Técnicas de concentración, alternativa en el diagnóstico de infecciones parasitarias

Partes: 1, 2

INTRODUCCION

El diagnóstico de las infecciones parasitarias intestinales se basa ampliamente en el análisis microscópico de las muestras fecales, que incluyen montajes húmedos directos, concentrados y frotis con tinción permanente. La cantidad de formas parasitarias en muestras de materias fecal, a menudo, es muy escasa y muy difíciles de detectar en preparados directos en fresco o en frotis teñidos; por lo tanto, siempre deben realizarse procedimientos de concentración.

Como parte del laboratorio de diagnostico de enteroparásitos, se realiza un estudio parasitológico de heces, el cual puede llevar diferentes tipos de técnicas como: 1) Examen directo de una pequeña porción de heces frescas, 2) Examen después de aplicar un método de concentración y 3) Examen de extensiones o preparaciones permanentes.

El presente trabajo pretende evidenciar la posible existencia de endoparásitos en muestras de heces de perro, post-concentración con dos métodos difásicos diferentes.

OBJETIVO

Conocer diferentes técnicas de concentración utilizadas en la identificación de parásitos intestinales en el hombre

TECNICAS DE CONCENTRACION

Se utilizan 2 técnicas de concentración, como parte de un análisis cualitativo:

Concentración de quistes por el método formol-éter

También llamada técnica de sedimentación por centrifugación con Formol-Éter, es efectivo para concentrar huevos y larvas de helmintos, recomendada para detectar huevos de trematodos, acantocéfalos y algunos huevos de cestodos, que no son aislados por el método de centrifugación con sulfato de cinc.

Esta técnica es difásica ya que emplea dos fases no-miscibles

Fase acuosa (sol. formaldehido)
Fase éter o disolvente de lípidos (Acetato de etilo)

Los elementos fecales y los parásitos se localizan en la fase acuosa o en la interfase agua-éter, en función de una característica, el balance hidrófilo-lipófilo.

En el presente estudio se utilizo gasolina blanca, sin embargo en ocasiones es utilizado el acetato de etilo como sustituto del éter o gasolina blanca, debido a que es menos inflamable, de menor costo y menos dañino para su uso en el laboratorio y porque se ha demostrado que no se presentan distorsiones ni alteraciones en la morfología de los huevos, larvas o quistes de las muestras estudiadas (Young KH, Bullock SL, Melvin DM, Spruill CL citados por Maco Flores Vicente et al, 2002)

Concentración de quistes por flotación con sulfato de zinc

También llamado método de Faust.

Se basa en que los quistes y/o huevos de los parásitos flotan en la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya densidad es 1180 g/cm3. Es útil para la búsqueda de quistes y/o huevos de parásitos y excepcionalmente se observan larvas. Se recomienda controlar la densidad del sulfato de zinc y usar agua filtrada para el lavado previo de la muestra (2).

METODOLOGIA

CONCENTRACION DE QUISTES POR EL METODO FORMOL-ETER (MCEF)

CONCENTRACION DE QUISTES POR FLOTACION CON SULFATO DE ZINC (ZnSO4)

RESULTADOS

Concentración de quistes por el método formol-éter

En el primer portaobjetos sin tinción yodada no se observaron formas morfológicas de ningún tipo.

En el segundo portaobjetos con solución yodada, se observaron oocistos de Cryptosporidium spp., reconocidos por su tamaño pequeño (4-6&µm) y la presencia de gránulos negros en el interior de los organismos.