Tinción de esporas bacterianas (página 2)

Enviado por Yohn Jairo Guevara Boh�rquez

Partes: 1, 2

Formación y
destrucción. Cuando una bacteria percibe condiciones
ambientales desfavorables, comienza el proceso de
esporulación, el cual llega a durar cerca de 10 horas. Se
repliega el ADN y una pared
de la membrana conocida como tabique se comienza a formar. La
membrana de plasma de la célula
rodea esta pared formando una doble membrana alrededor del ADN y
la estructura se
convierte ahora en lo que se conoce como forespora. El calcio se
incorpora a la forespora.

La corteza se forma después entre
las dos capas y la bacteria agrega una capa más a la
forespora. La esporulación es completa ahora, y la
endospora es lanzada cuando se degrada la célula
vegetativa.

La endospora es resistente a la mayoría de
agentes que matarían normalmente a las células
vegetativas. Los productos de
limpieza de la casa generalmente no producen ningún
efecto, ni la mayoría de alcoholes,
compuestos de amonio o de los detergentes, sin embargo el oxido
de etileno es eficaz contra las endosporas.

Importancia. Como un modelo
simplificado para la diferenciación celular, los detalles
de la endospora se han estudiado extensivamente, especialmente el
Bacilo subtilis. Estos estudios han contribuido al
estudio de los genes, transcripción y unidades del factor
sigma de la polimerasa del ARN.

Bacterias productoras de
esporas

Los ejemplos de bacterias que
poseen este mecanismo incluyen los géneros:

Bacilo
Clostridium
Desulfotomaculum
Sporolactobacillus
Sporosarcina
Thermoactinomyces

Materiales y
métodos

Microscopio
Portaobjetos
Asa bacteriológica
Pinzas
Frasco lavador
Mechero de Bunsen
Toalla de papel
Aceite de inmersión
Verde de malaquita
Safranina
Agua destilada
Solución salina
Cultivo bacteriano

Desarrollo
práctico

Seguido de la explicación por parte del auxiliar
de laboratorio se
procedió a colocar con la punta del asa
bacteriológica una gota de solución salina, luego
se esterilizo el asa en el mechero, se enfrió y se tomo la
muestra de un
cultivo bacteriológico utilizado con muestra y se realizo
el frotis. La placa se flameo hasta que se evaporara toda
el agua y se
coloreo con verde de malaquita. Se flameo durante 5 minutos,
adicionando colorante cada vez que se secaba la muestra. Se lavo
con agua hasta
retirar el exceso de colorante y se realizo la tinción con
safranina durante un minuto. Posteriormente se lavó con
agua y se secó con papel absorbente.

La muestra se rotuló y observó al microscopio
óptico con el objetivo de
inmersión. Finalmente se esquematizaron y anotaron los
resultados obtenidos.

Resultados

Luego del montaje al microscopio óptico, se
observaron bacilos Gram positivos esporulados; asimismo se
apreciaron esporas solitarias de forma circular y bacilos que no
presentaban formación de esporas. Las imágenes
de lo visto se muestran en la figura 1.

Monografias.com

Figura 1. Bacilos observados con la
tinción de Verde de Malaquita. a) Bacilos endosporados, b)
bacilos sin formación aparente de endospora, c) Esporas
solitarias. Microscopio óptico. 1000 aumentos.

Discusión y
conclusiones

Finalmente podemos mencionar que a pesar que la bacteria
es una estructura muy pequeña, por medio de la
tinción con verde de malaquita, el cual requirió
del calor para la
penetración; se pudo observar la estructura interna de la
célula bacteriana, particularmente las endosporas. En este
experimento se utilizó una tinción simple debido a
que la misma permite que se coloree toda la célula excepto
la espora que se observa de un tamaño bien
aceptable

Preguntas
complementarias

1. ¿Qué es un frotis y para que se
utiliza?

Se denomina frotis a la extensión que se realiza
sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de
separar lo más posible los microorganismos, ya que si
aparecen agrupados en la preparación es muy difícil
obtener una imagen clara y
nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al
vidrio del
portaobjetos para poder aplicar
los métodos
habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias
sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La
fijación de una extensión bacteriana hace que las
bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo
menos posible la morfología
y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que
pudiera haber.

2. ¿Qué es una tinción?
¿Cuántos tipos existen? Escribe la técnica
de preparación de cada una de ellas.

La tinción es la aplicación de un
colorante sobre una muestra, lo que permite poner en manifiesto
diferencias entre las células o en partes una
célula, o de un microorganismo. Entre los procedimientos
para la observación de células o microorganismos
existen 2 fundamentalmente que son:

Tinción simple: Permite
observar la forma, tamaño y agrupamiento de las
bacterias usando un único colorante (normalmente
básico). Se utiliza un solo colorante, por lo que
todas las estructuras celulares se tiñen con la misma
tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de
lactofenol). El Hidróxido de potasio al 10%
(solución de KOH) permite ver elementos de hongos ya
que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos,
por ejemplo de la célula huésped, pero no
actúa sobre los polisacáridos de las paredes
celulares de los hongos.
Tinción diferencial:
Las tinciones diferenciales son aquellas tinciones que se
usan para diferenciar de manera más explícita
los microorganismos. Estas tinciones utilizan los colorantes
diferenciales, que se componen de más de una sustancia
tintórea. En algunas técnicas de
coloración, las tinciones diferenciales más
importantes que se emplean en bacteriología son las de
Gram y la tinción ácido-resistente. Ambas
tinciones se utilizan para obtener información acerca
de la composición de las capas de la pared celular de
las células bacterianas.

3. ¿Qué es un colorante?
¿Cómo esta constituido? ¿Cómo es que
cambia con los diferentes componentes celulares?

Un colorante es una sustancia que es capaz de
teñir las fibras vegetales y animales. Los
colorantes se han usado desde los tiempos más remotos,
empleándose para ello diversas materias procedentes de
vegetales (cúrcuma, índigo natural, etc.) y de
animales (cochinilla, moluscos, etc.) así como distintos
minerales. Los
colorantes más usados son sales, las cuales están
constituidas por un ion cargado positivamente y un ion cargado
negativamente. Por ejemplo, azul de metileno es actualmente la
sal cloruro azul de metileno.

El grupo
auxocromo es el que facilita la unión del colorante a
otras sustancias con carga eléctrica.

4. ¿Qué factores intervienen para que los
colorantes se combinen con los componentes celulares?

Muchos colorantes utilizados con frecuencia son
moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan
con intensidad con los constituyentes celulares cargados
negativamente, tales como los ácidos
nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de
colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal
violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas
cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los
constituyentes celulares cargados positivamente, tales como
muchas proteínas.
Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el
rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles;
los colorantes de este grupo se combinan con los materiales
lipídicos de la célula, usándose a menudo
para revelar la localización de las gotículas o
depósitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es
el negro Sudán.

5. ¿Qué es un mordiente? Menciona tres
ejemplos

El mordiente es una sustancia empleada en
tintorería que sirve para fijar los colores en los
productos textiles, la función
del mordiente es favorecer la fijación del colorante en
las fibras. Este término es usado principalmente en la
industria
textil para designar a aquellas sales metálicas (de
aluminio, hierro,
plomo…), ácidos (el ácido
tánico, usado para fijar colores básicos),
sustancias orgánicas (caseína, gluten,
albúmina,…), etcétera, que sirven para fijar
los colores de estampados en los textiles.

6. Escribe el fundamento de las siguientes tinciones:
Gram, Zielh Neelsen, endosporas (Verde malaquita)

Tinción de Gram: es
un sistema de dos tinciones simples sucesivas, separadas por
una fase de decoloración selectiva. Permite
diferenciar las bacterias que retienen el primer color
(Gram-positivas) de las que no lo retienen (Gram-negativas).
Esta diferencia en comportamiento refleja diferencias
estructurales y fisiológicas entre ambos grupos de
bacterias.
Tinción de esporas: ciertos tipos de
bacterias producen esporas de resistencia cuya pared celular
es característica. La tinción de esporas
permite detectar este tipo de células lo que tiene
utilidad en la identificación del microorganismo en
estudio.
Tinción de Ziehl-Neelsen
(ácido-alcohol resistencia): es un tipo especial de
tinción que permite la identificación de
microorganismos de los grupos Mycobacterium y
Nocardia de gran relevancia
clínica

8. Elabora una tabla en la que señales
todas las diferencias que existen entre bacterias Gram
positivas y bacterias Gram negativas.

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8. Escribe correctamente el nombre de 3 microorganismos
acido alcohol
resistentes, 3 microorganismos esporulados, 3 microorganismos
capsulados, 3 bacterias Gram positivas y 3 bacterias Gram
negativas. Señala la importancia de cada una de
ellas.

Microorganismos acido alcohol resistentes:
Mycobacterium tuberculosis (causa tuberculosis),
Mycobacterium leprae (causa la lepra),
Mycobacterium avium (causa fiebre, perdida de peso y
fatiga).
Microorganismos esporulados: . (enteritis necrótica o la
gangrena gaseosa.), Clostridium
botulinum (produce botox), Bacillus
cereus (Produce dos tipos de toxiinfecciones
alimentarias: la forma diarreica y la forma
emética.)
Microorganismos capsulados: Haemophilus
influenzae, (causa la influenza), Streptococcus
pneumoniae (causa neumonía), Cryptococcus
neoformans (micosis sistemática)
Bacterias Gram positivas: Bacillus
anthracis (produce la enfermedad del carbunco),
Clostridium botulinum (produce botox), Clostridium
tetani (produce tetanos)
bacterias Gram negativas: Neisseria
gonorrhoeae, (produce la gonorrea), Serratia
marcescens (causa de infecciones nosocomiales y
urinarias.), Rhizobium leguminosarum (ayuda a las
plantas a fijar nitrogeno).

Bibliografía

WOLIN, M. 1973. Tratado de microbiología. 20
Edición. Editorial Interamericana, México.
Pág. 901.
BROCK, TH. D: 1998. Biología de los
Microorganismos. Editorial Prentice Hall. USA.
KIMBALL, Y. 1986. Biología. Cuarta
edición. Addison – Wesley Iberoamericana. Wilmington,
EU.
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
http://es.wikipedia.org/wiki/Endospora
http://fai.unne.edu.ar/biologia/microgeneral/micro-ianez/12_micro.htm