Disminución de las cantidades a emplear del reactivo sulfato de amonio en el proceso de purificación del toxoide tetánico (página 2)

En 1936, bajo la dirección del Dr. Enrique Tejera, nace el
Instituto Nacional de Higiene por
decreto del General Eleazar López Contreras, Presidente
para aquel entonces de los Estados Unidos de
Venezuela y
publicado en la Gaceta Oficial Nº 19700 del 18 de Octubre
del año 1938, en uso de la atribución 14 del
artículo 100 de la Constitución Nacional y de conformidad con
lo dispuesto por el artículo 70 de la Ley
Orgánica de la Hacienda Nacional, y de acuerdo con lo
resuelto en Consejo de Ministros.

El artículo 1º establece que se crea el
Instituto Nacional de Higiene, adscrito al Ministerio de Sanidad
y Asistencia Social, con personalidad
jurídica, autónoma, y patrimonio
propio, distinto e independiente del Fisco Nacional, con su
asiento principal en la ciudad de Caracas, capital de
la
República.

En el artículo 2º se definen las funciones que el
Instituto Nacional de Higiene tendrá a su cargo, las
cuales son las siguientes:

• a) Investigaciones
  endemo-epidemiológicas y de epizootias nacionales y de
  todas aquellas enfermedades que puedan existir en el
  país, y el estudio de los métodos mas
  apropiados para combatirlas

• b) Estudio de los problemas de nutrición
  en las distintas regiones del país; análisis de
  las aguas y sustancias alimenticias

• c) Preparación técnica del
  personal para los distintos servicios del Ministerio de
  Sanidad y Asistencia Social, tales como Médicos
  Higienistas, Inspectores de Sanidad, Preparadores de
  Laboratorios y Enfermeras Sanitarias

• d) Revisión y análisis de los
  productos biológicos y farmacéuticos que se
  ofrezcan en venta

• e) Exámenes bacteriológicos,
  parasitológicos y químicos de rutina de los
  Departamentos del Ministerio de Sanidad y Asistencia
  Social.

• f) Elaboración de productos
  biológicos y químicos para uso humano y
  veterinario, tales como toxinas y Toxoides, tuberculinas,
  vacunas, sueros, productos para tratamientos antileprosos y
  antianquilostomiásicos y demás productos que se
  necesiten para el consumo de los diferentes Departamentos del
  Ejecutivo Federal, de los Estados, de las Municipalidades e
  instituciones benéficas privadas.

Para 1938 la institución funcionaba en el viejo
local de la Dirección de Sanidad Nacional entre las
esquinas de Cruz de la Vega y Palo Grande, Nº 223 y no fue
hasta 1951 cuando es trasladado a la Universidad
Central de Venezuela, Ciudad Universitaria.

El 29 de Marzo de 1977 y en ocasión de
conmemorarse los 100 años del nacimiento del sabio Rafael
Rangel (1877-1977) y por decreto emanado de la Presidencia de la
República con el Nº 2104, el Instituto Nacional de
Higiene es denominado Instituto Nacional de Higiene "Rafael
Rangel", en homenaje a este ilustre venezolano. En esa misma
fecha se decretó el "Año de la Ciencia
Venezolana". Actualmente, su presidente es el Dr. Jesús
Querales Castillo, Médico Veterinario y reconocido
Científico.

• Visión

Ser centro de referencia nacional e internacional
certificado y acreditado en producción de biológicos, registro y
control
sanitario, diagnóstico y epidemiología,
docencia,
investigación aplicada, y extensión,
para el desarrollo de
programas de
contraloría, prevención y vigilancia para generar
información
técnica-científica en áreas de su competencia; en
apoyo a la toma de
decisiones y formulación de políticas
esenciales del Ministerio del Poder Popular
para la Salud en
defensa de la Salud
Pública.

1.4. Misión

El Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel",
organismo autónomo adscrito al Ministerio del Poder
Popular para la Salud, es un centro de referencia nacional para
prevención y vigilancia sanitaria a través de los
programas:

• Registro y control sanitario de productos de uso y
  consumo humano.

• Diagnóstico y vigilancia
  epidemiológica en las áreas de
  bacteriología, virológica,
  micología.

• Docencia, investigación aplicada y
  extensión.

• Producción de bienes y servicios:

• Vacunas bacterianas y virales.

• Medios de cultivos.

• Cultivos celulares.

• Reactivos y colorantes.

• Agua, calidad inyectable.

• Animales de laboratorio y derivados.

• Procesamiento de materiales.

• Esterilización.

Recurso humano especializado, con dominio
técnico-científico adquirido, transmitido entre
generaciones. Procesos y
equipos de avanzada tecnología e
infraestructura, que cumplen con las normativas nacionales e
internacionales en gestión de
calidad; en cumplimiento con las políticas de salud
del Estado
Venezolano.

1.5. Objetivos de
la Empresa

• Realizar diagnósticos y ser referencia de
  enfermedades infecciosas en las áreas de
  bacteriología, virológica y
  micología.

• Desarrollar investigación aplicada de
  enfermedades infectocontagiosas, tales como: fiebres
  hemorrágicas, encefalitis, brucelosis, resistencia
  bacteriana, micosis superficiales y profundas y enfermedades
  respiratorias.

• Contribuir con la vigilancia epidemiológica,
  en apoyo a los programas del Ministerio del Poder Popular
  para la Salud.

• Realizar diagnóstico y seguimiento de
  pacientes VIH positivos como parte del programa nacional de
  control de infecciones de transmisión sexual y SIDA
  del Ministerio del Poder Popular para la Salud.

• Producir vacunas bacterianas, vacunas virales, los
  insumos necesarios, tanto para producción, como para
  control, diagnóstico e investigación y
  desarrollar otros inmunobiológicos que sean requeridos
  por el país.

• Ofrecer servicios de:

• Diagnóstico bacteriológico.

• Diagnóstico virológico.

• Diagnóstico micológico.

• Coordinar todas aquellas actividades derivadas de la
  ejecución de proyectos, como lo es la nueva planta
  productora de vacunas y otros en desarrollo, con las
  actividades derivadas por la producción actual, para
  una transición efectiva y garantizando en todo momento
  el abastecimiento nacional de los rubros
  comprometidos.

1.6. Organización y características del
departamento donde se realizó la
pasantía

La pasantía se realizó en el Laboratorio de
Producción de Toxoide Tetánico del Instituto
Nacional de Higiene "Rafael Rangel" la cual tiene como función
elaborar la toxina para la elaboración de la vacuna de
tétanos requeridas por el Ministerio del Poder Popular
para la Salud.

En la actualidad la producción de la vacuna
titánica se lleva a cabo en instalaciones existentes desde
hace más de treinta y cinco años mediante el
cultivo y fermentación de la bacteria por medio de
distintos procesos de producción con proteínas.

Ante la necesidad de mejorar la estructura e
instalaciones del departamento, se está desarrollando un
proyecto para
la construcción de un nuevo laboratorio de
producción de vacunas que
permita flexibilidad para incrementar las capacidades de
producción de la vacuna titánica, con
tecnologías de punta.

El departamento esta a cargo de la Gerencia
Sectorial de Producción, organizado de la siguiente
manera:

• Un (1) jefe de laboratorio.

• Un (1) supervisor de procesos en el
  laboratorio.

• Dos (3) ayudantes químicos.

• Dos (2) auxiliares técnicos.

El personal tiene
como funciones cultivar la bacteria, para que esta al segregar la
toxina sea procesada e inmunizada con distintas técnicas
de laboratorio, suministrándole además distintos
reactivos los cuales ayudan a la
neutralización.

Características físicas

Consta de una superficie de 350 metros cuadrados (m2),
de construcción horizontal con las siguientes
características:

• (2) áreas de laboratorio.

• Dos (2) áreas de incubación de
  productos en proceso.

• Un área (1) de observación de
  células.

• Un (1) área de lavado y
  preparación de material.

• Un (1) área de control biológico de
  proceso.

• Área administrativa.

• Dos (1) cuartos refrigerados.

• Un (1) área de depósito de materiales
  y reactivos.

• Un (1) área de autoclave.

Características ambientales

Posee un ambiente
climatizado con aire
acondicionado que no se apaga, el cual se divide por tipo de
producción especificando en cada área la temperatura
adecuada que se requiere.

Características
tecnológicas

Acorde con la normativa de producción de
biológicos, tecnificada en lo que refiere al momento
actual permitiendo que la elaboración de los productos y
servicios que
se ofrecen sean de primera calidad y cumplan
con los requisitos legales que los rigen.

Grafico nº 1

Organigrama del Laboratorio de
Producción del Toxoide Tetánico.

Fuente: Laboratorio de
Producción de Vacuna Tetánicas, año
2008.

1.7 Proceso que
cubre el Departamento donde se realizó la
pasantía.

En el Laboratorio de Producción del Toxoide
Tetánico se elaboran Vacunas, en donde el proceso de
producción consta de 11 etapas fundamentales:

Preparación del medio de cultivo Latham:
Tioglicolato

Esta etapa es donde se da la preparación de la
toxina tetánica. El cual consiste en agregar 4480 gramos
de NZ- Casc, diluido en 30 litros de agua
purificada en un beacker, donde se procederá a mezclar la
solución de manera constante, junto con esto se colocara
el beacker, en un horno para aplicarle calor a la
solución, con la finalidad de que el polvo de NZ –
Casc, se diluya completamente generando una mezcla
homogénea. Seguido de esto se transvasara el contenido de
30 litros en un tanque porcelanizado este posteriormente limpiado
con alcohol y agua
(H2O).

Al contenido de 30 litros se le añadirá
100 litros de agua destilada, obteniendo una solución
final de 130 litros. A este se le tomara una muestra y se
procederá a medir el ph,
según el resultado obtenido se le añadirá
Acido Clorhídrico a tres normal (HCL-3N) hasta que la
solución obtenga un grado de acidez (PH) de
8,5.

Continuamente se añadida a la preparación
las siguientes soluciones:

• Solución I vitamina H: pesar 25 miligramos de
  vitamina H y agregar 500 mililitros de Etanol al 25 %, para
  una mayor disolución se le añadirá 2
  gotas de Hidróxido de Sodio a cinco normal (NaOH
  – 5 N).

• Solución II vitamina B12: pesar 52.5
  miligramos de vitamina B12 y diluirlo en 100 ml de etanol al
  25 %.

• Solución III vitaminas: pesar 0,1 gramos de
  Clorhidrato de tiamina, Riboflavina, Piridoxina. 0,4 gramos
  de Pantotenato de Calcio, luego estos se diluirán en 4
  litros de Etanol al 25%.

• Solución IV Acido Nicotínico con
  Uracilo: pesar 0,5 gramos de Uracilo y agregar 40 mililitros
  de Acido Clorhídrico concentrado (HCL) junto con una
  pequeña cantidad de agua, colocar la solución
  en una cámara de vapor para aplicar calentamiento para
  así poder obtener una mezcla homogénea, seguido
  se le añadirá 0,1 gramos de Nicotínico
  en la solución anterior.

• Solución V Cloruro de Hierro: pesar 12,8
  gramos de Cloruro de Hierro hexahidratado (FeCl3 x 6 H2O) y
  agregar 40 mililitros de HCL concentrado (Acido
  clorhídrico).

• Solución VI Glucosa + cloruro de sodio +
  Sulfato de magnesio: pesar 1400 gramos de glucosa, 16 gramos
  de sulfato de magnesio (MgSO4) y 400 gramos de Cloruro de
  Sodio (NaCl) seguidamente diluirlos en 5 litros de agua
  (H2O).

Luego de la preparación de la solución
esta será almacenada a temperatura ambiente para su
posterior uso.

Apertura de la cepa (Clostridium
Tetani):

Principalmente verificar el vacío de la ampolla,
para ello esta se sometira a chispas de alta frecuencia generadas
por el detector de vacío. Después de que en la
ampolla no se allá detectado ningún vacío,
desinfectar la ampolla envolviéndolas en una gasa
estéril anteriormente humedecida en alcohol por 10
minutos.

Después del tiempo
transcurrido se procederá a cortar la ampolla, y el
contenido del mismo se le añadirá a la
preparación antes realizada posteriormente tomar con una
pipeta y 0,5 mililitros del caldo Tiogliocolato y agregarlo
dentro de un tubo de ensayo,
seguido se tomara la misma pipeta y la misma cantidad (0,5
mililitros) de caldo Tioglicolato y añadirlo en otro tubo
de ensayo, luego incubar los tubos por 48 horas dentro de una
estufa a 36 grados centígrados, luego colocar 2 mililitros
de caldo Tioglicolato en otro tubo de ensayo e incubar por 24
horas a 36 grados centígrados.

Inoculación de los
fermentadores:

Después de transcurrido el tiempo de
incubación se tomaran 9 fiolas de 250 mililitros y se le
añadirán 200 mililitros de caldo Tioglicolato, al
mismo se le añadirán el contenido de los tubos de
ensayo distribuyendo el contenido del mismo de manera equitativa,
continuamente se añadirá el contenido de 2 fiolas
en cada fermentador el cual será colocado en una maquina
de agitación continua por 8 días, esta debe estar
almacenada en una estufa a 35 grados
centígrados.

Inactivación con
formaldehído:

Para realizar la Inactivación se le añade
a cada fermentador "Caracas" 160 mililitros de
formaldehído al 37% se procederá a mezclar por unos
minutos hasta lograr una solución
homogénea.

Seguidamente se transvasara el contenido de los
fermentadores en frasco de 20 litros y estos se dejaras
almacenados por un tiempo de 30 días a una temperatura de
36 grados centígrados.

Separación del paquete celular:

Luego del almacenamiento de
los frascos de este se procederá a filtrar el contenido de
los frascos, para ello se pasara el contenido de los frascos por
unos filtros de cerámica hechos a base de papel pulpa de 35
milímetros, se recogerá el contenido filtrado en
unos frascos de vidrio pirex de
50 litros.

Filtración de la Toxoide Titánico
Bruto:

Para ello se pasara el toxoide por una maquina de
filtración la cual tendrá colocado en su interior
unos cartuchos de 1.2 y 0.8 micras, el contenido filtrado
será colocado en frascos de 50 litros, seguidamente se
filtrara nuevamente el toxoide y para ello se acoplara otra
carcasa con cartuchos de 0.65 y 0.45 micras, almacenando el
contenido filtrado en frascos de vidrio de 50 litros, para lograr
una máxima filtración se filtrara nuevamente el
contendido de los frascos en un cartucho de 0.22 micras y el
Toxoide obtenido se colocara en un envase de acero inoxidable
de 100 litros.

Concentración por Micro
filtración:

Para la micro filtración de toxoide, se pasara el
contenido anteriormente almacenado en el tanque de acero
inoxidable por un equipo Pellicon- Millipore hasta que el
producto
obtenido alcance entre los 1500 y 2000 Lf por
mililitro.

Purificación con Sulfato de
Amonio

Este proceso es indispensable para eliminar impurezas
que pudiesen estar presentes en el producto concentrado. Esta
purificación se realiza por precipitación con
Sulfato de Amonio a tres (3) concentraciones
diferentes.

Para el proceso de purificación al contenido
resultante del proceso de concentración se realizaran
varios cortes con Sulfato de Amonio es decir tres precipitaciones
el primer corte se realizara añadiéndole al toxoide
la cantidad de 13 % de Sulfato de Amonio agitándose
constantemente hasta lograr su completa disolución, la
mezcla obtenida será almacenada en un frasco de vidrio y
colocado en una cámara fría por 24
horas.

Luego de las 24 horas se procederá a sacar el
frasco de la cámara fría colocándose este en
un lugar estable por 30 minutos, sin perturbar su precipitado,
trasladar el sobrenadante a otro frasco, colocar el sobrenadante
en los seis envases de la centrifuga, luego colocar los envases
dentro de la centrifuga a 10.000 rpm durante una hora, trasladar
nuevamente el sobrenadante de los envases a un cilindro graduado
de 1000 mililitros en caso de que el sobrenadante sea menor de
1000 mililitros agregarle la cantidad que sea necesaria de agua
destilada hasta alcanzar los 1000 mililitros.

Realizar el segundo corte o precipitación
agregando 24.4 % de Sulfato de Amonio y de igual forma agitarlo
hasta su completa disolución y almacenar en una
cámara fría por 24 horas. Trasladar el contenido en
los envases de la centrifuga y centrifugar a 2.500 rpm durante 90
minutos. En este caso se procederá a eliminar el
sobrenadante y el precipitado se colocara en un cilindro graduado
de 1000 mililitros y agregarle la cantidad de agua necesaria para
que el contenido alcance los 1000 mililitros.

Seguidamente se procederá a realizar el tercer
corte en el cual al contenido obtenido se le
añadirá la cantidad de 15.7% de Sulfato de Amonio,
agitándolo constantemente hasta su disolución y
almacenarlo en la cámara fría por 24 horas, colocar
el contenido en los envases de la centrifuga y centrifugar a
2.500 rpm, durante 90 minutos, luego de esto desechar el
sobrenadante y disolver el precipitado en agua destilada en un
cilindro graduado hasta alcanzar los 1000 mililitros.

Eliminación del Sulfato de Amonio
(Diálisis)

Esta etapa se realiza con el fin de eliminar, por
intercambio iónico, el Sulfato de Amonio presente en el
producto con agua destilada, y así lograr una buena pureza
del producto.

Para esta parte del proceso el toxoide obtenido se
dializara durante 24 horas con el equipo marca Amicon DC
-2 recirculando el toxoide en un cartucho HP 100-45, para
determinar que el toxoide dializado se realiza correctamente se
tomara con una pipeta muestras continuas de 0.5 mililitros y se
colocara en tubos de ensayo donde se le adicionara una gota de
Cloruro de Bario concentrado para determinar si este presenta
restos de Sulfato de Amonio, además al producto que es
desechado también se le realizaran pruebas
constantes para determinar si en este se encuentran resto de
proteínas (toxinas).

Filtración estéril del toxoide
Tetánico purificado

Para ello se colocara el contenido obtenido en un tanque
de acero inoxidable y se procederá en una cabina de flujo
laminar a filtrar el contenido en una membrana de 5 micras y
almacenada en un envase de vidrio debidamente estéril
Adicionar Merthiolate al 5% al toxoide purificado además
de colocar a la solución Cloruro de Sodio a una
concentración de 0,85%.

Preservación de la toxina

Esta etapa del proceso se realiza con la finalidad de
preservar el producto, para ello se le añadirá la
cantidad de Timerosal requerida al 5 % de acuerdo a la cantidad
total obtenida se le añadirá la cantidad de 25
mililitros de Cloruro de Bario, posteriormente se
procederá a tapar herméticamente el embase para
así conservar el producto.

Grafico Nº 2

Organigrama del
Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel"

Fuente: Gerencia Sectorial de producción,
Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel", año
2008

CAPÍTULO II

Programa de
trabajo asignado

2.1 Objetivo de la
Pasantía

Mejorar la productividad en
el proceso de producción de la vacuna Tétano
Toxoide sin que se vea afectado la pureza antigénica y el
rendimiento del producto, con la finalidad de disminuir el tiempo
de producción además de la cantidad del reactivo de
Sulfato de Amonio a emplear en el proceso de purificación
del Toxoide, realizando para ello un estudio documental de las
técnicas, métodos y
cantidades de Sulfato de Amonio que emplean en los laboratorios
de Brasil y Cuba.

2.1.1 Objetivo General

Evaluar las cantidades de sulfato de amonio a emplear
durante el proceso de purificación del Toxoide
Tetánico, utilizando pequeñas cantidades del
reactivo Sulfato de Amonio y tiempos de producción, sin
afectar la pureza antigénica y el rendimiento del
producto, a fin de aumentar la productividad del
proceso.

2.1.2 Objetivos
Específicos

• Analizar los métodos utilizados en la
  producción de la Vacuna Tétano
  Toxoide.

• Revisar los métodos de purificación
  con sulfato de amonio en la producción del Toxoide
  Tetánico empleados en los laboratorios de Brasil y
  Cuba.

• Registrar y analizar la información sobre los
  procesos de purificación con Sulfato de Amonio de los
  laboratorios anteriormente descritos.

• Aplicar los métodos obtenidos durante el
  análisis de los procesos de purificación
  utilizados en los laboratorios de Brasil y Cuba a los
  empleados en el Laboratorio del Instituto Nacional de Higiene
  Rafael Rangel.

• Determinar la productividad obtenida durante el
  proceso de purificación.

• Evaluar el efecto de la concentración del
  toxoide tetánico sobre la pureza antigénica y
  el rendimiento del proceso de purificación.

2.2 Diagnóstico y Análisis de la
Situación.

El proceso de purificación del Toxoide se lleva a
cabo mediante la adición del reactivo Sulfato de Amonio,
la cual permite la precipitación de la proteína, lo
cual permite la eliminación de las impurezas que pudiesen
estar presentes en el producto concentrado.

Para el proceso de purificación al Toxoide
concentrado se le realizaran varios cortes con Sulfato de Amonio
es decir tres precipitaciones, el primer corte se
realizará añadiéndole al Toxoide la sal
Sulfato de Amonio a una concentración de 13 %, el segundo
corte a una concentración de 24.4 % y un último
corte a una concentración al 15.7 %.

Según las observaciones y los análisis
realizados en el proceso de purificación del Toxoide, se
pudo determinar que este se realiza con la adición de
grandes cantidades de sulfato de amonio, lo cual trae como
consecuencia que en reiteradas oportunidades, la
producción se halla detenido aumentando el tiempo de
producción debido a la falta de esta materia prima,
en vista de este inconveniente, el objeto de este trabajo es
evaluar una forma de emplear durante el proceso de
purificación solo dos cortes de sulfato de amonio,
generando así la disminución de las cantidades de
sal a emplear para saturar el producto y lograr la
precipitación de la proteína.

2.3 Cronograma de Actividades

Las actividades desarrolladas se desprenden de los
objetivos específicos planteados, que permitieron
además el logro del objetivo general propuesto, a
continuación se presentan en la siguiente matriz
metodológica:

CUADRO Nº 2.

Cronograma de
actividades

2.4 Antecedentes y Bases
Teóricas

Antecedentes

Los antecedentes se basan el las consultas de
artículos y trabajos cuyo tema esta relacionado con los
procesos de producción de vacuna Tétano Toxoide
empleados en el Instituto Nacional de Higiene como por otros
laboratorios nivel mundial.

En el estudio del proceso de producción que
actualmente se realizan en el laboratorio del Instituto Nacional
de Higiene, se tomaron en cuenta los manuales y
protocolos de
procedimiento
de producción, los registros
históricos de los procesos, poes, etc.

Lobo, Evelyn. (2007) en la revista
Redvet, pública un artículo relacionado con la
producción de vacunas en Cuba titulado "Cuba y las
producciones de vacunas". Lo cual señala que en el caso de
la producción éste cuenta con siete décadas
de experiencia en la producción de biológicos al
servicio de la
salud, actualmente se constituye como líder
en el mercado,
garantizando más del 97% de las vacunas Tetánicas
en el país y es uno de los ejemplos más fehacientes
del dinámico que hacer productivo, investigativo y de
comercialización, a partir de la
consagración de un colectivo de alto nivel
científico y profesional. Produciendo actualmente vacunas
Tetánicas con bajo costo de
producción, felicidad de producción e inmunidad
eficaz, duradera y estable.

La revisión de la revista permitió ver
cierta similitud con el proceso de producción que
actualmente se realiza en el laboratorio del Instituto Nacional
de Higiene a excepción de la etapa de purificación
con Sulfato de Amonio, ya que actualmente en los laboratorios de
Cuba para la producción de la vacuna Tetánica
ejecuta sola mente la aplicación de dos cortes, y en el
Instituto Nacional de Higiene realiza la aplicación de
tres cortes con Sulfato de Amonio, lo cual permite determinar que
si en ambos procesos las etapas de producción poseen pocas
variantes es posible aplicar a la purificación del Toxoide
solo dos purificaciones con Sulfato de Amonio. (Pág. 5 a
la 7)

Finlay, Carlos. (2008) Pública en la
revista Cubana de enfermería
un artÍculo titulado "Empleo del
método de
purificación en la evaluación
de vacuna Tetánica de producción nacional" en el
cual describe el método de obtención de la vacuna
Tétano Toxoide, desarrollada en los últimos
años en Cuba, expresando los métodos de
producción y los resultados de las pruebas químicas
y biológicas realizadas a la vacuna final, en donde se
comprueba la eficiencia de la
técnica de purificación para la prueba de
concentraciones de Lf, comparándose con la prueba de
floculación para la determinación de las
concentraciones del Toxoide Tetánico presentes en la
vacuna, aportándonos para la presente investigación
los tipos de pruebas a realizar durante la purificación y
así poder determinar la eficiencia y la
concentración del producto final.

Bases Teóricas

La realización de este informe esta
sustentado por el estudio de los procesos de producción de
otros laboratorios a nivel mundial, pero en específico los
procesos de producción de la vacuna Tétano Toxoide
realizado por los países de Cuba y Brasil.

Torres, Orlando (2006), en su revista para la
Facultad de Ciencias,
titulada "Purificación de toxinas a partir de la sal
Sulfato de Amonio" señala que para el proceso de
purificación del Toxoide Tetánico y
Diftérico emplea solamente dos incisiones con Sulfato de
Amonio, es decir solo emplea para el proceso de
purificación dos cortes estos con concentraciones
diferentes, lo cual nos permite deducir que en procesos de
producción de vacunas Tetánicas se pueden emplear
solamente dos cortes con Sulfato de Amonio, esto nos aporta una
base para experimentar y determinar si en el proceso de
producción actual se puede realizar una
purificación empelando solo dos cortes. (Pág. 01 a
la 30)

Brentani, Ricardo (2008) en su libro Pesquita
titulado "Camino a la autosuficiencia" menciona los procesos de
produccion actualmente realizados en Brasil donde menciona que
este país cuenta con laboratorios que tienen gran
experiencia en la producción industrial de vacunas
antibacterianas y que estos laboratorios producen un toxoide
tetánico muy purificado que puede utilizarse como
proteína para la conjugación química y en nuevas
combinaciones de vacunas bacterianas.

Menciona además las etapas del proceso de
producción del Toxoide donde describe que en las etapas de
precipitación de las proteínas solo emplean
pequeñas cantidades del reactivo Sulfato de Amonio en solo
dos etapas o cortes, teniendo como resultado final un Toxoide
altamente purificado con un alto rendimiento del proceso. Esto
contribuye a sustentar la
investigación de este trabajo, ya que permite
respaldar que la ejecución de este proyecto es viable de
acuerdo con los datos de los
resultados de los procesos de purificación que se realizan
en el país de Brasil (Pág. 20 a la 42.)

2.5 Definición y Términos
Básicos

Anatoxina: Toxina bacteriana modificada para que
pierda su toxicidad pero mantenga la capacidad de generar
anticuerpos. Toxoide.

Beacker: envase parecido a vaso de precipitado y
se usa para disolver sólidos y hacer disoluciones, hacer
mezclas, etc.
es uno de los materiales de
vidrio mas usados en los laboratorios

Caldo: se refiere a los medios de
cultivo líquidos empleados en microbiología.

Clostridium Tetani: bacteria gram positiva, con
morfología
bacilar compatible con la de bastones delgados y largos que
varían en longitud pero del mismo grosor. Es el agente
etiológico del tétanos.

Coloración gram: coloración
diferencial utilizada en microbiología para clasificar las
bacterias en
dos grupos de acuerdo
a su capacidad de retener colorantes

Desferretización: Método
químico que se aplica a la solución de NZ Case para
eliminar la concentración de hierro
presente.

Diálisis: es el proceso de separar las
moléculas en una solución por la diferencia en sus
índices de difusión a través de una membrana
semipermeable.

Equipo para el Fermentador Caracas: se refiere a
los dispositivos creados con tapón de goma, varillas
horadadas de acero inoxidable y goma de látex, los cuales
constituyen las conexiones de los fermentadores a través
de las cuales se hará circular el aire y los
vapores producidos durante el proceso fermentativo, el
inóculo, toma de muestra y la toxina al momento de
cosecharla.

Fermentador Caracas: fermentador que se emplea
para la producción de Toxoide Tetánico,
específicamente para la producción y desarrollo de
la Toxina Tetánica.

Filtración: Proceso de separación
de uno o más elementos sólidos de un elemento
fluido (líquido o gas), mediante el
paso de la mezcla a través de un elemento poroso
filtrante, llamado filtro.

Floculación: prueba que indica el valor de
cuán concentrado esta el Toxoide por cada mililitro del
producto final

Inactivación: Supresión del efecto
tóxico de un germen o una toxina, conservando propiedades
de utilidad para la
terapéutica

Inoculación: es la acción
de introducir un organismo vivo menor a uno mayor con el fin de
producir la enfermedad que es capaz de generar.

Intercambio iónico: reacción
química reversible, que tiene lugar cuando un ion de una
disolución se intercambia por otro ion de igual signo que
se encuentra unido a una partícula sólida
inmóvil

Lf: Valor de concentración de la
toxina.

Medio de cultivo Latham: Medio final
específico que favorece el crecimiento de la bacteria
Clostridium Tetani.

Micras Unidad de medida en donde una micra
equivale a la milésima (1/1000) parte de un
milímetro

Mgn.p: es la abreviación que
indica la cantidad de miligramos de Nitrógeno Proteico que
se encuentra en una sustancia por cada mililitro.

NZ Case: Hidrolizado enzimático de
caseína.

Precipitado: Producto insoluble de una
reacción química en un medio acuoso.

Purificación Es la acción de
eliminar impurezas e imperfecciones que se encuentres en el
Toxoide.

Repique: término utilizado
comúnmente en microbiología para referirse al pase
o refrescamiento de un microorganismo, de un cultivo ya desarrollado a un
medio de cultivo estéril.

Repique: término utilizado
comúnmente en microbiología para referirse al pase
o refrescamiento de un microorganismo, de un cultivo ya
desarrollado a un medio de cultivo estéril.

Sifonear: acción de trasegar o pasar un
líquido de un recipiente a otro.

Sobrenadante: es la fase líquida superior
que aparece cuando se centrífuga una muestra, quedando el
sobrenadante arriba y un precipitado en la parte de
abajo.

Solución: son mezclas homogéneas de
sustancias en iguales o distintos estados de
agregación.

Sulfato de amonio es una sal cuya fórmula
química es (NH4)2SO4. Se utiliza como floculante y,
además, como un reactivo en biología molecular
para precipitar proteínas solubles. En bioquímica, se usa para precipitar
fraccionadamente las globulinas que no son solubles en agua y
para diferenciarlas de las albúminas. Las globulinas se
pueden redisolver para hacer subsecuentes análisis, como
puede ser la extracción de una proteína en
particular por cromatografía de afinidad con
NaCl.

Tétanos: enfermedad aguda, algunas veces
mortal, del sistema nervioso
central, causada por la toxina de la bacteria Clostridium
Tetani cuando esta entra al cuerpo usualmente a través de
una herida abierta, causando espasmos y contracciones musculares
dolorosas e irreversibles.

Toxina Tetánica: proteína
neurotóxica de 150 Kd de peso molecular conformada por dos
sub-unidades, producida por la bacteria Clostridium Tetani
causante de la enfermedad denominada tétanos.

Toxoide tetánico: sustancia derivada de la
toxina producida por la bacteria Clostridium tetan, utilizada
para fabricar la vacuna contra el Tétanos.

Trasvasar cuantitativamente: Procedimiento
mediante el cual se arrastra con lavados sucesivos toda la
solución de un recipiente a otro.

UI: abreviada alternativamente IU -del inglés
International Unit es una unidad de medida de la cantidad de una
sustancia, basada en su actividad biológica mediada (o sus
efectos).

CAPÍTULO III

La
propuesta

3.1 Tipo de investigación

Los resultados que a continuación se presentan
son producto de una actividad investigada que según su
naturaleza y
de acuerdo con lo establecido en los diseños de
investigación es un estudio descriptivo.

Es descriptivo porque detalla como es y remanifiesta un
hecho, en este caso la "disminución de las cantidades a
emplear del reactivo sulfato de amonio en el proceso de
purificación del Toxoide Tetánico". A través
de este estudio se identifican los diferentes componentes y
elementos del mismo, así como, sus interrelaciones, lo que
significa que se tiene conocimiento
sobre el tema.

En el marco del diseño
señalado el trabajo se
considera factible, porque conduce a la elaboración de una
propuesta viable, que satisface las necesidades del Instituto
Nacional de Higiene Rafael Rangel, el trabajo también se
considera de campo, porque sus resultados además de
contribuir al conocimiento del tema, puede ser aplicado a corto o
mediano plazo.

En la búsqueda de la información se
utilizaron fuentes
primarias y secundarias. Las fuentes primarias por medio de
entrevistas a
la Licenciados y técnicos del instituto y la observación del proceso de
producción.

Las fuentes secundarias mediante la revisión y
lectura de los
siguientes documentos
titulados Purificación de toxinas a partir de la sal
Sulfato de Amonio, Camino a la autosuficiencia, Cuba y las
producciones de vacunas y Empleo del método de
purificación en la evaluación de vacuna
Tetánica de producción nacional

3.2 Propósito, importancia y utilidad de la
propuesta.

Propósito de la
investigación:

La intención de esta investigación
consiste en disminuir los tiempos de producción
además de las cantidades de reactivo Sulfato de Amonio que
se emplearan durante el proceso de purificación de la
Toxina, aplicando para ello cantidades menores de sulfato de
amonio durante la purificación, logrando así la
precipitación de la proteína, sin que se vea
notablemente afectado los valores de
pureza antigénica del Toxoide Tetánico.

Para ello se analizaran los métodos que utiliza
actualmente el laboratorio para el proceso de purificación
del Toxoide Titánico, además de las cantidades del
reactivo Sulfato de Amonio que emplea durante el proceso, con la
finalidad de observar paso a paso cada una de las etapas del
proceso de producción en especial la fase de
purificación del Toxoide Titánico.

Posteriormente se procederá a Investigar los
métodos de purificación con Sulfato de Amonio en la
producción del Toxoide Tetánico que se emplean en
los laboratorios de Brasil y Cuba, ya que estos dos países
poseen experiencia para desarrollar rápidamente y con
eficiencia vacunas antitetánicas, además de contar
con una excelente tecnología en la producción de
vacunas a nivel mundial, en donde esta investigación
permitirá determinar las cantidades, métodos,
técnicas, etc. utilizados durante el proceso de
purificación con Sulfato de Amonio de cada
laboratorio.

Seguido se continuará a registrar y analizar la
información recolectada sobre los procesos de
purificación de cada uno de los laboratorios investigados
con el propósito de determinar las diferencias en los
procesos.

Tomando en cuenta los resultados del análisis se
implementará durante el proceso de purificación los
métodos y cantidades de Sulfato de Amonio obtenidos
durante el análisis de la información registrada
con la intención de comprobar si reduciendo las cantidades
de sulfato de amonio a emplear durante el proceso de
purificación, el Toxoide Titánico no presenta
perturbaciones notables en los valores de
pureza antigénica sin que se vea afectado el rendimiento
del proceso.

Continuamente se determinará la productividad
obtenida durante el proceso de purificación, para ello al
producto final se le realizaran las distintas pruebas sobre la
pureza antigénica.

Evaluar el efecto de la concentración del toxoide
tetánico sobre la pureza antigénica y el
rendimiento del proceso de purificación; permitirá
conocer si al disminuir las cantidades de sulfato de amonio que
se emplearan en el proceso, los valores de pureza y rendimiento
del mismo se ubicaron dentro de los rangos de aceptación,
determinando si fue satisfactorio o no el proceso de
purificación.

Importancia.

La importancia que se obtiene en el cumplimiento de cada
objetivo específico es que representaran los pasos que se
han de estudiar y realizar para verificar la viabilidad de este
proyecto para así poder lograr la finalidad del mismo al
cual consiste en minimizar las cantidades de sulfato de amonio a
emplear durante el proceso de purificación del Toxoide
Tetánico.

En caso contrario que no se cumpla con cada objetivo
específico la viabilidad de este proyecto no seria
realizable, ya que cada uno de éstos son esenciales para
que se pueda llevar a cabo la implementación de esta
propuesta.

Utilidad de la investigación.

El cumplir con cada objetivo específico
beneficiara a la elaboración de esta propuesta, el cual
consiste en minimizar las cantidades de sulfato de amonio a
emplear durante el proceso de purificación del Toxoide
Tetánico, en donde el cumplimiento de cada uno de los
objetivos específicos procederá al logro de la
propuesta.

3.3 Justificación cualitativa y cuantitativa
de la propuesta.

Esta propuesta nace de la indagación acerca de
las técnicas de producción empleadas en la
realización de la vacuna Tétano Toxoide de otros
laboratorios, en especial la etapa de purificación de la
antitoxina, etapa importante a considerar dentro del proceso
producción actual empleado en el Instituto Nacional de
Higiene Rafael Rangel, por ende la justificación
cualitativa y cuantitativa de esta propuesta en donde se plantean
estrategias y
tácticas en el que se destaca en sus aspectos generales la
fácil aplicación del mismo dentro del laboratorio,
además de generar una mejora en el proceso puesto que
disminuiría los tiempos en la etapa de purificación
maximizando la eficiencia del proceso, ya que permitiría
la disminución en el uso de la materia prima
sulfato de amonio, en la etapa de purificación, reducir el
tiempo de ocio tanto del personal que labora en el laboratorio
como de los equipos que se encuentran en el mismo por la falta o
empleo innecesario de esta materia prima.

3.4 Objetivos del modelo
propuesto.

El modelo propuesto es el producto de un análisis
documental y exhaustivo del proceso de purificación de la
vacuna Tétano Toxoide con el reactivo de Sulfato de Amonio
tanto en el Instituto Nacional de Higiene como en otros
laboratorios de Cuba Y Brasil, lo cual exigió la
revisión de fuentes documentales que permitieran la
comprensión de esta etapa del proceso en la
disminución el Reactivo a emplear en la
purificación del Toxoide en los laboratorios de
INHRR.

Con el modelo propuesto se pretende alcanzar la
disminución de las cantidades del Reactivo Sulfato de
Amonio que se emplea dentro del proceso de purificación,
del Toxoide mediante la precipitación selectiva de la
proteína, ya que la disminución de esta sal
contribuirá de manera importante a que esta etapa del
proceso no se vea interrumpida por la falta del mismo,
además de lograr una disminución en el tiempo de
purificación del Toxoide puesto que en esta etapa se
practican tres cortes o purificaciones y con la aplicación
de esta propuesta se disminuiría esta etapa del proceso
solo a dos cortes o purificaciones.

3.5 Factibilidad
económica de la propuesta.

Este modelo propuesto traerá como beneficio la
disminución del tiempo de purificación,
además de las cantidades a emplear del Reactivo Sulfato de
Amonio, se logrará una reducción en al mono de obra
a utilizar en el proceso.

La reducción del tiempo en la etapa de
purificación, traerá como beneficio
económico una disminución alrededor de los 5.000
Bs.F, ya que en esta etapa se invierte un total de 27.000,
Bs.F

En las cantidades a emplear del reactivo habrá
una disminución de 2.200 Bs.F por cada 100 kilogramos de
Sulfato de amonio aproximadamente, ya que el valor variará
de acuerdo a la cantidad de Toxina que allá que
purificar.

CAPÍTULO IV

Resultados

4. RESULTADOS

• Presentación y
  análisis de los Resultados

Los resultados que posteriormente se muestran surgen
como consecuencia del desarrollo de cada uno de los objetivos
específicos.

Cabe mencionar que para el desarrollo de este capitulo
se mencionaran cada uno de los objetivos conjuntamente con los
resultados obtenidos.

A) Análisis de los métodos utilizados
en la producción de la Vacuna Tétano
Toxoide.

Este objetivo permitió conocer de manera
detallada cada unos de los métodos que se utilizan
actualmente en el laboratorio para el proceso de
purificación del Toxoide Tetánico y como resultado
permitió determinar que los procedimientos y
técnicas empleadas están acorde con las buenas
prácticas de manufactura,
ya que emplean en el proceso los equipos y materiales necesarios
para el buen desenvolvimiento de la purificación,
además de saber que dentro del proceso de
purificación estos emplean tres cortes, es decir emplean
tres veces cantidades distintas de Sulfato de Amonio.

Igualmente este análisis permitió observar
las cantidades de Sulfato de Amonio que se emplean el la etapa de
purificación de el Toxoide en donde las concentraciones de
cada corte son de 13%, 27.4% y 15.7%.

Asimismo permitió conocer que estos emplean como
equipo para la purificación la centrifuga a 10.000 rpm,
2.500 rpm y 2.500 rpm seguido de cada corte
respectivamente.

B) Revisión de los métodos de
purificación con sulfato de amonio en la producción
del Toxoide Tetánico empleados en los laboratorios de
Brasil y Cuba.

La revisión de los procedimientos de
purificación que emplean los laboratorios antes
mencionados, trae como resultado el conocer los procedimientos,
métodos, técnicas, que estos emplean el en proceso
de producción pero muy especialmente en el proceso de
purificación del Toxoide Tetánico. Donde se pudo
determinar que en estos laboratorios emplean solamente dos cortes
o purificaciones del producto final, asimismo permitió
percibir que estos laboratorios emplean unas concentraciones al
15% y 21% de Sulfato de Amonio respectivamente.

C) Registro y análisis de la
información sobre los procesos de purificación con
Sulfato de Amonio de los laboratorios anteriormente
descritos.

El resultado de este objetivo permitió hallar las
diferencias y similitudes de los procesos para así
realizar las comparaciones entre los laboratorios de Brasil y
Cuba con respecto al laboratorio del Instituto Nacional de
Higiene Rafael Rangel. Para el registro y análisis se tomo
en cuenta los procesos de producción del Toxoide
Tetánico, como son las técnicas, materiales que se
emplean dentro del proceso, la materia prima que utilizan dentro
de cada etapa de producción. Esto permitió
determinar las siguientes diferencias y similitudes:

Diferencias:

Los laboratorios de Brasil y Cuba emplean para el
proceso de purificación equipos de última
tecnología como son centrifugas con gran capacidad de
almacenamiento.

Los lotes de producción de estos exceden la
cantidad de 10 litros de producto final.

Durante el proceso de purificación del Toxoide
Tetánico con el reactivo de Sulfato de Amonio, solo
realizan dos cortes o purificaciones con una concentración
de 15% y 21%, en cambio en el
laboratorio del Instituto Nacional de Higiene realizan tres
cortes o purificaciones, en lo que respecta a las concentraciones
del reactivo estas son muy similares, ya que en el Instituto
Nacional de Higiene emplean concentraciones de 13%, 27.4% y
15.7%, respectivamente.

Similitudes:

Todos los laboratorios antes expuestos emplean para el
proceso de producción la misma materia prima, al igual que
métodos muy similares en cuanto a la
purificación.

Esto permite deducir que si en los laboratorios de
Brasil y Cuba emplean métodos y procedimientos muy
similares a los realizados en el laboratorio del Instituto
Nacional de Higiene para la producción del Toxoide
Tetánico, a excepción de la etapa de
purificación, esto nos sirve como base para implementar en
la etapa de purificación actual del laboratorio del
Instituto Nacional de Higiene solo dos cortes o purificaciones
con el Sulfato de Amonio, puesto que si estos laboratorios
obtienen un buen rendimiento del producto final sin que se fea
afectado la pureza antigénica, en el laboratorio del
también se emplear solo dos purificaciones.

D) Aplicación de los métodos obtenidos
durante el análisis de los procesos de purificación
utilizados en los laboratorios de Brasil y Cuba a los empleados
en el Laboratorio del Instituto Nacional de Higiene Rafael
Rangel.

Para este objetivo se tomo en cuenta los resultados del
análisis anterior en donde se implemento durante el
proceso de purificación en el Laboratorio del Instituto
Nacional de Higiene Rafael Rangel solo dos cortes o
purificaciones con Sulfato de Amonio a una concentración
de 13%, 27.4%. Cabe mencionar que las demás etapas del
proceso de producción no fueron modificadas,
únicamente se obvió una purificación con el
Sulfato de Amonio, es decir solo se empelaron dos de tres
purificaciones.

E) Determinación de la productividad obtenida
durante el proceso de purificación.

Para poder determinar la productividad obtenida en el
proceso de purificación se realizó al producto
final la prueba de floculación (Lf) (Limes Floculations)
la cual es una prueba que indica el valor de cuán
concentrado esta el Toxoide por cada mililitro del producto
final. Este valor se determinó mediante la
comparación con un patrón de referencia calibrado
contra el reactivo de referencia de la anatoxina Tetánica
para pruebas de floculación.

Para la realización de esta prueba se tomaron 6
tubos de ensayo etiquetados previamente con el valor 30 Lf, 40
Lf, 50 Lf, 60 Lf, 70 Lf y 80 Lf respectivamente, estos se
colocaron en una grandilla y en los cuales se mezclo en cada uno
de los tubos de ensayo la cantidad de 1 mililitro de Toxina, y
según la numeración de los tubos de ensayo se le
agrego la cantidad de 0.06 x 500 UI, 0.08 x 500 UI, 0.10 x 500
UI, 0.12 x 500 UI, 0.14 x 500 UI, 0.16 x 500 UI esto bajo
observación permanente y a una temperatura constante en
baño de Maria a 35 ºC, se espera aproximadamente un
minuto, seguido de esto y con ayuda de una lámpara
fluorescente, se observó que la mezcla que primero
flocule, indicó la cantidad aproximada de toxina presente
en la muestra con un valor de 2000 Lf. Por cada ml de producto
final.

Según este resultado se determinó que
durante el proceso de purificación no se vieron afectados
los valores de concentración del producto, ya que el valor
mínimo de concentración es de 1500 Lf, por cada ml
de producto y el valor de la prueba de floculación que se
realizó al producto purificado con solo dos cortes o
precipitaciones fue de 2000 Lf. Por cada ml, dando por encima del
limite de aceptación del lote.

F) Evaluación de los efectos de la
concentración del toxoide tetánico sobre la pureza
antigénica y el rendimiento del proceso de
purificación.

La evaluación del producto final purificado
permitirá conocer si la disminución las cantidades
de sulfato de amonio que se emplearon en el proceso, afecto los
valores de pureza y rendimiento del mismo además de
indicarnos si estos resultados se ubicaron por encima de los
rangos de aceptación, determinando si fue satisfactorio o
no el proceso de purificación.

Para ello el lote de anatoxina purificada fue sometido a
la pruebas para verificar su pureza antigénica mediante el
resultado de la concentración anterior, el cual tuvo un
valor de 2000 Lf. Por cada ml de producto. Seguido de esto se
realizo la prueba de concentración de Nitrógeno
Proteico (no dializable).

Para determinar la concentración del
Nitrógeno Proteico seguidamente después de la
prueba de floculación, se tomó una pequeña
muestra del producto final purificado y se envió al
departamento de química para la realización de la
prueba donde los resultados de la concentración fueron de
1,264 mgn.p (miligramos de Nitrógeno Proteico) por cada ml
de producto.

Alcanzando los dos resultados, el de la prueba de
floculación y de la concentración del
Nitrógeno Proteico, se obtienen los valores de pureza
antigénica (P.A), en donde este valor indica cuan puro se
encuentra el Toxoide en el producto final, ya que indica cuantos
Lf. De Toxoide hay en relación a los miligramos totales de
proteínas que hay por cada mililitro de
producto.

Para la determinación de los valores de pureza
antigénica se procedió a realizar la siguiente
ecuación:

Pureza antigénica = 2000 Lf / ml = 1582,27
Lf / mg

1,264 mg / ml

Pureza antigénica = 1582, 27
Lf / mg

Según el resultado de la prueba anterior permite
definir que el producto final de Toxoide Tetánico
purificado esta aprobado, ya que los valores del mismo se
encuentran por encima del limite mínimo requerido el cual
es de 1000 Lf. por cada miligramo de Nitrógeno
Proteico.

4.2 Ventajas y Desventajas de las
Pasantías

Ventajas

La pasante tuvo como beneficios el aprendizaje
sobre cada una de las etapas empleadas en el proceso de
producción de la Vacuna Tétano Toxoide, desde la
apertura de la cepa hasta el proceso de almacenamiento
estéril de la Toxina. A su ves esto permitió
reforzar los conocimientos sobre los productos químicos
empleados dentro del proceso, como es su almacenamiento,
fórmulas químicas, riesgos sobre
el manejo de cada uno de estos.

Además de aprender sobre los equipos empleados
dentro de los laboratorios de Microbiología, su uso dentro
del laboratorio la preparación de los mismos antes de
utilizarlos, así como también su
esterilización antes y después de su empleo dentro
del proceso, como es el caso del Auto clave, filtros Pellicon-
Millipore, uso de las balanzas eléctricas,
calibración y uso del Peachimetro, así como
también la manipulación almacenamiento
esterilización de los distintos envases de vidrio dentro
del laboratorio, pipetas, matraces, etc.

Desventajas

En la realización de las pasantías no se encontró ninguna
desventaja, ya que se contaba con el equipo y materiales
requeridos para la realización del proceso, además
de contar con un personal apropiado para la realización
del mismo, lo cual fue de gran ayuda para la culminación
satisfactoria de este proyecto.

Conclusiones y
recomendaciones

Conclusiones

La purificación del Toxoide Tetánico se
realiza en el Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel"
mediante la precipitación selectiva de la proteína
por la adición de sulfato de amonio. Durante este proceso,
son empleadas grandes cantidades de sulfato de amonio y, en
reiteradas oportunidades, la producción se ha detenido
debido a la falta de esta materia prima, la cual se encuentra
controlada en nuestro país por las autoridades policiales
y militares debido a que también es utilizada en el
procesamiento de estupefacientes.

En vista de esta situación, se pensó en
disminuir las cantidades a emplear de sulfato de amonio durante
la purificación y de este modo mejorar la productividad en
el proceso de producción sin que se vea afectado la pureza
antigénica y el rendimiento del producto, para ello se
procedió a analizar los métodos empleados en el
proceso de producción que emplea actualmente el
laboratorio del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel" y
seguidamente compararlos con los procesos de producción de
Brasil y Cuba donde se pudo determinar que losa métodos en
cuanto al proceso son muy similares a excepción de la
cantidades que emplean de Sulfato de Amonio y la cantidad de
cortes o purificaciones que realizan al producto final, ya que en
los laboratorios de Cuba y Brasil durante el proceso de
purificación del Toxoide Tetánico con el reactivo
de Sulfato de Amonio, solo realizan dos cortes o purificaciones
con una concentración de 15% y 21%, en cambio en el
laboratorio del Instituto Nacional de Higiene realizan tres
cortes o purificaciones, ya que en el Instituto Nacional de
Higiene emplean concentraciones de 13%, 27.4% y 15.7%,
respectivamente.

Seguido del estudio se procedió a realizar un
lote experimental implementando durante el proceso de
purificación solo dos cotes o purificaciones con Sulfato
de Amonio a una concentración de 13 % y 27.4 %
respectivamente.

Para determinar la productividad obtenida durante el
proceso de purificación al producto final purificado se le
realizó la prueba de floculación la cual nos indica
el valor de cuan concentrado esta el Toxoide por cada mililitro
del producto final, la cual dio un valor de 2000 Lf. Por cada ml
de producto final, esto permite determinar que la
disminución de purificaciones en el proceso no afecto la
concentración del producto, ya que este se ubicó
por encima del valor mínimo requerido en cual es de 1500
Lf, por cada ml de producto.

Además de la prueba anterior se realizó la
prueba de concentración de nitrógeno proteico que
se encuentra en el producto final, donde los resultados de la
concentración fueron de 1,264 mgn.p (miligramos de
Nitrógeno Proteico) por cada ml de producto.

Logrando los dos resultados el de la prueba de
floculación y de la concentración del
Nitrógeno Proteico, se obtuvieron los valores de pureza
antigénica (P.A), en donde este valor indica cuan puro se
encuentra el Toxoide en el producto final, esto se realizó
mediante la división de los dos valores obtenidos en las
pruebas anteriores donde el valor de concentración dio
como resultado 1582, 27 Lf / mg. Por encima del limite
establecido de 1000 Lf / mg del producto final.

Según los resultados antes expuestos se pudo
llegar a la conclusión de que la reducción de las
purificaciones dentro del proceso de purificación del
Tétano Toxoide no afectó la calidad del mismo en
cuanto a la pureza antigénica y el rendimiento del
producto, lo cual trae como beneficio la viabilidad del proyecto
y su posible aplicación dentro del proceso de
producción realizado en el laboratorio del Instituto
Nacional de Higiene "Rafael Rangel", ya que esto
permitiría la reducción del tiempo de
purificación, además permitirá reducir las
cantidades a emplear de la materia prima Sulfato de Amonio en
esta etapa, así mismo evitara que el proceso se vea
detenido por la carencia de esta materia prima permitiendo esto
que el lote sea culminado dentro del tiempo
establecido.

RECOMENDACIONES

Se sugiere que la empresa
realice nuevamente un lote experimental con la finalidad de
determinar si los resultados obtenidos el en lote experimental
TTPE 01-09 son totalmente viables, y así según los
resultados que arroje el nuevo lote poder implementar este
proyecto en el proceso de producción.

Referencias
bibliográficas

González F. Bello, (1987). La
Producción de Biológicos en
Venezuela

Caracas, Venezuela. INHRR.

Organización Mundial de la Salud
(1994). Evaluación y Planificación del

Proceso de Producción Vacuna
Antitetánica Clostridium tetani. Río

de Janeiro, Brasil. OMS

Jakoby, W.B., (1971). Técnica de
la Purificación de Vacunas. Río de

Janeiro, Brasil. Ed., prensa
académica,

Castro M. (2001). Proyecto de
Investigación Producción de Vacunas.

Cuba. Trillas C.A,

Hernández P. (2002). Manual para
la aplicación y el manejo de vacunas.

Nieto Editores. México.

DEDICATORIA

Quisiera dedicar mi trabajo de grado a mis padres, ambos
me han apoyado de manera incondicional, en especial a mi madre
Yudelis Villamizar, que además de darme la vida ha
estado siempre pendiente de mis luchas diarias, guiándome
siempre de manera excepcional en mis estudios, quien se ha
sacrificado junto a mí y ha sido mi soporte para no darme
por vencida y de esta manera a alcanzar la meta que hoy
logro.

A Pedro Rivero por estar conmigo en este momento
tan especial e importante para mí, quien a pesar del poco
tiempo de conocernos y de manera involuntaria, me permitió
darme cuenta del gran error que estaba cometiendo, además
de enseñarme lo estupenda que puedo ser de verdad mil
gracias por tu apoyo ojala y nunca cambies.

A Marcolis Zambrano por ser una estupenda amiga y
compañera de estudios, por su ayuda incondicional en todos
los momentos. Gracias por ser una linda amiga.

A mi tía Ines Maria, a mi abuelo y abuela
quiénes a pesar de estar lejos de mí, siempre han
estado pendiente de mis luchas.

AGRADECIMIENTO

Quiero expresar mi más sincero agradecimiento a
todas aquellas personas quienes han contribuido, de una u otra
forma, a la elaboración de este trabajo.

De forma especial, quiero agradecer la ayuda de mi
tutora empresarial Lic. Mery Farias, quién además
de ser una gran persona es una
excelente profesional, impartiéndome los conocimientos
necesarios para poder realizar este trabajo, asimismo facilitarme
las herramientas
necesarias para la compresión de proceso de
producción.

A Jaime Rodríguez quien me ayudo de manera
significativa a comprender parte de los procesos
ayudándome de manera incondicional.

A mi tutora metodológica Soc. Rusadil
González, por su disposición en todo momento para
resolver cualquier duda surgida durante la redacción de este informe, con sus
sugerencias para resolver satisfactoriamente el estudio realizado
además, por la atención que me ha dedicado, verdaderamente
mas allá de la llamada del deber.

A mi tutor académico la Ing. Andrea Call por su
colaboración, la cual fue de importancia en la
realización de los parámetros técnicos del
mismo.

De verdad gracias a todos por su apoyo y
colaboración.

Autor:

Jackelin Fernández

Tutor académico

Ing. Andrea Call

Tutor empresarial

Lic. Mery Farias

Tutor Metodológico

Soc. Rusadil González

Caracas, Junio 2009

Extensión: Caracas

Especialidad: Producción
Industrial