Monografias.com > Sin categoría
Descargar Imprimir Comentar Ver trabajos relacionados

Análogo de GnRH disminuye la secreción de hormona folículo estimulante (FSH) en ovejas prepúberes (página 2)



Partes: 1, 2

 

Estudio de pulsatilidad de FSH. El estudio de
pulsatilidad de FSH se realizó a las 20 (previo a la
primera aplicación del análogo), 26 y 30 semanas de
edad. Para ello se colectaron muestras de sangre (1 ml), a
través del catéter yugular implantado
anteriormente, a intervalos de 10 minutos por un período
de 5 horas (10:00-15:00 horas).

Procesamiento de las muestras de sangre. Las
muestras de sangre se depositaron en tubos heparinizados (10 UI
de heparina/1 ml de sangre), posteriormente se centrifugaron a
1.000 x g durante 15 minutos. El plasma se separó y se
congeló a –20°C, hasta el posterior análisis de las concentraciones
plasmáticas de FSH por radioinmunoensayo (RIA).

Radioinmunoensayo de FSH. El RIA de FSH se
realizó con materiales
donados por la NIADDK (USA) siguiendo el protocolo
sugerido por A. F. Parlow de acuerdo a lo descrito anteriormente
(Recabarren y col 2003). Brevemente, se incubaron 200
µl de FSH ovina
estándar (oFSHRP) en un rango de 0,02 a 25,6 ng / tubo o
200 µl de
muestra
desconocida con 100 µl de FSH iodada (oFSH I-1 AFP 5679 C) y
100 µl de
antisuero contra FSH ovina (AFP C 5228113) por 24 horas a
temperatura
ambiente.
Luego se agregaron 100 µl de segundo antisuero y se
continuó con la incubación por 48 horas.
Posteriormente los tubos se centrifugaron a 1.000 x g por 40
minutos a 4°C, se eliminó el sobrenadante y se
cuantificó la radioactividad del pellet en un
gammaespectrómetro LKB. La concentración
mínima detectable correspondiente al 90% del buffer
control fue de
0,2 ng/ml. El coeficiente de variación intra e interensayo
fue de 8 y 13%, con muestras controles en el rango de 1-2
ng/ml.

Determinación de las características
de la secreción pulsátil de FSH.
Las
concentraciones plasmáticas de FSH de cada oveja se
analizaron en forma individual, utilizando el programa
computacional Cluster, desarrollado por Veldhuis y Johnson
(1986), siguiendo el mismo procedimiento
descrito en Recabarren y col (2003). Las siguientes variables se
obtuvieron con el programa Cluster: promedio transversal
(ng/mL/5h), frecuencia de pulsos (número de pulsos
significativos/5h), amplitud de pulsos (ng/mL) y nadir
(ng/mL).

Análisis estadístico. Los
datos
obtenidos del programa Cluster se evaluaron con análisis
de varianza para muestras repetidas con el tratamiento como
factor principal y las edades como el factor de
repetición, utilizando el programa computacional GbStat
v6.5. Los promedios se compararon con el test de Newman
Keuls. Se consideró un p< 0,05 como
estadísticamente significativo. Los datos se presentan
como promedio ± error estándar.

RESULTADOS

En la figura 1 se muestran las características de
la secreción pulsátil de FSH en borregas controles
y en borregas tratadas con el análogo de GnRH. En las
borregas controles, el promedio transversal (ng/mL/5h), la
frecuencia (número de pulsos significativos/5h), la
amplitud de los pulsos (ng/mL) y el nadir (ng/mL) no cambiaron
con la edad. En las borregas tratadas con el análogo de
GnRH, el promedio transversal de la concentración
plasmática de FSH y la amplitud de pulsos disminuyeron
significativamente entre el inicio del experimento y las 26 y las
30 semanas de edad (p<0,05), no así la frecuencia de
pulsos. Al comparar entre ambos grupos, se
observó que la concentración promedio de FSH fue
menor en las borregas tratadas con el análogo de GnRH que
en las controles de 26 y 30 semanas de edad: 2,42± 0,6
versus 0,34 ± 0,1 (p<0,05) y 3,81 ± 1,2 versus
0,36 ± 0,1 (p<0,05) respectivamente. La amplitud de
pulsos de FSH fue menor en las borregas tratadas con el
análogo de GnRH que en las controles de 26 y 30 semanas de
edad: 4,79 ± 1,1 versus 0,38 ± 0,1 (p<0,05) y
6,38 ± 1,7 versus 0,48 ± 0,1 (p<0,05)
respectivamente. Individualmente, se reconoció que en una
de cinco borregas tratadas con el análogo de GnRH, las
concentraciones plasmáticas de FSH estuvieron por debajo
el nivel de sensibilidad del RIA, y se le asignó ese
valor con
fines estadísticos. A las 30 semanas solo 1 borrega
presenta dos "mini-pulsos" de FSH en 5 horas. En la figura 2 se
muestran los perfiles individuales de dos borregas
representativas de ambos grupos. Con la excepción de una
borrega del grupo control
(borrega número 20), las concentraciones
plasmáticas de FSH siguen un perfil irregular y sin una
forma definida. En la figura 3 se muestra el promedio ±
error estándar de ambos grupos de borregas. En ambas
figuras es claramente discernible el efecto del análogo de
GnRH en la supresión de la secreción de
FSH.

Figura 1.
Características de la secreción
pulsátil de FSH, promedio transversal: ng/mL/5h;
frecuencia: número de pulsos/ 5h, amplitud de
pulsos (ng/mL) y nadir (ng/m.) en borregas controles y en
borregas tratadas con un análogo agonista de GnRH
(Decapeptyl®). El análogo se
inyectó intramuscularmente a las 20, 24 y 28
semanas de edad. El estudio de pulsatilidad de FSH se
realizó a las 20 semanas (antes de la
aplicación del Decapeptyl®), a las
26 y 30 semanas de edad.

Characteristics of the pulsatile FSH secretion
horizontal mean: ng/mL/5h; frequency: number of
significative pulses/5h; amplitude of pulses: ng/mL;
nadir: ng/mL) in control ewe lambs and in ewe lambs
treated with an agonist analogue of GnRH
(Decapeptyl®). The analogue was injected
intramuscularly at 20, 24 and 28 weeks of age. The FSH
pulsatile study was performed at 20 (before Decapeptyl
injection), 26 and 30 weeks of age.

  

Figura 2. Perfil de las
concentraciones plasmáticas de FSH en dos borregas
controles representativas de 20 (A), 26 (B) y 30 (C)
semanas de edad y en dos borregas tratadas con un
análogo agonista de GnRH
(Decapeptyl®) de las mismas edades. El
análogo se inyectó a las 20, a las 24 y a
las 28 semanas de edad.

Profile of plasma FSH concentrations in 2
representative control ewe lambs of 20 (A), 26 (B) and 30
(C) weeks of age and 2 representative ewe lambs of the
same ages treated with a GnRH agonist analogue
(Decapeptyl®). The analogue was injected
at 20, 24 and 28 weeks of age.

  

Figura 3.
Concentraciones plasmáticas promedio en borregas
controles (panel superior) y en borregas de 20, 26 y 30
semanas de edad tratadas con un análogo agonista
de GnRH (Decapeptyl).

Mean plasma FSH concentrations in control ewe
lambs (upper panel) and in ewe lambs of 20, 26 and 30
weeks of age treated with a GnRH agonist analogue
(Decapeptyl®).

DISCUSIÓN

Los resultados del presente trabajo
muestran que la secreción de FSH no se modifica entre las
20 y 30 semanas de edad en las borregas controles, período
del desarrollo
sexual de la oveja que se considera prepuberal. Por el contrario,
en las borregas tratadas con el agonista de GnRH, la
secreción de FSH se redujo significativamente, sugiriendo
la dependencia entre la secreción de FSH y la
estimulación con GnRH. Los resultados obtenidos en las
borregas controles coinciden con aquellos obtenidos de otro
estudio realizado en nuestro laboratorio,
en el cual se comparó la secreción de FSH entre
borregas controles y borregas sometidas a restricción
alimenticia (Recabarren y col 2003), y con los de Padmanabhan y
col (1992), en los cuales no se observó un aumento
significativo en la secreción pulsátil de FSH
durante el período prepuberal en borregas con crecimiento
normal. Estos resultados sugieren que la FSH tendría un
rol secundario en el inicio de la pubertad de la
oveja. Sin embargo, la demostración de varias isoformas de
FSH ha llevado a postular que la FSH bioactiva sería un
factor determinante en los eventos
endocrinos que anteceden a la pubertad y que la FSH
inmunorreactiva no sería un buen indicador de los cambios
conducentes a la pubertad. McNatty y col (1998) compararon las
concentraciones de FSH inmunorreactiva (medida por RIA) de
aquella bioactiva desde el nacimiento al año de vida en
ovejas, encontrando que en las hembras ovinas prepúberes
la relación B/I de FSH se acerca a uno hasta la fecha
promedio de inicio de la pubertad, pero que después la FSH
inmunorreactiva desciende hasta el límite del ensayo, lo
cual sugiere que la FSH bioactiva tampoco es un factor
determinante en el inicio de la pubertad en la oveja.

Este estudio permite respaldar experimentalmente el uso
del análogo agonista de GnRH Decapeptyl como una valiosa
herramienta en estudios de la secreción de LH y FSH en
ovinos, ya que su acción
bloqueadora en la secreción de LH se ha demostrado en
trabajos anteriores (Recabarren y col 2002), así como en
otros animales de
experimentación (Recabarren y col 1991). La ventaja de
este recurso farmacológico es la frecuencia de uso. Basta
una inyección intramuscular cada cuatro semanas para
mantener bloqueada la secreción de gonadotropinas. El uso
de antagonistas de receptores de GnRH no parece ser eficaz en
disminuir la secreción de FSH, al menos en ovejas adultas.
La aplicación de un antagonista de receptores de GnRH
tiene poco efecto sobre la secreción aguda de FSH,
mientras que suprime rápidamente la secreción de
LH, calculándose que toma alrededor de 11 días con
administración diaria del antagonista por
cuatro días en provocar la disminución en la
secreción de FSH (Campbell y col 1998). En vacas la
aplicación de un antagonista de GnRH (Antarelix) no
modificó el promedio de las concentraciones
plasmáticas ni la frecuencia de los pulsos de FSH
(Schneider y col 2002), por lo que se podría esperar que
el uso de antagonistas no entregue resultados concluyentes sobre
la secreción de FSH en ovejas prepúberes.
Más aún, el antagonista de GnRH no impidió
que un pulso de GnRH exógena estimulara la
secreción de LH. Basándose en este antecedente y
para evitar el efecto estimulador inicial de la acción del
agonista de GnRH, los estudios de pulsatilidad se efectuaron dos
semanas más tarde de su aplicación. La base
fisiológica del efecto de agonistas de GnRH en la
supresión de la secreción de gonadotropinas
estaría en la desensibilización del gonadotropo que
sigue a una estimulación más potente que la
obtenida con el neuropéptido endógeno y que
comprende pérdida de receptores, y disminución de
la síntesis
de mRNA del receptor de GnRH (Wu y col 1994, Viscarra y col 1997,
Horvath y col 2002) y bloqueo de la síntesis de las
cadenas beta de la LH y FSH (Aspden y col 1996, Turzillo y col
1998). En ratas se ha demostrado que el Decapeptyl disminuye la
expresión del gen para los receptores de GnRH in
vivo
(Lerrant y col 1995). Estudios similares con Decapeptyl
no se han realizado en ovinos; sin embargo, la
administración de leuprolide, un análogo
agonista de la GnRH, disminuyó el mRNA del receptor de
GnRH en hipófisis de ovejas (Wu y col 1994). La administración de Decapeptyl redujo en
más de un 50% la concentración del mRNA de la
cadena beta de la FSH y LH en ratas (Lerrant y col 1995), lo cual
explicaría la disminución significativa en las
concentraciones plasmáticas de FSH observada en el
presente estudio.

El análisis de la secreción de FSH
utilizando metodologías complejas como el muestreo directo
de la sangre del seno cavernoso (Clarke y col 2002) o de la
sangre portal que conduce a la hipófisis anterior
(Padmanabhan y col 1997, 2003) en ovejas adultas ovariectomizadas
muestra que la secreción de FSH es episódica y que
algunos pulsos son sincrónicos con LH. En el estudio de
Clarke y col (2002) un 13% de los pulsos son sincrónicos
con los de LH, mientras que en el estudio de Padmanabhan y col
(2003) se reconoció un 50% de concordancia. Estos
resultados sugieren que un número variable de pulsos no
depende de la secreción previa de GnRH y que otros
mecanismos pueden dar cuenta de esta secreción no GnRH
dependiente. En el presente estudio es difícil definir si
cada pulso de FSH es la consecuencia de la secreción
previa de un pulso de GnRH, ya que estos se presentan en forma
irregular y aleatoria y sin un ritmo episódico, lo cual
concuerda con resultados de Pincus y col (1998) en ovejas y
mujeres. Este patrón de secreción es diferente del
que presenta la hormona luteinizante y la GnRH con pulsos
episódicos bien definidos. Sin embargo, el descenso
significativo en las concentraciones promedio y en la amplitud de
pulsos de FSH en las borregas tratadas con el agonista de GnRH
sugiere fuertemente que la secreción de FSH es dependiente
de GnRH.

En resumen, los resultados del presente estudio sugieren
que la secreción de FSH es dependiente de la
estimulación por GnRH en ovejas
prepúberes.

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen al Dr A. Parlow y a la NIADDK de
Estados Unidos
por su generosa donación de reactivos para el RIA de FSH
de oveja.

REFERENCIAS

Aspden WJ, A Rao, PT Scott, IJ Clarke, TE Trigg, J
Walsh, MJ D’Occhio. 1996. Direct actions of the luteinizing
hormone-releasing hormone agonist, deslorelin, on anterior
pituitary contents of luteinizing hormone (LH) and
follicle-stimulating hormone (FSH), LH and FSH subunit messenger
ribonucleic acid, and plasma concentrations of LH and FSH in
castrated male cattle. Biol Reprod 55, 386-
392.

Campbell, BK, GE Mann, AS McNeilly, DT Baird. 1990. The
pattern of ovarian inhibin, estradiol and androstenedione
secretion during the estrous cycle in the ewe.
Endocrinology 127, 227-235.

Campbell BK, H Dobson, RJ Scaramuzzi. 1998. Ovarian
function in ewes made hypogonadal with GnRH-antagonist and
stimulated with FSH in the presence or absence of low amplitude
LH pulses. J Endocrinol 156, 213-222.

Campbell BK, EE Telfer, R Webb, DT Baird. 2004. Evidence
of a role for follicle-stimulating hormone in controlling the
rate of preantral follicle development in sheep.
Endocrinology 145, 18870-1879.

Carroll RS, PM Kowash, JA Lofgren, RH Schwall, WW Chin.
1991. In vivo regulation of FSH synthesis by inhibin and activin.
Endocrinology 129, 3299-3304.

Clarke I, L Moore, J Veldhuis. 2002. Intensive direct
cavernous sinus sampling identifies high-frequency, nearly random
patterns of FSH secretion in ovariectomized ewes: combined
appraisal by RIA and bioassay. Endocrinology 143,
117-129.

Fortune JE, J Sirois, AM Turzillo, M Lavoir. 1991.
Follicle selection in domestic ruminants. J Reprod
Fertil
43, 187- 198.

Haisenleder DJ, AC Dalkin, GA Ortolano, JC Marshall, MA
Shupnik. 1991. A pulsatile gonadotropin-releasing hormone
stimulus is required to increase transcription of the
gonadotropin subunit genes: evidence for differential regulation
of transcription by pulse frequency in vivo.
Endocrinology 128, 509-517.

Horvath JE, AM Bajo, AV Schally, M Kovacs, F Herbert, K
Groot. 2002. Effects of long-term treatment with the luteinizing
hormone-releasing hormone (LHRH) agonist Decapeptyl and the LHRH
antagonist Cetrorelix on the levels of pituitary LHRH receptors
and their mRNA expression in rats. Proc Nat Acad Sci 99,
15048-15053.

Kaiser UB, PM Conn, WW Chin. 1997. Studies of
gonadotropin-releasing hormone (GnRH) action using GnRH
receptor-expressing pituitary cell lines. Endocr Rev 18,
46-70.

Kilgour RJ, C Pisselet, MP Dubois, M Courot. 1998.
Ram lambs need
FSH for normal testicular growth, Sertoli cell numbers and onset
of spermatogenesis. Reprod Nutr Dev 38, 539-
550.

Kraus S, Z Naor, R Seger. 2001. Intracelullar signaling
pathways mediated by the gonadotropin-releasing hormone (GnRH)
receptor. Arch Med Res 32, 499-509.

Lerrant Y, M L Kottler, F Bergametti, M Moumni, J
Blumberg-Tick, R Counis. 1995. Expression of
gonadotropinreleasing hormone (GnRH) receptor gene is altered by
GnRH agonist desensitisation in a manner similar to that of
gonadotropin beta-subunit genes in normal and castrated rat
pituitary. Endocrinology 136, 2803-2808.

Leung K, AH Kaynard, BP Negrini, KE Kim, RA Mauer, TD
Landefeld. 1987. Regulation of gonadotropin subunit gene
expression by GnRH pulse frequency in ewes. Mol
Endocrinol
1, 724-728.

Lumpkin MD, JK McDonald, WK Samson, SM McCann. 1989.
Destruction of the dorsal anterior hypothalamic region suppresses
pulsatile release of follicle stimulating hormone but not
luteinizing hormone. Neuroendocrinology 50,
229-235.

Marubayashi U, WH Yu, SM McCann. 1999. Median eminence
lesions reveal separate hypothalamic control of pulsatile
follicle-stimulating hormone and luteinizing hormone release.
Proc Soc Exp Biol Med 220,139-146.

McCann SM, S Karanth, CA Mastronardi, W Les Dees, G
Childs, B Miller, S Sower, WH Yu. 2001. Control of gonadotropin
secretion by follicle-stimulating, hormonereleasing factor,
luteinizing hormone-releasing hormone and leptin. Arch Med
Res
32, 476-485.

McNatty KP, KL Isaacs, L Gentle, L Berry, NL Hudson, W
Young, BJ Mcleod. 1998. Bioactive and immunoreactive FSH
concentrations in ewe and ram lambs over the first year of life.
Anim Reprod Sci 51, 155-166.

Molter-Gerard C, J Fontaine, S Guerin, C Taragnat. 1999.
Differential regulation of the gonadotropin storage pattern by
gonadotropin-releasing hormone pulse frequency in the ewe.
Biol Reprod 60, 1224-1230.

Naor Z. 1990. Signal transduction mechanisms of Ca2+
mobilizing hormones: the case of gonadotropin-releasing hormone.
Endoc Rev 11, 326-353.

Padmanabhan V, CD Mieher, M
Borondy, H I’anson, RI Wood, TD Landefeld, DL Foster, IZ
Beitins. 1992. Circulating bioactive follicle-stimulating hormone
and less acidic follicle-stimulating hormone isoforms increase
during experimental induction of puberty in the female lamb.
Endocrinology 131, 213-220.

Padmanabhan V, K Mcfadden, DT Mauger, FJ Karsh, A Rees
Midgley Jr. 1997. Neuroendocrine control of folliclestimulating
hormone (FSH) secretion. I. Direct evidence for separate episodic
and basal components of FSH secretion. Endocrinology
138, 424-432.

Padmanabhan V, MB Brown, GE Dahl, NP Evans, FJ Karsch,
DT Mauger, JD Neill, JD Van Cleeff. 2003. Neuroendocrine control
of follicle-stimulating hormone (FSH) secretion: III. Is there a
gonadotropin-releasing hormone-independent component of episodic
FSH secretion in ovariectomized and luteal phase ewes?
Endocrinology 144, 1380-1392.

Pincus SM, V Padmanabhan, W Lemon, J Randolph, A Rees
Midgley. 1998. Follicle-stimulating hormone is secreted more
irregularly than luteinizing hormone in both humans and sheep.
J Clin Invest 101, 1318-1324.

Recabarren SE, R Dittrich, W Jäger, L Wildt. 1991.
Luteinizing hormone immunoactivity and bioactivity in
ovariectomized rats treated with a long acting agonist of
luteinizing hormone releasing hormone. Hum Reprod 6,
928-930.

Recabarren SE, A Urrucelqui, M Robbiano, A Lobos, P
Orellana, J Parilo. 1995. Efecto de la infusión endovenosa
de L-arginina y L-ornitina sobre la secreción de hormona
del crecimiento en ovejas prepúberes. Arch Med
Vet
27, 99-104.

Recabarren SE, A Lobos, C Vilches, P Muñoz, T Sir
Petermann. 2002. Pulsatile leptin secretion is independent of LH
secretion in prepubertal sheep. Endocrine 17,
175-184.

Recabarren SE, Lobos A, Poblete O, Muñoz P,
Parilo J. 2003. Secreción pulsatil de la hormona
folículo estimulante (FSH) en ovejas prepúberes con
y sin restricción alimenticia. Arch Med Vet 35,
151-158.

Schneider F, A Bellmann, F Becker, S Bambang Poernomo, C
Rehfelt, G Nurnberg, W Kanitz. 2002. Gonadotropin release in
periovulatory heifers after GnRH analogs measured by two types of
immunoassays. Exp Clin Endocrinol Diabetes 110,
235-244.

Stojilkovic SS, KJ Catt. 1995. Novel aspects of
GnRH-induced intracellular signalling and secretion in pituitary
gonadotrophs. J Neuroendocrinol 7, 739-757.

Turzillo A.M, TE Nolan, TM Nett. 1998. Regulation of
gonadotropin-releasing hormone (GnRH) receptor gene expression in
sheep: Interaction of GnRH and estradiol. Endocrinology
139, 4890-4894.

Veldhuis JD, ML Johnson. 1986. Cluster analysis: a
simple, versatile, and robust algorithm for endocrine pulse
detection. Am J Physiol 250, E486-E493.

Viscarra JA, RP Wettemann, DT Braden, AM Turzillo, TM
Nett. 1997. Effect of gonadotropin-releasing hormone (gnRH) pulse
frequency on serum and pituitary concentrations of luteinizing
and follicle-stimulating hormone, GnRH receptors, and messenger
ribonucleic acid for gonadotropin subunits in cows.
Endocrinology 138, 594-601.

Wildt L, A Häusler, G Marshall, JS Hutchison, TM
Plant, PE Belchetz, E Knobil. 1981. Frequency and amplitude of
gonadotropin-releasing hormone stimulation and gonadotropin
secretion in the rhesus monkey. Endocrinology 109,
376-385.

Wu JC, SC Sealfon, WL Miller. 1994. Gonadal hormones and
gonadotropin-releasing hormone (GnRH) alter messenger ribonucleic
acid levels for GnRH receptors in sheep. Endocrinology
134, 1846-1850.

Yu WH, S Karanth, CA Mastronarde, S Sealfon, C Dean, WL
Dees, SM McCann. 2002. Lamprey GnRH-III acts on its putative
receptor via nitric oxide to release folliclestimulating hormone
specifically. Exp Biol Med (Maywood) 227,
786-793.

S E Recabarren , P Muñoz, A Lobos, C Vilches,
J Parilo.
Laboratorio de Fisiología y Endocrinología Animal,
Facultad de Medicina
Veterinaria,
Universidad de
Concepción, Chillán, Chile..

Partes: 1, 2
 Página anterior Volver al principio del trabajoPágina siguiente 

Nota al lector: es posible que esta página no contenga todos los componentes del trabajo original (pies de página, avanzadas formulas matemáticas, esquemas o tablas complejas, etc.). Recuerde que para ver el trabajo en su versión original completa, puede descargarlo desde el menú superior.

Todos los documentos disponibles en este sitio expresan los puntos de vista de sus respectivos autores y no de Monografias.com. El objetivo de Monografias.com es poner el conocimiento a disposición de toda su comunidad. Queda bajo la responsabilidad de cada lector el eventual uso que se le de a esta información. Asimismo, es obligatoria la cita del autor del contenido y de Monografias.com como fuentes de información.

Categorias
Newsletter