Técnicas de estudio del cariotipo

1. Introducción
2. El Cariotipo Espectral en
   colores
3. Los Estudios
   Cromosómicos de Bandeo Extendido
4. La
   Hibridación Fluorescente In Situ (Su sigla en
   inglés es FISH)
6. Análisis de
   Microarreglo Cromosómico
7. Hibridación
   genómica comparada
8. Referencias
   Bibliográficas

INTRODUCCIÓN

El análisis cromosómico ha
proporcionado un conocimiento
básico de los cambios genéticos responsables de las
cromosomopatías y, en el caso del cáncer, de los
procesos que
suceden durante la transformación maligna de las células
tumorales. En las cromosomopatías estos estudios han sido
esenciales en su correcto diagnóstico, y su detección precoz
en el líquido amniótico forma parte de la
clínica habitual. Durante las últimas
décadas se han descrito un elevado número de
alteraciones cromosómicas recurrentes frecuentemente
asociadas con subtipos tumorales particulares. Además,
estas aberraciones citogenéticas han contribuido a
establecer en muchos casos el pronóstico de la enfermedad
y en algunos incluso indicar tratamientos específicos. Por
todo ello, muchas decisiones terapéuticas están
basadas en estos hallazgos genéticos.

A los estudios citogenéticos convencionales
desarrollados en la década de los sesenta se han
añadido en los últimos años otras
metodologías que han permitido mejorar la sensibilidad y
la especificidad de los hallazgos citogenéticos. Estas
técnicas son derivadas de la
hibridación in situ fluorescente (HISF). Las más
usadas han sido la hibridación genómica comparada
(HGC), la HISF multicolor o SKY y la HISF de bandeo multicolor
(Rx FISH), que, junto con la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR), han permitido profundizar en el
diagnóstico citogenético de las
cromosomopatías y de los tumores en general (tabla 1). En
este capítulo se analizarán las principales
características y las aplicaciones clínicas de las
técnicas de citogenética molecular, que han
revolucionado la Genética
moderna y, en consecuencia, la Medicina
actual.

SUMMARY

Among the techniques karyotype study we have:

karyotype Spectral Colors
The technique of spectral karyotype in colors (SKY) allows the
simultaneous detection and identification of all human
chromosomes through a combination of five fluorochromes. The
probe which is used for hybridization tumour cells in metaphase
is a mixture of probes painted chromosome 24 chromosomes, each
marked with a combination of different fluorochromes.

Studies chromosomes banding Extended
The chromosomes are arranged in a manner that is a little longer,
so you can see more bands. This allows smaller parties to observe
and identify the chromosome, thus smaller structural chromosomal
abnormalities that can not be seen in a routine analysis.

The Fluorescent In Situ Hybridization
The fluorescent in situ hybridization can be used to detect
structural chromosomal abnormalities (such as delección
submicroscópicas) that are beyond the resolution of the
studies chromosomal banding extended.

Comparative genomic hybridization
The HGC is the hybridization of DNA tumor and normal DNA compared
with normal chromosomes. This technique has the advantage of not
needing fresh material, because the DNA can be obtained from
tissue in paraffin.

El Cariotipo Espectral en
colores

La técnica de cariotipo espectral en colores (SKY)
permite la detección e identificación
simultánea de todos los cromosomas
humanos mediante la combinación de cinco fluorocromos. La
sonda que se utiliza para hibridar las células tumorales
en metafase es una mezcla de sondas de pintado cromosómico
de los 24 cromosomas, cada uno marcado con una combinación
de fluorocromos diferente. Se necesita un equipo y un software especial para
detectar y discriminar las diferentes sondas de ADN que se
hibridan simultáneamente. Por lo tanto, esta
técnica combina la sensibilidad del FISH con la gran
ventaja del análisis citogenético convencional:
obtener una visión global de las todas las alteraciones
cromosómicas en un único experimento.

Este método ha
permitido detectar translocaciones crípticas, en algunos
casos recurrentes y, sobre todo, analizar cariotipos complejos e
investigar los orígenes genéticos del material
implicado en cromosomas marcadores. Así, se ha podido
detectar el origen de las adiciones en el brazo largo del
cromosoma 14, tan frecuentes en neoplasias linfoides. El
principal inconveniente del SKY es que no permite detectar
inversiones ni
pequeñas delecciones.

Los resultados de esta técnica pueden abrir campos a
nuevas investigaciones,
pero además puede tener un significado pronóstico,
ayudando a identificar alteraciones genéticas recurrentes
que identifiquen subtipos específicos de una enfermedad.
En las leucemias agudas el SKY ha permitido la detección
de translocaciones crípticas en cromosomas que el
análisis mediante bandas G detectaba como de-leccionados,
proporcionando una herramienta para que en el futuro se puedan
definir mejor los grupos de mal
pronóstico.