificó
sistemáticamente otros gérmenes presentes en las
infecciones de la ubre que llamó Micrococcus,
posteriormente clasificados como Staphylococcus
basándose para ello en la capacidad de producir pigmentos.
En los años comprendidos entre 1890 a 1945 la
bacteriología de las mastitis estuvo encaminada a
descubrir métodos de laboratorio específicos para
clasificar los Streptococcus y los
Staphylococcus.

El descubrimiento de los antibióticos bajó
las pérdidas causadas por mastitis, reduciendo la
incidencia de cuartos ciegos; no obstante, el uso inadecuado de
ellos ha contribuido a ocultar temporalmente los síntomas
clínicos de la enfermedad, favoreciendo así el
incremento de resistencia de los gérmenes.

Murphy en 1958, realizó estudios sobre la
frecuencia de gérmenes que inciden en la mastitis,
llegando a las conclusiones siguientes:

a) Aproximadamente el 50% de las vacas de ordeño
tienen uno o más cuartos infectados.

b) El Streptococcus agalactiae se encuentra
presente en la mitad de estas infecciones seguido por
Streptococcus y Staphylococcus aureus.

c) Solamente el 1% de los animales infectados
presentó síntomas clínicos severos causados
por Corynebacterium pyogenes, Escherichia coli, Staphyloccocus
aureus y Streptoccocus sp. (Figueroa,
1984).

En 1970 Dodd y Neave realizaron, en el Reino Unido,
estudios similares a los de Murphy llegando a las siguientes
conclusiones:

a) El 50% de vacas lecheras tienen uno o más
cuartos sub-clínicamente enfermos.

b) El 2% de los animales enfermos mostraron
síntomas clínicos severos de la
enfermedad.

c) El 90% de las infecciones fueron causadas por
Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus
Dysgalactiae y Streptococcus uberis.

d) Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y
Corynebacterium pyogenes causaron menos del 10% de estas
infecciones.

Schmidt en 1974 afirmo que alrededor del 50% de las
vacas presentan un promedio de dos cuartos infectados por animal
y que más del 90% de estas infecciones mamarias son
producidas por Streptococcus sp. y Staphylococcus
sp. También concluyó que solo del 2.0 al 16% de
estas vacas con cuartos infectados muestran signos
clínicos de mastitis. Pero para Kleinschroth el tipo de
mastitis representa únicamente la punta del iceberg ya que
sólo el 2 al 3% de las infecciones logran expresarse de
esta forma y el 97 a 98% restante permanece como mastitis
subclínica.

La Nacional Mastitis Council (1987) y Philpot &
Nickerson (1992) clasificaron los microorganismos causantes de
mastitis de la siguiente manera: Staphylococcus aureus,
Streptococcus agalactiae, Mycoplasma bovis, Corynebacterium
bovis, como agentes contagiosos. Streptoccocus ambiental y
coliformes como microorganismos del medio ambiente.
También consideraron Pseudomonas aeruginosas y
Actynomyces pyogenes como otros microorganismos
infecciosos.

4.2.3.1 Streptococcus agalactiae: El
término streptococcus agalactiae deriva del latín y
su significado puede traducirse literalmente como: strepto =
cadenas, coccus = esferas y agalactiae = sin leche. O sea una
cadena de esferas que reduce la producción de leche. El
único reservorio de streptococcus agalactiae es la leche
de un cuarto mamario infectado. Pueden encontrarse en las
superficies que tuvieron contacto reciente con la leche
contaminada como, por ejemplo.: la maquina de ordeño, las
manos del ordeñador y la cama. Terneras amantadas en
corrales grupales, se infectaron de una a otra por medio del
calostro o la leche. Estas bacterias son vertidas del cuarto
infectado a la leche en gran cantidad. Se ha documentado que un
solo cuarto infectado de una vaca en un hato de 100 animales
puede elevar el recuento bacteriano del tanque frío a
más de 100.000/ml. La transmisión a cuartos sanos
sucede principalmente durante el ordeño. Si la higiene de
la ubre es insuficiente y las medidas de control inefectivas,
puede dispersarse por todo el hato. El ordeño incompleto
de cuartos infectados aumenta la severidad de esta mastitis,
porque queda una gran cantidad de bacterias en el cuarto
infectado, que luego contagiaran a otras vacas. Como signo
clínico se observa el cambio en el color de la leche. Este
microorganismo es sensible a la penicilina y puede ser erradico
de algunos hatos lecheros. La infecciones subclínicas
pueden volverse crónicas si el tratamiento con
antibióticos falla, quedando los cuartos no funcionales o
ciego.

4.2.3.2. Staphylococcus aureus: este termino se
traduce como: staphylo = racimo, coccus = esferas y
aureus = doradas. O sea un racimo dorado de esferas. Estas
bacterias no suelen encontrarse sobre la piel sana del
pezón, pero sí colonizan y crecen muy bien en la
queratina del canal del pezón. Los pezones cuarteados que
terminan lesionándose favorecen la colonización.
Esta es una ubicación ideal para infectar la ubre y es
transmitida a cuartos sanos por medio de las pezoneras, los
paños para limpiar la ubre y las manos del
ordeñador. Las bacterias de los cuarto infectados
también pueden ingresar a los cuartos sanos por medio del
impacto de microgotas originado en las pezoneras u otras
caídas de vacío. Una vez que esta bacteria infecta,
se genera una inflamación crónica con un elevado
RCS. Se detectan áreas firmes fibróticas del tejido
cicatrizal al palpar el cuarto. La mayoría de las veces la
infecciones causadas por staphylococcus aureus son de
naturaleza subclínica con interrupciones periódicas
de síntomas clínicos en las que se observan la
hinchazón moderada, y grumos en el despunte. Las
infecciones crónicas son extremadamente difíciles
de erradicar con antibióticos por el tejido cicatrizal que
se desarrolla en muchos lugares impidiendo la distribución
del mismo en el cuarto infectado. En consecuencia, los
antibióticos no entran en contacto con las bacterias, la
infección permanece y la vaca debe ser eliminada para
evitar el contagio con otros animales. En los casos
clínicos agudos, los cuartos generalmente están
calientes e hinchados, y la temperatura asciende a 103 o 106
ºF (39,4 o 41,1ºC). Algunas infecciones se vuelven
gangrenosas. Los cuartos afectados están fríos al
tacto por la falta de irrigación de sangre. En algunos
hatos staphylococcus aureus causa infecciones
intramamarias en terneras, que se vuelven crónicas y
persisten en la parición. Por eso las vaquillas pueden ser
una fuente de contagio de esta mastitis, cuando pasan a formar
parte del hato lechero. La implementación de excelentes
programas de control de mastitis puede reducir a muy bajos
niveles e incluso erradicarla de algunos hatos lecheros.
Lamentablemente Staphylococcus aureus como
streptococcus agalactiae están muy propagados en
algunos hatos lecheros en todo el mundo y continúan
causando perdidas económicas serias.

4.2.3.3. Mycoplasma bovis: Los micoplasmas tienen
un tamaño intermedio entre las bacterias y los virus, y no
poseen pared celular. Debe sospecharse de mastitis causada por
micoplasma cuando repetidas veces los cultivos de muestras de
leche de vacas con síntomas clínicos, a menudo
muchos cuartos, den resultado negativo con los métodos
microbiológicos estándar. Además este tipo
de mastitis se caracteriza por la aparición repentina, la
formación de una secreción purulenta en los cuartos
infectados, la transmisión rápida a todo el hato,
la marcada reducción de la producción y la
resistencia a los antibióticos. A pesar de la severa
reacción local en la ubre, las vacas afectadas no suelen
desarrollar síntomas sistémicos. El tratamiento es
inefectivo, y surgen problemas serios en el hato sino se controla
el nivel de la infección, teniendo que eliminar los
animales afectados. El uso múltiple de pomos o la
desinfección incorrecta de la punta del pezón puede
ser la causa de nuevas infecciones. Esta enfermedad puede ser
introducida en el hato por los animales de reposición que
se adquieren fuera de la finca. Si bien existen numerosas
especies de Mycoplasma, la más común es
mycoplasma bovis seguida por mycoplasma
californicum. Los métodos de cultivo requieren medio y
tiempo de incubación especiales para identificar cualquier
especie de mycoplasma.

4.2.3.4.
Corynebacterium bovis: las infecciones de la
glándula mamaria con estas bacterias generalmente son
leves con un ligero ascenso en el RCS, variando de 200.000 a
400.000/ml. Los brotes de mastitis causados por
corynebacterium bovis se han observado principalmente en
hatos en los que no se realiza sellado posterior al ordeño
ni la terapia de vacas secas. Los cuartos infectados con
corynebacterium bovis son menos susceptibles a infecciones
con Staphylococcus aureus pero son mas susceptibles a
streptococcus agalactiae y streptococcus
ambientales.

4.2.3.5 Streptococcus ambientales: estos
proliferan en el entorno de la vaca. Las infecciones son muy
comunes durante el periodo seco, y la tasa de neoinfección
es mucho más alta en dicho periodo. Sin la terapia de vaca
seca, la tasa de infección aumenta dramáticamente
poco después del secado. La tasa de infecciones nuevas es
también alta poco antes del parto y al principio de la
lactancia, pero disminuye a medida que la lactancia avanza. La
prevalencia de la infección aumenta con el ordeño
húmedo, el uso de esponjas sucias y la estabulación
inadecuada. El calor y la humedad también aumentan la
prevalencia por la exposición a la mayor cantidad de
bacterias que proliferan en la cama. En las vacas viejas la tasa
de infecciones nuevas aumenta progresivamente. En un hato, el
porcentaje de cuartos infectados con streptococcus ambientales es
bastante bajo y la mayoría de las infecciones dura menos
de 30 días. Aproximadamente el 18% de estas infecciones se
vuelven crónicas y persisten mas de 100 días, y 60
a 70% de las infecciones presentes durante la lactancia resultan
en mastitis clínica. Alrededor del 40% de las infecciones
causadas por streptococcus ambientales durante la lactancia se
curan espontáneamente. Los casos clínicos
generalmente son leves con algunos grumos o flóculos. La
leche se ve descolorida y el cuarto infectado muestra
hinchazón moderada. El RCS en cuartos con infección
subclínica varía entre 300.000 y 2.000.000/ml. El
mejor método para evaluar mastitis por streptococcus
ambientales es hacer cultivos de todas las vacas que exhiben
síntomas clínicos, se están secando o
paren.

4.2.3.6 Streptococcus Dysgalactiae se clasifica
generalmente como un streptococcus ambiental, sin embargo,
también se comporta como un patógeno contagioso.
Por ejemplo, es fácil de controlar con el sellado y la
terapia de vaca seca, lo que sugiere que la transmisión a
veces sea de vaca a vaca.

4.2.3.7. Coliformes: Entre las bacterias
coliformes se incluyen los géneros escherichia,
Klebsiella y Enterobacter. Estos microorganismos viven
en el estiércol, la cama, el suelo y el agua contaminada.
El agente común de mastitis coliforme es Escherichia
coli, que es de origen animal y klebsiella pneumoniae,
que se encuentran naturalmente en el suelo y en el material que
compone la cama, por ejemplo, aserrín, viruta de madera o
paja. La cantidad de coliformes en la cama por lo general es baja
en los mese fríos de invierno y alta en el verano. Al
igual que con los streptococcus ambientales las nuevas
infecciones con coliformes son muy comunes al comienzo y al final
del periodo seco y al parir. La tasa de nuevas infecciones con
coliformes durante el periodo seco es cuatro veces mas alto que
durante la lactancia y parece aumentar con los sucesivos periodos
de seca. La tasa de nuevas infecciones con esta bacteria es
máxima durante el comienzo de la lactancia y disminuye con
el avance de la misma. Algunas infecciones con coliformes son
consecuencia de negligencia en el tratamiento al secado,
mantenimiento de vacas secas en un ambiente húmedo y
sucio, la parición en un entorno contaminado y demasiado
tiempo transcurrido entre el parto y el primer ordeño.
Algunos estudios han demostrado alrededor del 50% de las
infecciones persisten menos de 10 días y parecen curarse
espontáneamente. Otros estudios indican que si bien
alrededor del 70% de las infecciones persisten menos de 30
días, otras pueden persistir más de 100 días
y causar brotes de mastitis clínica aguda. La prevalencia
de la mastitis causada por coliformes rara vez excede el 1%, pero
alrededor del 80% de todas las infecciones con coliformes
presentes durante toda la lactancia producen mastitis
clínica. Aproximadamente 30 a 40% de los casos de mastitis
clínica en un hato pueden ser causados por bacterias
coliformes. Alrededor del 10% de los casos clínicos
progresan a forma hiperaguda con afecciones sistémicas que
requieren de terapias intensivas y asistencia veterinaria. Muchos
casos conducen a una lactancia muy débil o a la muerte. En
los casos hiperagudos, típicamente, la irrupción es
repentina y el cuarto infectado presenta hinchazón, calor
y dolor al tacto. Además la leche es de color paja y
aguachenta, y contiene grumos y flóculos. Estas reacciones
locales pueden estar acompañadas por signos
sistémicos como fiebre, temblores, falta de apetito y
parálisis. Algunas vacas presentan temperatura corporal
baja. Estos síntomas se deben a la liberación de
una endotoxina bacteriana que provoca toxemia. La mayoría
de los casos hiperagudos suceden durante o cerca del parto, o
bien en las primeras 6 a 8 semanas de lactancia. La mastitis
coliforme aguda es mas frecuente en el verano, cuando las vacas
sufren por las altas temperaturas y se ven obligadas a buscar
sobra en lugares húmedos y sucios. Estos casos son
fatales, si el tratamiento no es adecuado e inmediato. Las vacas
de alta producción son más susceptibles a
infectarse.

4.2.3.8. Microorganismos oportunistas: este grupo de
bacterias incluye más de 20 especies de estafilococos
fuera de staphylococcus aureus. Comúnmente se los
denomina staphylococcus sp. O estafilococos coagulasa
negativa (ECN). Estas bacterias son de especial interés,
porque son los microorganismos mas frecuentemente aislados en
todo el hato. Sin embrago las infecciones suelen ser leves. Son
raros los síntomas clínicos y, de aparecer, son
leves y se limitan a grumos y flóculos en la leche debidos
a cambio locales en la ubre.

4.2.3.9. Staphylococcus sp.: normalmente se
encuentra en la piel sana del pezón y en las manos del
ordeñador, de manera que ocupan una posición
oportuna para colonizar el canal del pezón y penetrar
hasta los tejidos secretores. La incidencia de nuevas infecciones
con ECN es máxima durante el periodo seco, por lo tanto el
porcentaje de cuartos infectados es alto en el momento del parto.
La prevalencia también es alta en vacas de primera
lactancia. Muchas de estas infecciones se curan
espontáneamente y la prevalencia decrece a medida que la
lactancia avanza. La tasa de curación espontánea al
secado, sin terapia, es de alrededor del 90%. Las especies mas
comunes de ECN son: staphylococcus chromogenes y
staphylococcus epidermis, staphylococcus simulans,
staphylococcus warneri pertenecen a la flora bacteriana
normal de la piel del pezón, mientras staphylococcus
xylosus y staphylococcus sciuri parecen provenir del
ambiente.

4.2.3.10. Otros microorganismos: También causa
mastitis una gran variedad de microorganismos como pueden ser:
Pseudomonas sp, Arcanobacterium pyogenes, Nocardia sp.
Mycobacterium sp. y varios bacilos, levaduras, mohos y algas.
Las infecciones con algunos de ellos a menudo se deben a
procedimientos deficientes de la aplicación de
antibióticos. Por lo general la ocurrencia de la
infección es baja, y sucede cuando aumenta la
exposición a estos microorganismos. (Philpot y Nickerson
2000)

4.2.4 Patogénesis: En la mayor parte de los
países, los estudios de la frecuencia de mastitis
independientemente de la causa muestran cifras comparables de una
morbilidad de cerca de 40% en vacas lecheras y una tasa de
infección del 25%, un estudio en Inglaterra mostró
27% de positividad en términos de recuentos celulares,
pero la tasa efectiva de infección de los cuartos por un
patógeno significativo fue sólo de un 9.6% (Blood,
et al 1986).

Pero para Lorbacher, (1982) según observaciones
hechas en países de gran producción lechera y en
Colombia reportan que en un momento dado, más del 50% de
las vacas en producción de un hato sufre de mastitis bien
sea en forma clínica o subclínica.

De similar manera asevera Kleinschroth (et al 1991) con
la excepción de que este autor atribuye principalmente
infecciones de tipo sub clínico.

Según Schmidt, (1974) una investigación
llevada acabo en Gran Bretaña en 950 vaquillas estudiadas
pertenecientes a 16 rebaños, el 11.8% de las novillas y el
4.1% de sus cuartos estaban infectadas al llegar al parto. Los
microorganismos más frecuentemente encontrados en ellas
fueron Streptococcus uberis, Streptococcus Dysgalactiae
y Staphylococcus aureus. Sólo en dos de los 16
rebaños implicados en este estudio estaban todas las
novillas libres de infección al momento del
parto.

La habilidad de los microorganismos para adherirse a los
tejidos en el interior de la ubre puede afectar su capacidad de
permanecer dentro de la glándula, especialmente durante la
lactancia cuando los pezones experimentan flujos
periódicos durante cada ordeño (Philpot y
Nickerson, 1992).

La mayoría de las mastitis resultan
después que las bacterias pasan a través del
conducto del pezón y entran al área cisternal. Las
bacterias eventualmente entran a los tejidos glandulares donde
afectan a las células alveolares. Streptpcoccus
agalactiae y S. aureus se adhieren bien al tejido que cubre
los espacios de recolección. Escherichia coli no se
adhiere pero se multiplica rápidamente en los cuartos con
recuentos bajos de células somáticas (Nacional
Mastitis Council, 1987).

Las toxinas producidas por las bacterias causan la
muerte de las células epiteliales productoras de leche y
esas células secretan sustancias a la sangre que aumentan
la permeabilidad de los vasos sanguíneos. Esto permite que
los leucocitos se muevan desde la sangre adentro de los
alvéolos donde ellos funcionan rodeando las bacterias y
destruyéndolas. Factores como líquidos y
coagulantes de sangre también afectan los tejidos para la
producción de leche (Nacional Mastitis Council, 1987 y
Philpot & Nickerson, 1992).

La respuesta inflamatoria la constituyen la
formación de líquidos y glóbulos blancos en
el interior del tejido de la ubre. La inflamación puede
ser leve y pasar por desapercibida como la mastitis
subclínica, o presentar señales clínicas
obvias, como decoloración y grumos o escamas en la leche,
dependiendo de la severidad de la infección, estos cambios
se acompañan de edema, enrojecimiento, tumefacción,
calor y dolor de la ubre, así como también sangre
en las secreciones (Blood et al, 1986; Philpot y Nickerson,
1992).

Después que las células somáticas
cruzan los vasos sanguíneos y circulan por los tejidos de
la ubre hacia el sitio del tejido enfermo, se acumulan alrededor
de los alvéolos, los ductos y cisternas antes de entrar en
la leche. La presencia de microorganismos, sus toxinas,
células somáticas y líquidos en el
área afectada pueden hacer que el resto de las
células productoras de la leche, queden en un estado de
quietud llamado involución.

Como un cuarto enfermo desarrolla nuevamente la
habilidad de segregar es realmente incierto, pero las
células productoras de leche pueden repararse así
mismas, las células en reposo vuelven activarse y el
tejido aumenta su actividad, dando como resultado el retorno a la
producción de leche (Philpot y Nickerson,
1992).

4.2.5 Impacto en la calidad de la leche: La mastitis
afecta la calidad de la leche y productos que de ella se
elaboran. Los consumidores de hoy cuidan mucho la salud y esperan
obtener un producto de alta calidad tanto por su sabor como por
su durabilidad.

Investigaciones realizadas han descubierto que de la
leche en crudo que tiene un alto porcentaje de células
somáticas, se hace un queso que en textura y sabor es de
inferior calidad. Niveles altos de ácidos grasos libres
encontrados en leches con recuentos celulares tan bajos como
400,000 células / ml dan a la leche un sabor rancio (The
New Zealand Farmer, 1978 y Nacional Mastitis Council,
1987).

La leche pasteurizada que es procesada de leche cruda
con un conteo de células somáticas más bajo
que 250,000, tiene un promedio de vida de almacenamiento
más largo que la que es procesada teniendo un conteo
superior a 500,000.

Algunos de los parámetros de calidad se describen
a continuación:

Recuento Bacteriano: Un aumento en el recuento total de
las bacterias de la leche va acompañado, casi siempre, por
un aumento en la cantidad de microorganismos no eliminados por la
pasteurización. Las fuentes más comunes de estos
microorganismos son: maquinas de ordeño insuficientemente
sanitizadas o ubres mal limpiadas y mal secadas antes del
ordeño. Existe una relación estrecha entre (1) la
tasa de nuevas infecciones de la ubre y (2) el grado de
contaminación del pezón con los microorganismos
causantes de mastitis. La eliminación de las fuentes
reduce la incidencia de la mastitis y mejora la durabilidad de
los productos lácteos. (Philpot y Nickerson,
2000)

Composición de la leche: la presencia de mastitis
aumenta las cualidades indeseables de la leche como lo son las
enzimas proteolíticas, sales y rancidez y disminuye las
cualidades deseadas como proteínas grasas y lactosa. Se
reduce también la aptitud quesera y la estabilidad
térmica.

4.2.6 Impacto económico: Según Philpot y
Nickerson, (1992) la mastitis representa el 26% del costo total
de las enfermedades en el ganado lechero. Las pérdidas por
mastitis son el doble de altas que las pérdidas por
infertilidad y problemas de reproducción, un cuarto
glandular afectado experimenta un 30% de baja en su productividad
y una vaca afectada pierde un 15% de su productividad (Blood, et
al 1986).

El Concilio Nacional de Mastitis de EE.UU. (1987)
estimó que las pérdidas anuales estimadas causadas
por mastitis por vaca es de $181.02. Siendo que las
pérdidas de producción en vacas viejas son
aproximadamente el doble que las vacas de primera
lactancia.

Phillpot y Nickerson, (1992) confirman que el 70 – 80%
de todas las pérdidas son asociadas con la mastitis
subclínica, mientras que solo el 20 – 30% se deben a la
mastitis clínica. Se estima que un cuarto infectado
produce aproximadamente 780 litros menos de leche por lactancia
que un cuarto sin infección. Conteo de células
somáticas abajo de 250,000 leucocitos / ml son indicadores
de ausencia de inflamación a pesar de que la mayor parte
de los cuartos normales presentan conteos inferiores a 100,000
leucocitos / ml de leche.

La mayoría de los hatos estudiados en Estados
Unidos tienen un nivel de células somáticas entre
200,000 y 500,000 células por mililitro. Estos hatos
están perdiendo por lo menos 8% en producción
potencial de leche. Las pérdidas con conteo de
células de 400,000 están perdiendo 586 litros de
leche por vaca adulta por año. Las pérdidas son
aún mayores cuando conteos son más altos (Blood et
al, 1986 y Phillipot & Nickerson, 1992).

Una prueba de campo práctica y segura para
determinar mastitis es California Mastitis Test, la cual ayuda a
los productores que no disponen de un laboratorio para determinar
la presencia de esta enfermedad en sus hatos.

4.2.7 Prueba California Mastitis Test: La Prueba
California Mastitis Test (CMT) estima el contenido de
células somáticas en la leche y pérdidas
aproximadas en la productividad. Esta prueba es una de las
más rápidas y seguras para determinar una mastitis,
usa como reactivo el Alfil Aril Sulfonato el cual reacciona con
los leucocitos contenidos en la leche produciendo un gel,
además contiene el indicador púrpura de bromocresol
como indicador de la reacción.

Para resultados confiables, la prueba debe realizarse
justo antes del ordeño después de estimular la vaca
en la descarga de los primeros chorros de leche. Cuando esto se
hace, es válido para detectar infecciones
subclínicas que de otra forma pasarían por
desapercibidas hasta que la infección llegara a un estado
más avanzado.

El contenido celular de la leche se compone
principalmente de células blancas que entran a la ubre en
la sangre. Los glóbulos blancos se hacen presentes en
números abundantes respondiendo a la infección por
los microorganismos de la mastitis o por una herida
mecánica. Durante el verano el contenido de células
somáticas en la leche se incrementa de igual manera en la
primera semana después del parto y en las últimas
de lactancia, por lo que hay que tener mucho cuidado al practicar
el CMT.

Una alta concentración de células
somáticas en la leche (más de 200,000 por
milímetro) indica una condición anormal en la ubre.
La prueba CMT no señala las vacas a tratarse, porque
solamente un 60% de vacas con un conteo somático de
más de 500,000 por milímetro, son las que realmente
están infectadas por los microorganismos causados por la
mastitis (Phillpot & Nickerson, 1992. y Hoard’s
Dairyman 1997)

4.2.8 Análisis bacteriológico: Cabe
mencionar que hay una serie de pruebas utilizadas para la
identificación de agentes patógenos causantes de
mastitis pero en esta ocasión sólo se hará
referencia a los de mayor importancia.

a. Aislamiento de aerobios. Es un método
utilizado para la identificación de bacterias
grampositivas y gramnegativas a través de pruebas
especificas como son prueba de catalasa y prueba de
coagulasa.

b. Coloración de gram. Esta es una técnica
utilizada para la identificación de bacterias
grampositivas y gramnegativas y seleccionar los medios de cultivo
(Bier 1987 y Poujol 1995).

c. La prueba de la catalasa usa como reactivo el
peroxido de hidrógeno (agua oxigenada) para identificar
los géneros presentes en el cultivo y se determina a
través de su reacción. Staphylococcus sp. y
Micrococcus sp. presentan reacción positiva en
cambio Streptococcus sp. da una repuesta negativa a la
prueba. Si la reacción anterior es positiva se procede con
la prueba de coagulasa la cual usa como reactivo plasma
sanguíneo y sirve para identificar el Staphylococcus
aureus el cual presenta una reacción
positiva.

Para la identificación de enterobacterias se
aplica una serie en batería de medios de cultivo sin
importar su orden y son: Kliger iron agar, lisina iron agar,
citrato de Simons agar, fenilalanina, mio agar y urea agar
(Poujol 1995).

4.2.9 Antibiograma: El antibiograma es esencialmente una
prueba cualitativa, y por lo tanto debe tenerse especial cuidado
en la interpretación e informe de los resultados. Esta
prueba es usada para identificar la sensibilidad de las bacterias
a los antibióticos. Hay que tener en cuenta que la
respuesta real al tratamiento, dependerá no solo de la
sensibilidad del agente a la droga seleccionada sino
también del estado fisiológico del paciente, de la
propia enfermedad, la localización de la infección
y por tanto del contacto entre la droga y los microorganismos
(Ruiz, 1980).

Antes de inocular debe hacerse una tinción de
Gram, para seleccionar los antibióticos que se
usarán en la prueba. La transferencia del inóculo
siempre se hace por medio de una pipeta Pasteur o con una torunda
de algodón estéril de la cual se exprime el exceso
de líquido. Deberá incluirse un disco para todo
agente terapéutico o droga que se está utilizando
en un tratamiento, Y se colocan sobre el agar, equidistantes
entre sí, empleando no más de ocho discos por
placa. Si se tienen discos que contienen la misma droga, pero de
diferente casa comercial, se recomienda utilizarlos juntos (Ruiz,
1980).

En el caso de colonias aisladas de placas de agar, se
prefiere colocar varias de ellas (5-6) en medio líquido
para vehiculizarlas (caldo soya-tripticasa, caldo suero o caldo
nutritivo), el cual se incuba a 37°C por 2 a 4 horas. La
concentración de ésta dilución es
correlativa con el nefelómetro de Mcfarlad. Al cabo de ese
tiempo, se inocula el agar en la forma descrita y se distribuye
el material por toda la caja con un asa de 4 mm o una pipeta
Pasteur doblada en la punta. Las placas se incuban a una
temperatura de 37°C hasta que se haya obtenido un crecimiento
satisfactorio. La mayoría de las bacterias producen un
crecimiento visible a las 12 horas pero el tiempo promedio para
interpretación debe ser a las 18 horas, y no más
tarde, ya que las lecturas tardías pueden dar resultados
errados (Ruiz, 1980).

La presencia de una zona definida de inhibición
de crecimiento alrededor del disco se considera como de cierto
grado de sensibilidad y el microorganismo es registrado como
sensible. Cuando no se observa zona alguna, o solamente se ven
trazas de inhibición se informa que el microorganismo es
resistente o no sensible, en ocasiones puede haber algún
crecimiento dentro de la zona de inhibición lo que puede
deberse a las siguientes causas:

1. Lectura tardía de la prueba. Los
microorganismos inhibidos pero no muertos por la droga, aparecen
después de la difusión de ésta en el
medio.

Esta situación es frecuente cuando se usan drogas
bacteriostáticas (Sulfonamidas).

2. Presencia de microorganismos resistentes en una
población de bacterias sensibles. En este caso, se debe
interpretar la prueba como de resistencia.

3. En un cultivo primario, mixto, en el cual es posible
la presencia de un microorganismo diferente no susceptible a la
droga mezclada con microorganismos sensibles.

4. Discos viejos, caducos que han perdido
potencia.

4.2.10 Recomendaciones para la prevención de
mastitis: Se listan una serie de principios que según Kirk
1997 y Noguera s.f ayudaran al productor a reducir sus
índices de mastitis en sus hatos, si los aplican
correctamente.

1. Ordeñar las vacas con pezones limpios y
secos.

Los pezones y sus puntas deben ser lavados con agua
limpia, posteriormente desinfectados y secados completamente
antes de extraer la leche.

2. Prevenir la transferencia de patógenos durante
el ordeño.

La idea principal es no hacer nada que tome bacterias de
una vaca y lo lleve a otra para esto se deben usar toallas o
mantas individuales en la preparación de ubres y pezones,
el ordeñador siempre debe lavarse las manos antes de
continuar con un nuevo ordeño y asegurarse de un buen
sellado de pezones post-ordeño.

3. Prevenir lesiones en los pezones.

Cualquier lesión terminará eventualmente
en un nuevo caso de mastitis. Para ello hay que evitar el uso
técnicas de ordeño inadecuadas y darle un
mantenimiento continuo al equipo de ordeño mecánico
en caso de usarlo.

4. Proveer un ambiente que permita a las vacas
permanecer limpias. Para el cumplimiento de este principio es
necesario mantener la sala y corrales de ordeño libre de
contaminantes como pueden ser lodo, estiércol, exceso de
humedad y buena ventilación.

5. Detección temprana de nuevas infecciones
clínicas y subclínicas. Hay que realizar revisiones
periódicas de las ubres y pezones y practicar la prueba
California Mastitis Test en todas las vacas en ordeño cada
15 días

6. Uso apropiado de medicamento. Esto para asegurarse un
tratamiento exitoso, prevenir infecciones crónicas,
controlar el costo de medicamentos y prevenir el residuo de
antibióticos en la leche.

7. Control de la duración de las infecciones. La
duración de infecciones debe minimizarse cuando sea
posible, debido a que infecciones de larga duración
dañan severamente los tejidos secretores. El tratamiento
durante el secado de todos los cuartos de una vaca es un
método muy efectivo para controlar las
infecciones.

8. Supervisión del estado de mastitis. La
prevalencia de mastitis dentro del hato debe de conocerse y
supervisarse regularmente. Tal sistema de vigilancia
permitirá la identificación temprana de
áreas problemáticas antes de que afecten seriamente
la producción láctea.

9. Reemplazos libres de mastitis. Esto se consigue
evitando el mamado entre terneras, alimentando con leche libre de
mastitis todo esto nos asegurará la capacidad para
desechar mastitis en vacas viejas, disminuya la prevalencia de
infecciones en el hato y evite la necesidad de comprar reemplazos
con vacas adultas.

10. Asuma que todos los reemplazos comprados
están infectados. A todos los reemplazos se les deben
hacer cultivos bacteriológicos antes de entrar en
ordeño, esto evitará la diseminación de
nuevos microorganismos de nuevas vacas en el hato.

11. Provea una nutrición adecuada para evitar una
mayor susceptibilidad a la mastitis. La glándula mamaria
puede resistir la mayoría de las infecciones si se le
provee con nutrientes esenciales, esto es necesario para mantener
la resistencia a nuevas infecciones.

12. Controle las moscas. Estos insectos transportan
bacterias de un lugar a otro y los patógenos causantes de
mastitis no son la excepción debido a que los trasladan
hasta la punta del pezón.

13. Asignar responsabilidades para todas las
áreas de prevención de mastitis. Para cada
principio debe haber una asignación escrita para una
persona específica, al haber un brote de mastitis se debe
identificar el eslabón más débil y realizar
una acción correctiva.

V MATERIALES Y
MÉTODOLOGIA

5.1 DESCRIPCION DEL SITIO DE LA
PRÁCTICA

El presente trabajo se realizó en las
instalaciones del Instituto Colombiano Agropecuario ICA de la
ciudad de Tulúa. Esta es una zona que se encuentra a 973
m.s.n.m. y presenta un régimen bimodal no muy bien
marcadas el verano (Enero-Marzo y Julio-Septiembre). Y el
invierno o época de lluvias que comienza a partir del 15
de Abril aproximadamente, y en Octubre. La precipitación
promedio es de 960 a 1000 mm anuales. La humedad relativa es de
74% y la temperatura promedio anual es de 28°C.

5.2 RECURSOS

Para los propósitos del presente trabajo
participaron productores asociados a la Cooperativa de Ganaderos
del Centro y Norte del Valle del Cauca (COGANCEVALLE), y el
personal técnico del laboratorio del Instituto Colombiano
Agropecuario ICA de la ciudad de Tulúa.

1. Materiales y Equipo

-Tubos estériles de vidrio con tapa rosca de 15ml
de capacidad rotulados.

-Gradillas.

-Caja de icopor.

-Bolsas con gel refrigerante.

-Medios de cultivo.

–Libros con los resultados de años
anteriores

5.3 METODOLOGIA

5.3.1. ANÁLISIS DE LABORATORIO

Para el análisis bacteriológico se
colectaron 235 muestras provenientes de cuartos con mastitis
clínica o subclínica, en las cuales se usó
una serie de medidas higiénicas entre ellas el lavado de
pezones con agua limpia y abundante, desinfección de las
ubres, pezones y manos del colector con solución de yodo
al 2.5% y posteriormente se procedió con el secado de
pezones, de cada cuarto positivo se colectaron entre 5 a 10 ml de
leche en tubos de ensayo estériles, los que se cerraban de
inmediato evitando cualquier tipo de contaminante, luego se
identificaron y registraron en la hoja de control para el
envió de muestras al laboratorio los tubos muestras se
transportaron dentro de un termo con hielo.

Las muestras al ser recibidas en el laboratorio fueron
conservadas en refrigeración a temperatura de 4 a 5
ºc hasta el momento de su análisis el cual se lleva a
cabo durante 3 días conforme a los siguientes
pasos:

Primer día: Se incubaron las muestras en medios
selectivos. En agar sangre para identificar bacterias Gram
Positivas, sobre el agar Mac Conkey para identificar las
bacterias Gram Negativas y fermentaciones de lactosa, y en agar
EMB para E. coli. En ambas inoculaciones se utilizó el asa
bacteriológica sembraron en estrías sobre la
superficie de los medios de cultivo, los que se incubaron a
37ºc por 24 horas.

Segundo día: La microbióloga
realizó la lectura de crecimiento y selección de
colonias sospechosas. A las colonias sospechosas les
practicó la técnica de coloración de Gram
con el propósito de identificar los géneros
Staphylococcus sp., Streptococcus sp. o
Enterobacterias y seleccionar los medios de cultivo y
discos de sensibilidad para practicar el antibiograma a las
colonias así identificadas. Al género
Staphylococcus sp. se le practicó la prueba de
catalasa la cual consistió en agregarle unas cuantas gotas
de peroxido de hidrógeno a la suspensión del
cultivo bacteriano en caldo de soya tripticasa en un tubo de
ensayo observando su comportamiento la cual al presentar una
reacción positiva se caracterizó por la
formación de burbujas de oxigeno; cuando la
reacción fue positiva se procedió con la prueba de
coagulasa realizándola en tubos de ensayo a los cuales se
les agregaba 3 ml de agar nutritivo y luego se les sembraba el
Staphylococcus sp. incubando a 37ºc durante 24 horas.
Al día siguiente se le agregaron igual cantidad de plasma
sanguíneo humano el cual estaba diluido en una
solución salina en una porción de 1:4 y fue
mezclado manualmente mediante movimientos en remolino con el tubo
de ensayo.

Después de lo anterior incubaron los tubos a
37ºc hasta por 4 horas y luego realizaron la lectura. En
casos donde la reacción fue negativa se esperaba hasta el
día siguiente, la reacción la consideraban positiva
cuando había formación de coagulo en al
solución del tubo de ensayo. Para la identificación
de enterobacterias se utilizaron una serie de medios de cultivo
adecuados que permitieron la identificación del
género y especie sospechosos.

La identificación se inició con la
transferencia del inóculo al agar haciendo uso de un asa o
pipeta pasteur doblada en la punta distribuyéndolo por
toda la caja.

Seguidamente utilizaron una pinza para colocar los
discos sobre el agar de acuerdo a la observación de
coloración de Gram, teniendo el cuidado de no colocar
más de 8 por placa. Posteriormente incubaron las placas a
una temperatura de 37 grados centígrados hasta que hubo
crecimiento satisfactorio.

La interpretación de los resultados se
realizó entre las 18 y 24 horas después de haber
realizado la incubación. A las colonias de enterobacterias
les aplicaron una serie en batería de medios de cultivos
para su posterior identificación, la cual se
identificó de acuerdo a su crecimiento encubando los
medios seleccionados a 37ºC por 24 horas.

Tercer día: realizaron la lectura e
identificación del género y especie desarrollados
así como también la interpretación y lectura
del antibiograma.

5.3.2 Tabulación de datos: Al finalizar el
proceso de la recolección de datos se
determinó:

1. Prevalencia de los agentes causales (AC) de mastitis
en el Centro del Valle del Cauca para los últimos cuatro
años, expresado en porcentajes.

%AC = Total de aislamientos para un
determinado AC X100

Total de AC

2. Sensibilidad y resistencia de los agentes causales a
los antibióticos expresados en porcentaje.

SA = Sensibilidad a los antibióticos RA =
Resistencia al antibiótico

%SA = Total de aislamiento de un determinado AC
sensibles a un antib. Específ. X 100

Total de asilamientos para ese AC.

%RA = Total de aislamiento de un determinado AC
resistente a un antib. Específ. X 100

Total de asilamientos para ese AC.