Angiogénesis en lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal (página 2)

Materiales y métodos

Las biopsias de (n=23) pacientes, con diagnóstico de displasia leve (DL, n=5),
moderada (DM, n=6), severa (DS, n=6) y carcinomas espinocelulares
(CA, n=6), fueron obtenidas del Archivo del
Laboratorio de
Histopatología "Pedro Tinoco" de la Facultad de
Odontología de la Universidad
Central de Venezuela. En
ningún caso los pacientes recibieron tratamiento previo,
ni se confirmó la presencia de metástasis. Las
características clínicas e histopatológicas
y la distribución de las biopsias se muestran en
la Tabla 1.

Tabla N° 1.
Características clínicas-histopatológicas de
las lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal

RA: reborde alveolar; PA: paladar; CA:
carrillo.

Las secciones de 4 mm de grosor correspondientes a las
distintas lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal se
procesaron mediante la técnica modificada de la
inmunoperoxidasa indirecta15 descrita previamente por Tonino y
col.14. Brevemente, las secciones fueron desparafinadas y
rehidratadas. Posterior al bloqueo de la peroxidasa
endógena se realizaron las incubaciones con la soluciones del
kit LSAB universal (labelled streptavidin biotin preoxidase) de
tres componentes (Dako CA, USA). Para la determinación de
la DV se utilizó el anticuerpo policlonal de humano
anti-Factor VIII/ vWF (Dako, CA, USA) en una dilución
1:200 en tampón fosfato salino, pH 7,4. La
inmunoreacción se detectó con el cromógeno
3-amino-9-etil carbazol (Sigma). El contrate y el montaje se
realizó con hematoxilina de Meyer y gelatina glicerinada,
respectivamente.

Determinación de la Densidad
Vascular.

La DV se determinó de acuerdo al método de
Weidner16 descrito previamente por Tonino y col.14. En las
secciones las áreas de mayor DV fueron observadas a una
magnificación de 100X. La cuantificación de los
vasos sanguíneos y de células
positivas al anticuerpo anti-Factor VIII/ vWF se realizó
en cinco campos de 250X de aumento (área de 0.639 mm2).
Los valores se
expresaron como la media ± la desviación
estándar del número de vasos sanguíneos por
mm2.

Análisis Estadístico.

La DV fue comparada entre los distintos grupos de
lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal mediante la
prueba no-paramétrica de Mann-Whitney con un nivel de
significancia de p=0,05.

Resultados

En los distintos grupos de lesiones estudiadas se
observó un incremento en la DV. La DV fue menor en el
grupo DL
(12.70 ± 3.04), con un progresivo aumento en el grupo de
DM (21.62 ± 1.99), y más significativo aún
en el grupo de DS (59.50 ± 8.73) y CA (60.62 ±
8.74), Tabla 2. La expresión del FVIII/vWF en las DL y DM
se observó en los vasos sanguíneos (Figs. 1 y 2),
en tanto que en las DS y los CA la expresión de FVIII/vWF
se observó no sólo en los vasos sanguíneos,
sino también en las células aisladas o grupos de
células con apariencia de brotes vasculares (Figs. 3 y
4).

Fig. 1.
Expresión del FVIII/vWF en un vaso sanguíneo de una
lesión de displasia leve. Barra= 10 mm.

Fig. 2.
Expresión del FVIII/vWF en los vasos sanguíneos de
una lesión de displasia moderada. Barra= 10 mm.

Fig. 3.
Expresión del FVIII/vWF en los vasos sanguíneos y
brotes vasculares (flechas) de una lesión de displasia
severa. Barra= 10 mm.

Fig. 4.
Expresión del FVIII/vWF en los vasos sanguíneos de
un carcinoma espinocelular. Barra= 10 mm.

Tabla N° 2 .
Densidad vascular en las lesiones premalignas y malignas de la
mucosa bucal

La prueba no-paramétrica de Mann-Whitney
reveló que existe diferencia estadísticamente
significativa en la DV entre las DL y las DS (p=0.004) y las DL y
los CA (p=0.004), así como también se observaron
diferencias estadísticamente significativas en la DV entre
las DM y las DS (p=0.002) y entre las DM y los CA (p=0.004). Sin
embargo, no se encontraron diferencias significativas en la DV
entre las DL y las DM (p=0.052) ni entre las DS y los CA
(p=0.699).

Discusión

Las propiedades angiogénicas se han descrito en
una variedad de condiciones premalignas a nivel de los tejidos que
incluyen, la laringe, la vejiga, las mamas, el páncreas y
el tracto gastrointestinal. 6, 17, 18, 19,20 Se ha sugerido que
la angiogénesis resulta de las alteraciones en el balance
entre los factores estimuladores, que incluyen al factor de
crecimiento endotelial vascular (VEGF), el factor de crecimiento
fibroblástico (FGF), la angiogenina, el factor de necrosis
tumoral (TNF-a) entre los más relevantes y los factores
inhibidores como angiostatina, talidomida, endostatina y otros21
presentes en el microambiente local del tumor. Adicionalmente a
los cambios en la microvasculatura, se ha sugerido que las
alteraciones en la expresión de factores reguladores de
proliferación celular y apoptosis generan efectos
acumulativos que podrían determinar el potencial de
crecimiento y el desarrollo
tumoral.22 En las lesiones premalignas y malignas de la mucosa
bucal se encontró un incremento en la DV con el grado de
displasia hasta el de carcinoma, similar a lo descrito en otros
estudios7,8,11,13 que establecen una asociación entre el
incremento de la vascularización y el proceso de
angiogénesis en apoyo a la actividad proliferativa y de
transformación de las células de la
mucosa.

Las diferencias en la DV entre las lesiones de DL y DS,
DL y CA, DM y DS y DM y CA sugieren un aumento significativo con
la progresión de la displasia moderada a la severa, en
tanto que la DV en esta última es similar a la observada
en los CA. Nuestros resultados indican que el aumento de la
vascularización, como una medida de la respuesta
angiogénica, posiblemente constituye un evento temprano en
el desarrollo de la carcinogénesis bucal.

Agradecimientos

Licenciado José Torres, por su
colaboración en el análisis estadístico

Este trabajo fue
financiado por el C.D.C.H. de la UCV (N|°
03.159.2001).

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Floribel Cedeño*; Paola
Tonino**

*Profesor
Asistente. Cátedra de Histología, Facultad de Odontología,
Universidad Central de Venezuela.
** Profesor Asistente. Centro de Microscopía Electrónica, Facultad de Ciencias,
Universidad Central de Venezuela.