Monografias.com > Sin categoría
Descargar Imprimir Comentar Ver trabajos relacionados

Sensibilidad tisular a la insulina antes, durante y después de un ayuno en ovejas prepúberes (página 2)



Partes: 1, 2

INTRODUCCIÓN

Variada evidencia sugiere que durante estados de
restricción alimenticia, tanto natural como experimental,
la fertilidad de las hembras de los mamíferos disminuye, debido
fundamentalmente a una disminución en la secreción
de LH (Cameron y col., 1993). Se considera que la causa de la
menor secreción de LH es una menor actividad del llamado
centro hipotalámico generador de pulsos de GnRH, el cual
mediante mecanismos aún no bien caracterizados, recibe
información sobre el estatus
metabólico del animal para finalmente readecuar la
secreción de GnRH.

Se ha propuesto a la insulina como una posible
señal metabólica que informaría al
hipotálamo del estatus metabólico del animal
(Steiner y col., 1983). De acuerdo a esta proposición, la
disminución en la insulina plasmática sería
reconocida por el hipotálamo, reduciendo la
secreción de GnRH. Por el contrario, un aumento en la
insulina estimularía la secreción de GnRH. Sin
embargo, resultados contradictorios obtenidos sobre el efecto de
la insulina en la secreción de LH, han hecho
difícil la aceptación de esta hormona como
señal metabólica que modula la secreción de
GnRH (Hileman y col., 1993; Miller y col., 1995; Williams y col.,
1996; Miller y col., 1998. Un aspecto que no se ha analizado en
los estudios sobre la función de
la insulina como señal metabólica es la
sensibilidad tisular a la insulina en períodos de balance
energético negativo, como es el ayuno.

El objetivo del
presente trabajo fue
caracterizar la sensibilidad tisular a la insulina mediante el
cálculo
del índice de sensibilidad a la insulina (ISI) antes,
durante y después de un ayuno en ovejas prepúberes.
Además, se determinó el efecto de la insulina sobre
la secreción aguda de LH y las concentraciones
plasmáticas basales de insulina, glucosa, LH y
cortisol en respuesta al ayuno.

MATERIAL Y MÉTODOS

Procedimientos generales. Se
utilizaron 6 ovejas Suffolk down, de 16 semanas de edad,
provenientes de la Unidad de Producción Ovina de la Facultad de
Agronomía de la Universidad de
Concepción, destetadas a los 3 meses de edad y mantenidas
en pradera natural y suplementadas con alimento peletizado. Dos
días antes de los experimentos, las
borregas se trasladaron a la sala de experimentación,
procediendo a cateterizar ambas venas yugulares bajo anestesia
local con catéteres Mediziv G 18, de acuerdo a lo descrito
anteriormente, (Recabarren y col., 1995). Las borregas se
colocaron en bretes individuales con libre acceso al alimento
peletizado y agua hasta el
momento de los experimentos. Se procedió a realizar
muestreos sanguíneos de acostumbramiento el día
anterior al inicio del estudio. El ayuno consistió en el
retiro de la alimentación por un
lapso de 8 días, permitiendo solo el brebaje, y se
inició inmediatamente después de finalizado el
muestreo
sanguíneo del primer experimento de determinación
de la sensibilidad a la insulina (día 0). La
realimentación se inició al término del
muestreo sanguíneo correspondiente al día 8 de
ayuno.

Determinación del índice de
sensibilidad a la insulina (ISI).
Antes del inicio del ayuno
(día 0), el día 1, el día 8, y 24 horas
después de terminado el ayuno (día 9) se
procedió a realizar el estudio de la sensibilidad a la
insulina. Para ello, se administró por medio de uno de los
catéteres intrayugulares 0,1UI de insulina humana (Elli
Lilly) por kilo de peso vivo, disueltas en 2 mL de suero salino.
Se colectaron muestras de sangre con el
catéter intrayugular contralateral (3 mL) a los 15, -5, 0,
3,5,7,10, 15 y 20 minutos post-administracion de insulina , las
que se repartieron en tubos que contenían heparina y
fluoruro al 3% para la medición de glucosa, y en tubos con
heparina para la medición de hormonas. Se
tomaron muestras adicionales a los 40 y 60 min para la
medición de LH, insulina y cortisol.

El ISI se calculó de acuerdo a Grulet y col.
(1993) con la siguiente formula:
ISI=G0-G15/G0, donde G0 es la concentración
plasmática de glucosa al tiempo 3 min,
y G15 es la concentración de glucosa al tiempo 15 min
determinada por el análisis de regresión de las
concentraciones plasmáticas de glucosa.

Medición de hormonas. LH. Las muestras de
los tiempos 0,10,20,40 y 60 min se ocuparon para la
medición de LH por radioimmunoensayo (RIA) de acuerdo a
procedimientos
descritos anteriormente (Recabarren y col, 1996). Todas las
muestras se procesaron en un RIA. El coeficiente de
variación intraensayo fue de 5%, el límite de
sensibilidad fue de 0.1 ng/mL, definido como el 90% del buffer
control. Las
muestras del tiempo 0 sirvieron además para la
medición de la LH basal de los días 0,1,8 y 9 del
experimento.

Insulina. Las muestras de los tiempos
5,0,3,5,7,10,15,20 y 60 min se utilizaron para la medición
de insulina por RIA (DPC, USA). El coeficiente intraensayo fue
del 3%, con un nivel de sensibilidad de 5 uUI/mL, definido como
el 90% del buffer control. Las muestras de los tiempos 5 y 0 se
ocuparon en la medición de las concentraciones basales de
insulina de los días 0,1,8 y 9.

Cortisol. Las muestras del tiempo 15 se ocuparon
para la cuantificacion del cortisol basal, por RIA (DPC, USA). El
coeficiente intraensayo fue del 6%, con un nivel de sensibilidad
de 1 ug/dL, definido como el 90% del buffer control.

Medición de glucosa. La glucosa se
cuantificó por el método de
la glucosa oxidasa usando reactivos comerciales (Wiener Lab), con
un coeficiente de variación intraensayo del 2%. Las
muestras 5 y 0 sirvieron para determinar la glucosa basal de cada
uno de los días del experimento.

Análisis estadístico. Las
concentraciones plasmáticas de glucosa desde los 0 a los
15 min se analizaron por análisis de regresión
simple para la determinación de la
concentración de glucosa del minuto 15, necesaria para el
cálculo del ISI. Además, las concentraciones de
glucosa desde el tiempo 0 al tiempo 20 min se analizaron por
análisis de varianza (ANDEVA) para muestras repetidas y
comparación de los promedios con el test de Newman
Keuls para determinar el efecto de la insulina sobre la glucosa
plasmática. Las concentraciones de LH desde el tiempo 0 al
tiempo 60 se analizaron con ANDEVA para muestras repetidas y
comparación de los promedios con el test de Newman Keuls
para determinar el efecto de la insulina sobre la
secreción aguda de LH. Las concentraciones basales de LH,
insulina, glucosa y de cortisol de los 4 días del
experimento, se analizaron también con ANDEVA para
muestras repetidas y comparación de los promedios con el
test de Newman Keuls para definir el efecto del ayuno sobre las
concentraciones basales de esos 4 parámetros. El ISI se
analizó con el test no paramétrico de Kruskal
Wallis. Se consideró para todos los análisis un
P<0,05 como estadísticamente significativo. Los
datos se
presentan como promedio ± error estándar rango y
mediana.

RESULTADOS

La administración endovenosa de insulina
disminuyó significativamente la glucosa plasmática
el día 0 (P<0,02) y el día 1 de ayuno
(P<0,001). La primera caída significativa con respecto
al tiempo 0 se produjo a los 10 min. Las concentraciones
plasmáticas de glucosa disminuyeron levemente en respuesta
a la insulina el día 8 de ayuno y 24 horas después
de finalizado el ayuno (día 9) (figura 1). La diferencia
en el efecto de la insulina sobre la glucosa plasmática,
de acuerdo al día del ayuno, se relaciona con el ISI. El
día 0, el ISI presentó un rango de 0,11 a 0,37 y el
día 1, de 0,21 a 0,28, con una mediana de 0,23 y 0,23
respectivamente. Por el contrario, el ISI descendió
significativamente el día 8, con un rango de 0,36 a 0,22 y
una mediana de 0,02 (P<0,05), el cual no se modificó el
día 9: rango de 0,02 a 0,28, y una mediana de
0,09.

La administración de insulina exógena
aumentó significativamente las concentraciones
plasmáticas de la hormona, con un máximo a los 3
min, en cada uno de los días del ensayo. Las
concentraciones descendieron paulatinamente a partir de ese
momento, hasta los 60 min. A los 60 min, las concentraciones de
insulina no se diferenciaron de las concentraciones al tiempo 0
min.

Figura 1. Concentraciones plasmáticas de glucosa
(g/L, promedio ± eem) en respuesta a un bolo de insulina
(0,1 UI/kg PV) antes (día 0), durante el día 1 y 8
de ayuno y 24 horas despues de finalizado el ayuno (día
9), en ovejas prepúberes de 16 semanas de edad.

Plasma glucose concentrations (g/L, mean ± sem)
in response to a bolus administration of insulin (0.1IU/Kg BW)
before (day 0), during day 1 and day 8 of fasting and 24 hours
after the end of fasting (day 9) in ewe lambs of 16 weeks of
age.

La administración de insulina no modificó
las concentraciones plasmáticas de LH el día 0, 1 y
8 de ayuno, mientras que el día 9, las concentraciones
plasmáticas del tiempo 60 min fueron mayores que las del
tiempo 0 (P<0,05).

El cuadro 1 muestra las
concentraciones basales de glucosa, insulina, LH y cortisol
antes, durante y después del ayuno en ovejas
prepúberes de 16 semanas de edad. Las concentraciones
basales de glucosa disminuyeron desde el día 0 al
día 8. Las concentraciones plasmáticas de LH
descendieron con el ayuno, sin recuperarse con la
realimentación (P<0,05), mientras que la insulina
tendió a disminuir (P<0,08) desde el día 0 al
día 8, aumentando ligeramente después de un
día de realimentación (día 9). Las
concentraciones plasmáticas basales de cortisol no se
modificaron con el ayuno.

CUADRO 1. Concentraciones plasmáticas basales
de glucosa, insulina, LH y cortisol antes (día 0), durante
(días 1 y 8) y 24 horas (día 9) después de
un ayuno de 8 días en ovejas prepúberes de 16
semanas de edad.

DISCUSIÓN

Existen varios test que miden la sensibilidad tisular a
la insulina. Uno de ellos es el llamado test de tolerancia a la
insulina, el cual presenta una alta correlación con otros
métodos
más engorrosos, caros y con una alta ocupación en
mano de obra (Grulet y col., 1993; Sir-Petermann y col., 1997).
Los resultados del presente trabajo muestran que es un test
altamente sensible para discriminar los efectos que tiene el
ayuno sobre la sensibilidad tisular a la insulina. Los resultados
muestran que la sensibilidad a la insulina disminuye
drásticamente con el ayuno y que después de 24
horas de realimentación, la sensibilidad no se recupera
totalmente. Esto significaría que durante el ayuno se
desarrolla un estado de
resistencia
insulínica. La resistencia insulínica se define
como el estado en
el cual concentraciones normales de insulina producen una
respuesta biológica atenuada (Krentz y Nattrass, 1996).
Esto se corrobora con los efectos de la insulina sobre la glucosa
plasmática en los días 8 y 9 del experimento,
cuando la insulina exógena, es prácticamente
ineficaz en reducir la glucosa plasmática. En ovejas se ha
demostrado que durante la preñez (Petterson y col., 1993),
y la lactancia
(Vernon y col., 1990) se presenta resistencia insulínica,
debido fundamentalmente a una reducción en la sensibilidad
a la insulina en tejidos periféricos, principalmente tejido muscular
y adiposo. La resistencia insulínica sería producto de
alteraciones en el número de receptores a insulina o en
defectos postreceptor (Sasaki, 1990). Durante el ayuno
tendría como objetivo evitar el almacenamiento de
glucosa en los tejidos sensibles a la insulina y para facilitar
la gluconeogénesis (Yki-Jarvinen, 1993), y de esa forma
mantener los niveles de glucosa necesarios para el metabolismo de
los tejidos sensibles a las deficiencias de glucosa. Esta
resistencia insulínica fisiológica sería un
eficaz mecanismo que permitiría mantener la homeostasis de
la glucosa plasmática en períodos críticos
como es el ayuno. La homeostasis de la glucosa está bajo
un control estricto entre el aporte y la utilización de la
glucosa. La insulina juega un rol clave en este proceso
inhibiendo la producción hepática y estimulando la
captación de glucosa por los tejidos sensibles, en
particular el tejido muscular esquelético y el tejido
adiposo. La hipoinsulinemia y la resistencia que se origina
durante el ayuno tendría, entonces, como objetivo
facilitar las acciones
fisiológicas de las hormonas contraregulatorias como ser
glucagon, catecolaminas, cortisol y GH, con el fin de mantener
los niveles plasmáticos de glucosa.

La hipótesis que postula a la insulina como
señal metabólica sostiene que aumentos de insulina
plasmática tendrían una acción
estimulante sobre la secreción de GnRH/LH. La
administración de insulina en el presente trabajo no
tuvo efecto sobre la secreción aguda de LH. Estos
resultados concuerdan con los de Hileman y col (1993), quienes al
administrar insulina endovenosa e intracerebroventricular no
observaron modificaciones en la secreción pulsátil
de LH en ovejas prepúberes con alimentacion normal o con
restricción alimenticia. Otros estudios en ovejas y ratas
han mostrado una disminución en la secreción aguda
de LH, pero en esos casos también podría atribuirse
la reducción en la concentración plasmática
de LH a la hipoglicemia que sigue a la administración de
insulina (Clarke y col., 1990; Goubillon y Thalabard, 1996).
Estos efectos de la insulina contrastan con los resultados
encontrados en los estudios de Miller y col. (1995,1998), quienes
demostraron que los aumentos de insulina plasmática con
dietas ricas en lupino (que provee altas cantidades de
energía digestible y proteína), se observan
después de varios días y son paralelos en aumentos
en la secreción de LH. Los resultados de Miller y col.
(1995) concuerdan con los de Downing y col. (1995) y de Catalano
y col. (1996), en los cuales la alimentación rica en
energía aumenta los niveles de insulina y esta hormona se
relaciona a su vez con la tasa ovulatoria. Es probable entonces
que las acciones estimuladoras de la insulina sobre la
secreción de GnRH/LH sean de largo plazo y producto de una
hiperinsulinemia sostenida en el tiempo. Esta situación
podría señalar más eficazmente el estado
metabólico del animal a las neuronas GnRH, que el
monitoreo de los cambios agudos de insulina
plasmática.

Se ha postulado que el ayuno es un tipo de estrés,
que al igual que con otros tipos de estrés, al activarse
el eje adrenal, conduciría a un aumento en la
liberación de CRH, ACTH y cortisol, repercutiendo en el
eje hipotálamo-hipófisis-gónada como
consecuencia de la inhibición de la secreción de
GnRH por la CRH (Petraglia y col., 1987). En la rata existe
evidencia que respalda esta hipótesis (Maeda y
col., 1994), sin embargo, en el presente estudio así como
en otros de nuestro laboratorio
(Recabarren y col., 1999), las concentraciones basales de
cortisol durante el ayuno no se modificaron, lo cual sugiere que
el ayuno de ocho días no sería un estrés en
la oveja prepúber y que el cortisol no estaría
mediando los efectos del ayuno en la secreción de LH.
Estos resultados concuerdan con los de L'Anson y col. (1994),
quienes descartan que el cortisol influya en la
disminución de la secreción de GnRH/LH durante
períodos de restricción alimenticia en la oveja
prepúber. Por otro lado, estudios en hombres y mujeres
(Cameron y col., 1991; Olson y col., 1995) y monos (Schreihofer y
col., 1993) reafirman la noción de que la
restricción alimenticia y el ayuno no implican reacciones
de estrés que inhiban la secreción de GnRH/LH.
Estos resultados reafirman la hipotesis de que señales
metabólicas serían más importantes que la
activación del eje adrenal en la regulación de la
secreción de GnRH/LH en estados de ayuno y probablemente
en otros estados de balance energético negativo en la
oveja prepúber.

En resumen, un ayuno de 8 días en ovejas
prepúberes de 16 semanas de edad disminuye la sensibilidad
tisular a la insulina. Las concentraciones basales de glucosa y
LH, disminuyeron, las de insulina tendieron a disminuir; por el
contrario, las concentraciones plasmáticas de cortisol no
se modificaron con el ayuno. La administración de insulina
no afectó la secreción de LH lo que sugirere que
esta hormona no influye sobre la secreción aguda de LH,
sin embargo, no se puede descartar que la dosis de insulina no
sea suficiente, que la duración de la estimulación
sea muy corta o que estén ausentes otras señales
metabólicas que en forma concomitante influyan en la
secreción de LH. El ayuno no activaría el eje
adrenal, lo que sugiere que el ayuno no induciría
estrés en la oveja prepúber.

AGRADECIMIENTOS

Los autores expresan sus agradecientos a los Drs. Gordon
E. Niswender y Leo E. Reichert Jr, y a la NIDDK de Estados Unidos
por materiales
para los radioimmunoensayos de LH. Al Dr. Marcelo
Calvillán, del Laboratorio de Endocrinología y
Metabolismo de la Facultad de Medicina
Occidente de la Universidad de Chile por su colaboración
en el cálculo del ISI.

BIBLIOGRAFIA

CAMERON, J.L., T. WELTZIN, C. McCONAHA, D.L. HELMREICH,
W.H. KAYE. 1991. Suppression of reproductive axis activity in men
undergoing a 48 hour fast. J. Clin. Endocrinol Metab. 73:
35-41.

CAMERON, J.L., D.L. HELMREICH, D.A. SCHREIHOFER. 1993.
Modulation of reproductive hormone secretion by nutritional
intake:stress signals
versus metabolic signals. Hum Reprod 8 (suppl 2):
162-167.

CATALANO, R., L. SIRHAN, S. RECABARREN, B. MUÑOZ,
H. MANTEROLA. 1995. "Flushing" en merino precoz.II. Efecto del
nivel de energía y proteína sobre concentraciones
plasmáticas de insulina, FSH y urea. Av. Prod Anim
20: 165-178.

CLARKE, I.J., R.J.E. HORTON, B.W. DOUGHTON. 1990.
Investigation of the mechanism by which insulin-induced
hypoglycemia decreases luteinizing hormone secretion in
ovariectomized ewes. Endocrinology 127: 1470-1476.
        [ ]

DOWNING, J.A., J. JOSS, P. CONNEL, R.J. SCARAMUZZI.
1995. Ovulation rate and the concentrations of gonadotrophic and
metabolic hormones in ewes feed lupin grain. J. Reprod
Fert
103: 137-145.

GOUBILLON, M.L, J.C. THALABARD. 1996. Insulin-induced
hypoglycemia decreases luteinizing hormone secretion in the
castrated male rat: Involvement of opiate peptides.
Neuroendocrinology 64: 49-56.
        [
Medline
]

GRULET, H, V. DURLACH, A.C. HECART, A. GROSS, M.
LEUTENEGGER. 1993. Study of the rate of early glucose
disappearance following insulin injection: insulin sensitivity
index. Diab. Res .Clin. Pract 20: 201-207.

HILEMAN, S.M, K.K. SCHILLO, J.B. HALL. 1993. Effects of
acute, intracerebroventricular administration of insulin on serum
concentrations of luteinizing hormone, insulin and glucose in
ovariectomized lambs during restricted and adlibitum feed intake.
Biol. Reprod. 48: 117-124.

KRENTZ, A.J., M. NATTRASS. 1996. Insulin resistance: a
multifaceted metabolic syndrome. Insights gained using a low-dose
insulin infusion technique. Diabet. Med. 13:
30-39

L'ANSON, H., E.H. QUINT, I.R. WOOD, B.G. ENGLAND, D.L.
FOSTER. 1994. Adrenal axis and hypogonadotropism in the
growth-restricted female lamb. Biol. Reprod. 50:
137-143.

MAEDA, K.I., F.R.A. CAGAMPANG, C.W. COEN, H. TSUKAMURA.
1994. Involvement of the catecholaminergic input to the
paraventricular nucleus and of corticotropin-releasing hormone in
the fasting-induced suppression of luteinizing hormone release in
female rats. Endocrinology 134: 1718-1722.
        [
Medline
]

MILLER, D.W., D. BLACHE, G.B. MARTIN 1995. The role of
intracerebral insulin in the effect of nutrition on gonadotrophin
secretion in mature male sheep. J. Endocrinol.
147:321-329
        [
Medline
]

MILLER, D.W., D. BLACHE, R. BOUKHLIQ, J.D. CURLEWIS,
G.B. MARTIN. 1998. Central metabolic messengers and the effects
of nutrition on gonadotrophin secretion in sheep. J. Reprod.
Fert.
112: 347:356.

OLSON, B.R., T. CARTLEDGE, N. SEBRING, R. DEFENSOR, L.
NIEMAN. 1995. Short-term fasting affect luteinizing hormone
secretory dinamics but not reproductive function in normal-weight
sedentary women. J. Clin. Endocrinol. Metab. 80:
1187-1193.

PETRAGLIA, F., S. SUTTON, W. VALE, P. PLOTSKY.1987.
Corticotropin-releasing factor decreases plasma luteinizing
hormone levels in female rats by inhibiting
gonadotropin-releasing hormone release into hypophysial-portal
circulation. Endocrinology 120: 1083-1088.
        [
Medline
]

PETTERSON, J.A., F.R. DUNSHEA, R.A. EHRHARDT, A.W. BELL.
1993. Pregnancy and undernutrition alter glucose metabolic
responses to insulin in sheep. J. Nutr. 123: 1286-1295
        [
Medline
]

RECABARREN, S.E. A. URRUCELQUI, M. ROBBIANO, A. LOBOS,
P. ORELLANA, J.PARILO. 1995. Efecto de la infusión
endovenosa de L-arginina y L-ornitina sobre la secreción
de hormona del crecimiento en ovejas prepúberes. Arch.
Med.Vet.
27: 99-104.

RECABARREN, S.E, H. ESCOBAR, A. LOBOS, M.P. RECABARREN,
J. PARILO. 1996. Luteinizing hormone pulse frequency is increased
by arginine infusion in prepubertal sheep. Exp. Clin. Endo.
Diabetes
104: 74-79.

RECABARREN, S.E., A. LOBOS, E. ABALOS, C.
ARRIAGADA.1999. Effect of naloxone infusions on the pulsatile LH
secretion, insulin, and cortisol plasma concentrations in fasted
ewe lambs. Exp. Clin. Endocrinol Diabetes 107: suppl. 1,
S-48. Abstract P012. 43rd Symposium of the German
Society of Endocrinology, Kiel, March 10-13, 1999.

SASAKI, S. 1990. Mechanism of insulin resistance in the
post receptor events in sheep: 3-O-methylglucose transport in
ovine adipocites. Horm. Metab. Res. 22:
457-461.

SIR-PETERMANN, T., T. CASTILLO, M. CALVILLAN, S.
MUÑOZ, G. LOPEZ. 1997. Evaluación
de la sensibilidad tisular a la insulina en mujeres normales,
obesas y obesas hiperandrogénicas. Rev. Méd.
Chile.
125: 977-985.

STEINER, R.A., J.L. CAMERON, T.H. McNEILL, D.K. CLIFTON,
W.J. BREMNER. 1983. Metabolic signals for the onset of puberty.
En: Neuroendocrine aspects of reproduction. R.L. Norman (ed.) Pp.
183-227, Academic Press, Nueva York.

VERNON, R.G., A. FAULKNER, W.W. HAY Jr., D.T. CALVERT,
D.J. FLINT. 1990. Insulin resistance of hindlimb tissues in vivo
in lactating sheep. Biochem. J. 270: 783-786

YKI-JARVINEN, H. 1993. Action of insulin on glucose
metabolism in vivo. Bailliers Clin Endocrinol Metab. 7:
903-927.

S. E. RECABARREN, Biol., M.S.; A. LOBOS, MV, C.
SCHNEIDER, MV.; J. COX, MV.; J. A. PARILO, Ing
Agr.

Laboratorio de Fisiología y Endocrinología Animal,
Facultad de Medicina Veterinaria,
Universidad de Concepción,
Campus Chillán, CHILE.

Partes: 1, 2
 Página anterior Volver al principio del trabajoPágina siguiente 

Nota al lector: es posible que esta página no contenga todos los componentes del trabajo original (pies de página, avanzadas formulas matemáticas, esquemas o tablas complejas, etc.). Recuerde que para ver el trabajo en su versión original completa, puede descargarlo desde el menú superior.

Todos los documentos disponibles en este sitio expresan los puntos de vista de sus respectivos autores y no de Monografias.com. El objetivo de Monografias.com es poner el conocimiento a disposición de toda su comunidad. Queda bajo la responsabilidad de cada lector el eventual uso que se le de a esta información. Asimismo, es obligatoria la cita del autor del contenido y de Monografias.com como fuentes de información.

Categorias
Newsletter