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Conocimiento del material y equipo utilizado en microbiología (página 2)



Partes: 1, 2

No devolver sustancias a sus envases
originales.

Emplear la propipeta al medir líquidos
biopeligrosos.

Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el
profesor, no llevar a cabo experimentos no
autorizados.

Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor
(derrame de material contaminado, heridas, quemaduras, etc.),
ninguno será catalogado como menor.

Emplear técnicas asépticas para el manejo
de cultivos de microorganismos.

Aprendimos el uso adecuado de los instrumentos que
utilizaremos en las prácticas
microbiológicas.

EL AUTOCLAVE: es un dispositivo que sirve para
esterilizar material médico o de laboratorio,
utilizando vapor de agua a alta
presión
y temperatura.
El autoclave coagula las proteínas
de los microorganismos debido a la presión y temperatura,
aunque recientemente se ha llegado a saber de algunos
microorganismos, así como los priones, que pueden soportar
las temperaturas de autoclave.

Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o
generación de vapor de agua pero restringiendo su salida,
hasta obtener una presión interna de 103 kPa, lo cual
provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados
centígrados. Un tiempo
típico de esterilización a esta temperatura y
presión es de 15 minutos.

LA CAMPANA DE FLUJO LAMINAR: nos sirve para
mantener un área de trabajo
estéril, funciona por medio de absorción de
aire del medio ambiente
el cual es filtrad, para después expulsar el aire limpio
sin microorganismos. En la campana también podemos
utilizar la luz ultra violeta
para mantener el área estéril hay que mantenerla
encendida por 30 minutos, por recomendación no hay que
acercarse al la luz por que puede causar quemaduras
severas.

INCUBADORA: nos sirve para mantener un lugar
óptimo para el desarrollo y
crecimiento de microorganismos, tiene dos divisiones, en el se
ponen los microorganismos y se regula a que temperatura se debe
mantener por lo general es a una temperatura de 38°, no
importa la temperatura del exterior dentro de el ya no existen
variaciones

JARRA DE ANAEROBIOSIS: este aparato sirve para
mantener bacterias
anaerobias. Tiene unos tubos en donde se conectan a una maquina
que succiona el aire. La tapa tiene un catalizador para facilitar
el proceso.

MICROSCOPIO: es el instrumento más
necesario para un microbiólogo, ya que permite la observación de organismos que no pueden ser
apreciados en detalle a simple vista, es decir de los
microorganismos. Existe una gran variedad de microscopios que,
según la fuente de iluminación utilizada, se agrupan
en:

Microscopios ópticos: La fuente
de iluminación es la luz.

  • De campo claro. Permiten la
    observación de preparaciones, en su color natural o
    contrastado mediante tinciones, resaltadas sobre un fondo
    más brillante.

  • De campo oscuro. Permiten la
    observación de formas celulares que destacan
    brillantes sobre un fondo oscuro. Este efecto se consigue
    utilizando diafragmas especiales.

  • De contraste de fases. Gracias a la
    utilización de diafragmas y objetivos especiales, que
    consiguen aumentar las diferencias en el índice de
    refracción de las células y el medio que las
    rodea, permiten la observación de células
    vivas, ya que no es necesario realizar ninguna tinción
    de las mismas.

  • De interferencia. Permiten observar
    células vivas sin teñir, obteniéndose
    una imagen en relieve de las mismas.

  • De fluorescencia. La luz ultravioleta que
    excita ciertas moléculas presentes en las
    células (bien de forma natural o añadida a la
    preparación) que emiten fluorescencia en el espectro
    visible.

  • Confocal. Permite obtener imágenes bi
    y tridimensionales de alta resolución. Es un
    microscopio computerizado que acopla un láser a un
    microscopio óptico obteniéndose imágenes
    fluorescentes. Análisis digital por ordenador. Tiene
    un diafragma especial llamado pinhole que elimina la
    señal de las regiones que se encuentran fuera de
    foco.

Microscopios electrónicos: La
fuente de iluminación es un chorro de electrones y las
lentes son electroimanes.

  • De transmisión. Permiten la
    observación de muestras teñidas con sustancias
    que son resistentes al paso de electrones y cortadas dando
    lugar a láminas finas, denominadas cortes finos. Los
    electrones no son visibles directamente por lo que
    éstos se envían a una pantalla que emite
    fluorescencia más o menos intensa según el
    número de electrones que inciden en ella. Las
    estructuras celulares que se tiñan más
    intensamente impedirán el paso de electrones y por lo
    tanto no permitirán la emisión de
    fluorescencia, por lo que estas estructuras aparecerán
    oscuras en un fondo más brillante. Se consiguen entre
    10.000 y 100.000 aumentos.

  • De barrido. Permiten la observación de
    células enteras, sin necesidad de cortes finos, de
    modo que aparecen los relieves originales y las superficies
    externas. Alcanzan entre 1.000 y 10.000 aumentos. Durante las
    prácticas se empleará el microscopio
    óptico de campo claro.

La capacidad de un microscopio para
observar diferentes estructuras se
refleja en el número de aumentos y en el límite de
resolución (LR).

El número de aumentos de un
microscopio resulta de multiplicar los aumentos que

Proporciona cada una de las lentes presentes entre la
fuente de iluminación y la lente Ocular.

• El límite de resolución (LR)
se define como la distancia mínima a la que se deben
encontrar dos puntos para que puedan observarse separados. El
microscopio es mejor cuanto menor sea el LR del mismo.

Si queremos mejorar la capacidad de observación
de un microscopio se debe incrementar el número de
aumentos y disminuir el límite de resolución (LR).
Normalmente se utiliza aceite de inmersión. Es
importante recordar que no todos los objetivos son
impermeables al aceite. En los
microscopios que se utilizarán en las prácticas,
sólo puede utilizarse el aceite de inmersión con
el objetivo de
100
Ã-.

Observación
microscópica

Para observar una muestra al
microscopio óptico podemos recurrirá a:

Preparación húmeda. Se
realiza colocando una gota de la suspensión de
microorganismos entre un porta y un cubreobjetos. Se observa
directamente.

Preparación fijada. Se coloca una
suspensión homogénea de microorganismos en una gota
de agua sobre el portaobjetos y se fija (mediante calor o
agentes químicos). Después se tiñen mediante
diferentes técnicas.
Estas preparaciones se observan sin cubreobjetos y,
habitualmente, con objetivos de inmersión.

Tinciones

Son técnicas que permiten observar
microorganismos en función de
la capacidad de los mismos para retener o no determinadas
sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la célula
y del colorante. Los colorantes pueden ser de distintos
tipos:

  • Catiónicos. Son sustancias
    que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las
    células y las tiñen. Ejemplos: azul de
    metileno, cristal violeta, safranina.

  • Aniónicos. Con carga
    negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no
    tiñen las células, sino el entorno. En este
    caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina,
    nigrosina.

  • Liposolubles. Se mezclan con los
    lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro
    sudán.

Las tinciones pueden ser:

Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en
el hecho de que las células
tienen una composición química diferente a
la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma
diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las
células (azul de metileno, safranina) o no
(nigrosina).

Diferenciales. Se basan en el hecho de que
distintos tipos de células tienen distinta
composición química, y por lo tanto reaccionan de
forma diferente frente a una tinción, lo que permite
clasificar los microorganismos en diferentes grupos,
según su capacidad de tinción. En este apartado
están dos tinciones de importancia taxonómica y
médica: la tinción de Gram y la de
ácido-alcohol
resistencia (de
Ziehl-Neelsen). Estas tinciones utilizan más de un
colorante.

Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas
estructuras celulares tienen distinta composición
química, de modo que se tiñen selectivamente con
ciertos colorantes. Ej; tinción de esporas, de flagelos,
de paredes celulares, de corpúsculos
metacromáticos.

Pueden utilizarse uno o más
colorantes.

Conclusiones

Conocer el equipo y material de uso en la
práctica microbiológica ayuda a prevenir accidentes y a
trabajar adecuadamente en el laboratorio de
microbilogia.

El éxito
de las normas depende de
la sinceridad, la constancia, la participación activa y
cooperativa de
cada estudiante, por ello antes de asistir al laboratorio,
debemos leer el fundamento y las actividades a realizar, para
así evitar posibles accidentes, con el
conocimiento y las técnicas de trabajo
apropiadas.

Cuestionario

1.- ¿QUÉ CUIDADOS SE DEBEN OBSERVAR AL
UTILIZA LAS CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR?

R=No permanecer dentro de la campana demasiado
tiempo, y no mira fijamente la luz ultra violeta.

2.- ¿EN QUÉ CONSISTE LA TÉCNICA DE
ILUMINACIÓN DE KÃ-HLER?

R=en centrar el objetivo del microscopio para tener
una mejor visibilidad del microorganismo.

3.- ¿CÓMO DESTRUYE A LOS MICROORGANISMOS
EL CALOR HÚMEDO?

R= Al llegar el agua al
punto de ebullición empieza a subir la presión,
esto permite destruir a cualquier microorganismo
.

4.-¿EN QUÉ CASOS SE EMPLEAN LAS MEMBRANAS
DE ESTERILIZACIÓN?

R=Se pueden emplear cuando se trabaja con materiales
sensibles al calor como las soluciones de
antibióticos azucares y otros medicamentos.

5.-INVESTIGUE QUE OTROS TIPOS DE MICROSCOPÍA
TIENEN APLICACIÓN EN MICROBIOLOGÍA.

R=Campo oscuro, campo claro, contraste de fases y
fluorescencia.

Bibliografía

College of Egineering and Engineering
Technology. 2001. Laboratory Safety Guidelines.

HHMI Lab Safety: Emergency Response Guide:
Personal
Injury. 2001.

Mahon, Conni and Manuselis, George. 2000.
Textbook of Diagnostic Microbiology.

Second edition. W.B. Saunders Company.
USA.

Universidad de Alicante. Facultad de
Ciencias.
Manual de
Supervivencia en el Laboratorio. Marzo 2001.

URL: http://www.ua.es/centros/ciencias/seguridad/hab_seg_lab_biol.htm

 

 

 

 

 

 

Autor:

Adriana Casique Bernal

UNIVERSIDAD DE CIENCIAS Y ARTES DE
CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS
BIOLOGICAS

Partes: 1, 2
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