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Análisis y evaluación Fitoquímica de los metabolitos secundarios



  1. Resumen
  2. Introducción
  3. Generalidades
  4. Aspectos
    etnobotánicas
  5. Taxonomía
  6. Descripción
    botánica
  7. Antecedentes
  8. Materiales y métodos
  9. Resultados y
    discusión
  10. Conclusiones
  11. Referencias
    bibliográficas

Resumen

Vismia ferruginea (Clusiaceae) o
Punta de Lanza es una planta nativa de América tropical,
que es empleada en medicina tradicional como analgésico Y
como incienso en fiestas religiosas, también es
aprovechada en carpintería y Construcción. Sobre la
familia Clusiaceae se puede decir que presenta
xantonas, benzofenonas, cumarinas y flavonoides; pocos son
los estudios Fotoquímicas de Vismia ferruginea,
pero Álvarez (2008) estableció el poder
Antioxidante de sus extractos. El presente estudio se realizo con
el propósito de Evaluar a través de pruebas
Fotoquímicas preliminares (Reacciones de
Precipitación y coloración o gota a gota, y
pruebas cromatografías) la Identificación de los
principales metabolitos secundarios de Vismia
ferruginea
, con posible acción
farmacológica entre otras; para ello se preparo un
Extracto alcohólico por maceración, en donde a
través de la aplicación de Diferentes pruebas,
ensayos y cromatografías de capa delgada (TLC) se
determino la presencia o ausencia de los metabolitos de
interés. en ese orden se obtuvieron resultados positivos
para presencia de azucares reductores, polifenoles, taninos,
terpenos, flavonoides, cardiotónicos, lactonas terpenicas;
y pruebas negativas para la presencia de cumarinas,
alcaloides, antraquinonas, iridoides, saponinas, azucares
no reductores.

Las pruebas Cromatograficas reiteraron los
resultados de los ensayos gota a gota y además Indicaron
la no presencia de antocianinas en el extracto. Como
conclusión queda la necesidad de realizar estudios de
actividad biológica y de presencia de metabolitos
secundarios en otros órganos de la planta y con
otros extractos.

Palabras clave: Vismia
ferruginea
, Etnobotánica, extracto etanolico,
Metabolitos Secundarios.

Introducción

La exploración de plantas
medicinales enmarcada dentro de la investigación
etnobotánica como una vía segura, rápida y
adecuada para encontrar nuevos medicamentos, ha adquirido gran
importancia en el mundo moderno, para enfrentar los grandes
problemas de la salud, especialmente cuando el hombre se
encuentra sorprendido e indefenso como lo estuvo en la primera
década del siglo XX, con nuevas o reconocidas enfermedades
infecciosas y gran cantidad de patógenos resistentes a
principios activos efectivamente utilizados como los
antibióticos (Forero-Pinto).Existen numerosos ejemplos de
drogas que se han desarrollado a partir de plantas utilizadas en
la medicina tradicional (Desmarchelier et al, 1995).
Vismia es un género de plantas perteneciente a la
familia Clusiaceae. Como la mayoría de los miembros de
Clusiaceae, las especies de este género contienen
xanthonas.

Las especies del genero Vismia son
árboles y arbustos de amplia distribución; se
encuentran principalmente en las regiones tropicales y
subtropicales de América del Sur y Central, aunque algunas
pocas especies también se hallan en África y Asia
(Botta et al.).

Estas especies han sido empleadas
abundantemente alrededor del mundo en la medicina tradicional
para el tratamiento de algunas enfermedades, particularmente el
látex producido por diferentes especies, tales como V.
augusta
, V. confertiflora, V. dealbata,
V. baccifera ssp. ferruginea y V. guianensis
entre otras, se han usado para el tratamiento de heridas y
ulceraciones infectadas, enfermedades fúngicas de
la piel, herpes en los labios, como purgante y febrifugo,
entre otras (Cárdenas y López, 1987; Nagem y
Oliveira, 1988; Fuller et al., 1999 y Van Andel,
2000).

Este estudio se realizó con el
objetivo identificar los principales metabolitos secundarios de
Vismia ferruginea, con posible acción
farmacológica entre otras.

Generalidades

Vismia Ferruginea

pertenece a la familia Clusiaceae, esta
familia se caracteriza por tener hojas simples, opuestas,
enteras, sin estípulas, la mayoría posee
látex blanco o amarillo. Vismia tiene savia anaranjada y
muchos nervios laterales finos y paralelos
(Buitrón, 1989)

Esta familia comprende unas 1200 especies
en una cincuentena de géneros.

Son por lo general árboles y
arbustos con savia lechosa y frutos en capsula (Maguire,
2000)

Algunos géneros importantes
son

Clusia,

Tovomitopsis,

Chrysoclamis (UTPI).

Aspectos
etnobotánicas

Es una especie utilizada en
carpintería y la corteza, que es fuerte, se ha usado para
techar casas. Forma, dentro de los bosques, asociaciones puras,
porque es altamente re generable. De acuerdo a Mahecha, 1983,
"las hojas de este árbol no dejan crecer otro tipo de
vegetación y es atacado por un gusano con bandas negras
rojizas", que defolia totalmente y cuyas picaduras son muy
dolorosas.

Los Yaneshas, que son una etnia de la selva
amazónica peruana, tienen usos específicos para
esta planta, la llaman Mareñets que significa uta
de agua, ellos antes de dormir utilizan el látex
anaranjado encima de la parte afectada.

Una vez que esté bien pegado lo
dejan hasta que este se desprenda por sí solo.
Además de esto recomiendan seguir una dieta sin pescado
además de usar sal ni comer cosas calientes (Ramuesh,
sf)

Además de estos usos medicinales en
algunas regiones usan el látex de la planta como incienso
en fiestas religiosas; estas personas cosechan los cúmulos
de resina que se endurecen en los troncos. Las raíces y la
corteza de Vismia guineensis es utilizada para
enfermedades en la piel (Gunasekera et al., 1977).

Igualmente esta planta es usada como
colorante (Echavarría, 1987), las partes que de la planta
que se usan para este fin son las hojas, de las cuales obtienen
los colores como Amarillo, amarillo encendido, amarillo oscuro,
verde oscuro y verde claro.

Según el Centro Nacional de
Investigación de Café, en Colombia, Vismia
ferruginea

es nativa de América tropical, forma
asociaciones dentro del bosque y en centro y sur América
se encuentran aproximadamente 40 spp. Del
género.

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Taxonomía

La familia Clusiaceae fue dividida en 2
subfamilias: Clusioideae (subfamilia típica) e
Hypericoideae. Esta última familia a menudo es tratada
como familia Hypericaceae. La subfamilia Hypericoideae es
más común en zonas templadas y la subfamilia
Clusioideae se centra en zonas tropicales.

Sin embargo las últimas
clasificaciones dividen a la familia de una manera más
fina. La siguiente taxonomía sigue sobre todo el de
Stevens (1980):

Reino: Plantae

Filo: Magnoliophyta

Clase: Magnoliopsida

Orden: Theales

Familia: Clusiaceae

Subfamilia:
Hypericoididae

Tribu: Vismieae

Género: Vismia

Especie: Vismia
ferruginea

Descripción
botánica

Árbol de tronco cuadrado con
ritidoma, ramas con indumento café oscuro, hojas simples,
opuestas de peciolo puberulo, limbo ovado lanceolado, de 12 – 15
cm. de largo, por 7 – 10 de ancho, puberulo café en el
envés, con puntos negros, haz glabros, con las nervaduras
cubiertas de pequeños tricomas blanquecinos. Las yemas y
parte terminal de las ramas están recubiertas de un
indumento café oscuro.

Flores blancas, pequeñas en
inflorescencias terminales y subterminales.

CARACTERES DISTINTIVOS

Árbol de 10-15 m.

Corteza densamente fisurada.

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HOJAS

Monografias.comMonografias.comMonografias.comFollaje de tonalidad verde anaranjada.
simples, opuestas, enteras, sin estípulas

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FLORES

Monografias.comFlores blancas y
pequeñas

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FRUTOS

Monografias.comMonografias.comMonografias.comFrutos parecidos a tomaticos de 15
milímetros de diámetro, con abundantes
semillas.

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OTROS CARACTERES

Monografias.comMonografias.comMonografias.comMonografias.comMonografias.comMonografias.comMonografias.comMonografias.comLátex anaranjado, ramas y
envés de las hojas cubiertos con indumento
ferruginoso.

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Antecedentes

Los metabolitos secundarios producidos por
plantas constituye una fuente de sustancias bioactivas. Hoy en
día los científicos están interesados en
este tipo de metabolitos, además que ha aumentado la
búsqueda de nuevas drogas de origen vegetal. Las plantas
de la familia Clusiaceae son conocidas como buenas fuentes de
este tipo de compuestos. En Camerún muchos metabolitos
secundarios han sido aislados de numerosas plantas de la familia
Clusiaceae, entre los cuales se pueden citar las xantonas,
benzofenonas, cumarinas y flavonoides (Nkengfack et al. 2002;
Ouahouo et al., 2004; Komguem et al.,2005).

La presencia de Xantonas, es de gran
importancia, ya que estas poseen una actividad antidepresiva y
antituberculosa.

Además de poseer acción
antimicrobiano, antiviral y cardiotónico (Hostettmann and
Wagner, 1977; Suzuki

et al., 1980, 1981; Kitanov and Blinova,
1987).

Estudios recientes en frutos de Vismia, han
establecido el potencial antioxidante de los extractos de
Vismia ferruginea, Vismia baccifera, y se cree que esta
actividad antioxidante está asociada con las
características químicas de los metabolitos
encontrados en estas plantas (Álvarez, 2008).

Materiales y
métodos

Material Vegetal

El material fue obtenido de hojas frescas
recolectadas de plantas de Vismia Ferruginea. La planta
fue suministrada por el docente Héctor Esquivel (Herbario
Toli – Universidad del Tolima) y colectada en el barrio el Salado
de la ciudad de Ibagué, en las horas de la de la
mañana.

Preparación del Extracto
Vegetal

Las hojas fueron pesadas previamente y
secadas en estufa a 45º C en un tiempo de 24 -48 h, ya secas
fueron maceradas (1h), para preparar el extracto, como solvente
se utilizo etanol al 96 % (relación 1:10), con tiempo de
extracción de 24 horas a agotamiento (Murillo &
Méndez, 2008)

Se determinaron algunos parámetros e
índices de calidad del material

recolectado: % de humedad, % de cenizas y
sólidos totales, para el porcentaje de humedad se
utilizaron muestras vegetales frescas.

% de Humedad

Es la medida de cantidad de agua, puede
determinarse el porcentaje de esta en base seca o en base humeda
y representas una caracterisitica importante para cualquier
análisis que se le haga al solido (Hart, L y Fisher H.
1971).

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% de Cenizas

El termino de cenizas está definido
por el porcentaje en base seca, del cociente de la muestra
calcinada y la muestra seca (Badui, S. 1986).

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Pruebas para la determinación
rápida de metabolitos secundarios

(Ensayos gota a gota).

Para la identificación de los grupos
Fitoquímicos generales del extracto fueron realizados
algunos ensayos según la guía de Murillo &
Méndez (2008). El test para aminoácidos fue
realizado a través del reactivo ninhidrina.

Para carbohidratos se realizaron las
pruebas de Antrona; de Molisch; de Benedict; de Seliwanoff
(resorcinol), para azucares no reductores, y la prueba de yodo
para identificación de polisacáridos vegetales
(almidón).

Para la identificación de saponinas
se utilizaron: la prueba de la espuma. Para polifenoles se
utilizo: el ensayo con el reactivo de Folin-Ciocalteu (FC). Para
la determinación de taninos se aplicaron las pruebas de:
Cloruro ferrico, Prueba de gelatina-sal, Prueba para
diferenciación de taninos condensados e

hidrolizables, prueba especificas para
identificación de taninos hidrolizables y condensados
respectivamente.

Para la determinación de flavonoides
se utilizo:

Reacciones de precipitación y
coloración por Hidróxido de Sodio,
prueba de
Shinoda, ensayo con Zn/HCl, y OD 3UXHED GH
3HZ·V.

El test para fenilpropanoides
incluía las pruebas de:

Reacciones de precipitación y
coloración con el reactivo de Arnow. La
caracterización de

antraquinonas se realizo por la
reacción de Bornträger; y las pruebas para Terpenos /
Esteroides realizadas fueron: Reacción de
Lieberman-Burchard y la reacción de Salkowski.
Posteriormente otras pruebas fitoquímicas
incluían:

determinación de Iridoides la
reacción de precipitación y coloración por
reactivo de vainillina. Las pruebas de alcaloides incluían
reacciones de precipitación y coloración, con los
reactivos de Tanred, Drangerdoff, Mayer, Wagner, Erlich,
Reineckato de Amonio y Valser.

Además para comprobar presencia de
núcleos especiales, se realizo la prueba de Marquis, la
prueba

del Acido Nítrico, y el ensayo con
[H SO ]/K Cr O (3.0%).

Para la detección de
Glucósidos Cardiotonicos, las pruebas realizadas
incluyeron: Algunas reacciones de coloración y
precipitación como la del reactivo de Baljet, el reactivo
de Kedde, la prueba de Kéller-Killiani y la
reacción de Salkowsky, la reacción de
Lieberman-Burchard fue una prueba opcional. Para diferenciar el
anillo lactonico en relaciona las cumarinas, la detección
de esta última se hizo por la reacción de
precipitación y coloración con NaOH. La
última prueba de caracterización de metabolitos
secundarios, es la identificación de la presencia de
Lactonas Terpenicas, a través de EtOH-CH Cl y acetato de
plomo.

Evaluación Fitoquímica
Preliminar (Cromatografías)

La cromatografías utilizadas en este
informe, tanto las fases móvil, estacionaria y reveladores
fueron sugeridos por la guía elaborada por Murillo &
Méndez (2008). Para la identificación de
carbohidratos se utilizo: Cromatografía de capa delgada
(TLC), fase estacionaria: sílica gel G-60, fase
móvil: isopropanol, acetato de etilo, agua
(5:4:1), revelador: solución alcohólica
sulfúrica; para taninos o polifenoles en general:
Cromatografía de capa delgada (TLC), fase estacionaria:
sílica gel G-60, fase móvil: BAW 4:1:5, revelador:
Luz UV; para flavonoides: Cromatografía de capa delgada
(TLC), fase estacionaria: sílica gel GF254,
fase móvil: acetato de etilo, ácido formico,
ácido acético, agua (11:11:27), revelador: se
analizo después de asperjar con AlCl al 1% en etanol 3 con
observación al UV; además se realizo
cromatografía de capa delgada en papel, con fase
móvil: BAW (4:1:5) y de revelador vapores de amoniaco;
para fenilpropanoides:

Cromatografía de capa delgada (TLC),
fase estacionaria:

sílica gel G-60, fase móvil:
n-hexano-cloroformo 3:2, revelador: vainillina al 1% en H SO2 al
5%; la evaluación de antraquinonas fue por:
Cromatografía de capa delgada (TLC), fase estacionaria:
sílica gel G-60, fase móvil: acetato de etilo 8:2,
n-propanol, acetato de etilo, agua (40:40:30), revelador: UV-365
nm; y por ultimo para terpenos y esteroides se
utilizo: Cromatografía de capa delgada (TLC), fase
estacionaria: sílica gel G-60, fase
móvil: 2,4 dinitrofenilhidracina, éter de
petróleo, revelador: Lieberman-Burchard.

Para alcaloides: Cromatografía de
capa delgada (TLC), fase estacionaria:

Sílica gel G-60,

Fase móvil:

CHCl -AcOEt.3 (8:2), revelador: reactivo de
Dragendorff.

Lss glucósidos cardiotónicos
fueron detectadas por:

Cromatografía de capa delgada (TLC),
fase estacionaria: sílica gel G-60, fase móvil:
Acetato de etilo: metanol: agua. (100:13.5:10), Revelador:
reactivo de Bajlet a luz UV 365 nm, Para las cumarinsa fueron
detectadas por:

Cromatografía de capa delgada (TLC),
fase estacionaria: sílica gel G-60, fase
móvil: Tolueno: éter (1:1, saturado con
ácido acético al 10%), revelador:a luz
UV 365 nm. Las lactonas terpenicas fueron identificadas
por. Cromatografía de capa delgada (TLC),
fase estacionaria: sílica gel G-60, fase móvil:
CHCl -3 acetona (90:10), revelador: vainillina al 1% en
ácido sulfúrico al 5%.

Resultados y
discusión

Los análisis de parámetros de
calidad nos mostró que las hojas de Vismia
ferruginea
, cuentan con un porcentaje de humedad del 98.48%,
de cenizas un 99.73 % y 1782.2423 p.p.m de sólidos
totales.

La determinación del contenido de
humedad indico la cantidad de agua involucrada en la
composición de los mismos. El contenido de humedad se
expresa generalmente como porcentaje, las cifras varían
entre 60-99% en los productos naturales. En los tejidos vegetales
y animales existe dos formas generales: agua libre y agua ligada,
como soluto o como solvente; en forma libre, formando hidratos o
como agua adsorbida. La determinación de humedad se
realizo por la determinación de la pérdida de masa
que sufre cuando se somete a una combinación tiempo ²
temperatura adecuada. El residuo que se obtuvo se conoce como
sólidos totales o materia seca.

Las cenizas son un término
analítico equivalente al residuo inorgánico que
queda después de quemar la materia orgánica;
representan el contenido mineral, es decir el conjunto de
nutrientes elementales que están presentes en determinada
muestra. El análisis de las cenizas se llevo a cabo por
incineración total de la muestra a temperaturas elevadas y
la por determinación de su masa (HULME, A.
1971).

Los resultados para las pruebas de
detección rápida de algunos metabolitos secundarios
indicaron presencia de algunos de ellos (tabla 1) los cuales
fueron confirmados por cromatografías de capa delgada, los
cuales se muestran en la tabla 2.

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Tabla 1. Análisis
Fitoquímico del extracto etanolico de hojas de Vismia
ferruginea

Para la prueba de carbohidratos reductores,
el resultado positivo nos indica que la planta deja libre un
grupo aldehído (maltosa y lactosa) (Thacker, J. 2002), las
pruebas de precipitación y coloración indicaron la
presencia de cetosas (fructosas) al evidenciar un color rojo
cereza, en el caso de azucares no reductores, el resultado
negativo nos indica que no tienen un grupo aldehído libre
(sacarosa).

La prueba de Saponinas nos arrogo un
resultado negativo, indicando que la planta no usa este
metabolito para defensa en las hojas, sin embargo no asegura que
no la presente ya que puede encontrarse en otras partes como lo
es la semilla, la corteza o el tallo (Hostettman, K., Marston, A.
1995).

El resultado fue positivo para la prueba de
polifenoles, y la coloración azul intensa indico fenoles
en alta cantidad, lo cual se puede deber a que estos compuestos
están íntimamente relacionados con la actividad de
repelencia por las plantas a poblaciones de insectos,
(Álvarez V. 2010) y al ser las hojas el

blanco más común, es
lógico que estos metabolitos sean empleados en defensa
química.

La prueba positiva para presencia de
taninos condensados indica, que estos compuestos son utilizados
en la defensa química ya que gracias a su capacidad de
precipitar proteínas, podrían servir como
antinutricionales ante el ataque de predadores.

Esta acción estaría
relacionada con la impalatabilidad que provocan los taninos como
también la disminución de la digestibilidad de las
proteínas dietarías (Álvarez 2010). Los
taninos encontrados fueron de tipo catecol.Monografias.comMonografias.com

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Tabla Nº 2: Pruebas
cromatograficas para identificación de metabolitos
químicos principales del

extracto alcohólico de hojas de
V. ferruginea

La presencia de flavonoides fue positiva
para el extracto, una coloración rojo cereza indico
flavonoides de tipo dihidroflavonoles, precursores directos de
flavandioles y flavonoles, lo que indica que son usados por la
planta como mecanismos de defensa, y atracción de
polinizadoresen algunas plantas.

La presencia de fenilpropanoides se debe a
que estos compuestos participan en la defensa química de
la planta, no previniendo el ataque sino resistiéndolo, se
generan al ser las hojas atacadas por virus o bacterias en las
heridas que dejan los predadores.

La prueba de Iridoides fue negativa, tal
vez porque la V. ferruginea presenta otro tipo de
compuestos que actúan como agentes tóxicos contra
agentes fitopatogenos, como hongos y bacterias.

Al no poseer iridoides, los
fenilpropanoides que si están presentes (en las hojas) en
V. ferruginea, cumplen la función de defensa
química.

En cuanto a las pruebas para esteroides y
terpenos, las diferentes reacciones de precipitación y
coloración evidenciaron la presencia de esteroides,
formación de una interfase distinguió los
carotenoides de otros pigmentos, resultados que fueron
confirmados por cromatografía (Tabla Nº 3) los cuales
no fueron del todo específicos ya que las manchas solo nos
indica presencia o no de estos compuestos pero no que tipo de
terpeno y/o esteroides

Las pruebas hechas para la detección
de alcaloides arrojaron resultados negativos); lo cual puede
deberse a la distribución basipetala de los metabolitos
secundarios en el género Lantana (Weckerle et al. 2004).
Estas pruebas fueron concluyentes, evidenciado por los reactivos
de Drangerdoff y Mayer, pruebas cuya coloración nos mostro
una concentración poco significativa de alcaloides en el
extracto etanolico de hojas de V. ferruginea.

La presencia de Cardiotónicos fue
positiva para algunas pruebas de coloración, evidenciando
presencia de de cardenolios y el núcleo esferoidal,
confirmada con la cromatografía, siendo los
cardiotónicos los encargados de conferir a la planta un
potencial medicinal como agente anticancerígeno y
según Tamargo 1971 los mismos son fármacos que
potencian la fuerza de contracción del
corazón.

Las cumarinas están relacionadas con
la defensa química de la planta ya que presenta efectos
antibacterianos, sedantes y analgésicos (Álvarez V.
2010), que podrían ser útiles para repeler
insectos, este no es el metabolito usado por la planta estudiada
ya que las pruebas fueron negativas.

Conclusiones

Con el objetivo de realizar la
identificación de los principales metabolitos secundarios
en Vismia ferruginea o Punta de Lanza, se inicio este
estudio y con los resultados obtenidos, la primera
conclusión es que se deben hacer pruebas de actividad
biológica, más precisamente actividad antioxidante
debido a la

presencia de Polifenoles y Flavonoides. La
presencia de terpenos simplemente nos indica los terpenos de
cadena más larga y se hace necesario realizar pruebas
sobre monoterpenos e isopreno, debido a la contribución de
los mismos en la formación de ozono troposférico y
todos los problemas que esto acarrea.

Aunque algunas pruebas arrojaron resultados
negativos se necesitan hacer más estudios sobre otras
partes de la planta como semilla, flor y fruto, donde la
composición de metabolitos secundarios puede ser
distinta.

Es muy probable que en otros órganos
de Vismia ferruginea hallemos cumarinas, que no fueron
encontradas en el presente estudio, pero la literatura del genero
Vismia reporta que son características del
mismo.

Referencias
bibliográficas

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Autor:

Karen Gonzalez Lozano

21 años

Estudiante de biología

Fecha de realización 2 de mayo de
2010

Categoría: fitoquimica

Tatiana Toro Sanchez

22 años

Estudiante de biología

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