Efectos tóxicos de los insecticidas clorpirifos y teflutrina sobre la lombriz de tierra (Lumbricus terrestris L.) (página 2)

MATERIALES Y MÉTODOS

El ensayo se
realizó basándose en el protocolo de
la
Organización Internacional de Control
Biológico (IOBC) (Bieri, 1989) con algunas modificaciones
que se indican.

En la Universidad de
Buenos Aires,
Facultad de Agronomía, Buenos Aires, Argentina, se
recolectaron lombrices de la especie Lumbricus terrestris
L. en terrenos libres de plaguicidas. Se seleccionaron individuos
en estado
juvenil, con una biomasa superior a 1,5 g y sin clitelo. En la
sala de aislamiento, en oscuridad total, se preparó un
lumbricario en terrinas cerradas con una malla metálica
fina, diámetro de apertura de 1,2 mm. El sustrato de las
terrinas fue el suelo de donde se
extrajeron las lombrices del horizonte superficial, capa arable,
esterilizado con calor seco, y
mantenido con un contenido de humedad de 40 a 45%. Las lombrices
permanecieron cinco días para su aclimatación en el
sustrato, y se alimentaron con hojas secas de trébol
blanco (Trifolium repens L). Luego se seleccionaron por
tamaño a fin de lograr que el grupo de
individuos utilizados fuera homogéneo.

Se usaron como unidades experimentales embudos de Daniel
(Bieri, 1989) construidos de polietileno de alta densidad con un
diámetro de 12 cm y bordes verticales de 1 cm. En la parte
superior se colocó como tapa un aro de plástico y
una malla de alambre fino que permitió la entrada de
aire. El sustrato
se colocó hasta el borde superior del embudo y en el
extremo inferior se fijó un tubo de silicona de 30 cm de
longitud sellado con un tapón para eliminar el exceso de
agua. Como
modificación del protocolo IOBC, la base del embudo y el
tubo de silicona se protegieron con un tubo de polietileno negro
para asegurar la permanencia de las lombrices en la
oscuridad.

El embudo se llenó al ras con suelo suavemente
compactado. Con un barreno de metal de 3,5 mm de diámetro
se abrió un canal vertical en el centro del sustrato,
creando una madriguera continua desde la superficie del suelo
hasta el extremo final del embudo. Se colocaron 10 hojas de
trébol blanco sobre el suelo, secadas previamente en
estufa, para cada lombriz. Luego, cada uno de los tratamientos se
pulverizó sobre los embudos y se introdujo una lombriz en
cada unidad experimental, en la que permanecieron por 15
días hasta la finalización del ensayo. Para la
aplicación de los tratamientos se usó un
pulverizador manual logrando
una cobertura de 70 gotas cm-2. Las unidades
experimentales estaban instaladas en una sala de aislamiento en
oscuridad total y 12 a 15°C. Diariamente el sustrato se
regó con agua destilada mediante un aspersor manual,
manteniendo el suelo con aproximadamente 45% de
humedad.

Los tratamientos fueron: testigo sin tratar,
pulverización con agua destilada; cloroacetamida (97,37%)
30 mg producto
comercial (p.c.) L-1; clorpirifos (EC 48%) 5 L p.c.
ha-1 o 50 mg L-1; teflutrina (EC 5 %) 2 L
p.c. ha-1 o 20 mg L-1. La cloroacetamida es
recomendada en los protocolos de la
Organización para la Cooperación
Económica y Desarrollo
(OECD), la Organización para la Cooperación
Económica Europea (OEEC) y la IOBC como tratamiento
estándar en ensayos de
laboratorio,
por ser una sustancia con efectos letales cuantificables, y
porque a través de ensayos repetidos en el tiempo,
permite saber si hay cambios en la susceptibilidad de la población en estudio y caracterizar la
población de un lumbricario (OECD, 1984; OEEC, 1985;
Bieri, 1989).

Se usó un diseño
experimental completamente aleatorizado (DCA), con diez
repeticiones por tratamiento. Se analizaron las siguientes
variables: a)
Variación en el peso de las lombrices: se pesó cada
individuo en
una balanza de precisión, antes de ser introducido en los
embudos y después de finalizados los tratamientos. En el
tratamiento con cloroacetamida este parámetro no se
analizó, debido a la elevada mortalidad observada, lo que
imposibilitó la segunda medición del peso de un número
significativo de individuos; b) Actividad de los individuos
mediante el recuento diario de hojas "retiradas": se considera
que una hoja es "retirada" luego de finalizada la
incorporación en la madriguera (Bieri, 1989). A los siete
días las hojas retiradas fueron reemplazadas. Se
determinó un cuociente entre el número de hojas
retiradas y la cantidad de días que permaneció con
vida cada individuo; y c) Supervivencia de lombrices: en cada
inspección se evaluó el estado de
las lombrices, y se anotó el número de individuos
muertos, los que se retiraron junto con las unidades
experimentales. Los resultados se sometieron a ANDEVA (p = 0,05)
y a la prueba de Tukey (p = 0,05 y 0,01).

RESULTADOS Y
DISCUSIÓN

Las variaciones en el peso de las lombrices, en el
número de hojas retiradas y en la supervivencia de los
oligoquetos en los diferentes tratamientos del ensayo se
presentan en el Cuadro 1. Las variaciones en el peso de los
individuos durante el período en que fueron sometidos a
los tratamientos, mostraron que en todos los casos, las lombrices
aumentaron de peso, pero sin diferencias significativas entre el
testigo y los tratamientos con clorpirifos y teflutrina (F =
0,047; P = 0,927) (Cuadro 1).

Cuadro 1.
Variación de peso, actividad y supervivencia de lombrices,
Lumbricus terrestris L.
Table 1. Variation of weight, activity and survival of
earthworms, Lumbricus terrestris L.

1:
Número de datos = 10;
DE: desviación
estándar; CV%: coeficiente de
variación.
Cloroa.: cloroacetamida; Clorp.: clorpirifos; Teflu.: teflutrina.
S/d: sin datos, debido al reducido
número de individuos al finalizar el
ensayo.

El ANDEVA realizado sobre el número de hojas
retiradas por día indicó que no hubo diferencias
entre los tratamientos (F = 2,651; P = 0,069) (Cuadro
1).

La supervivencia de L. terrestris sólo se
vio afectada en el tratamiento con 30 mg L-1 de
cloroacetamida. El 80% de los individuos murió durante los
15 días de exposición
a este compuesto (F = 22,69; P = 0,004) (Cuadro 1). El test de Tukey
mostró que en el tratamiento con cloroacetamida se produjo
una mortalidad significativamente mayor que en los tratamientos
testigo, clorpirifos y teflutrina (Figura 1).

Figura 1.
Porcentaje medio de supervivencia de Lumbricus terrestris
L. durante 15 días de exposición a pesticidas.
Figure 1. Average survival percentage of Lumbricus
terrestris L. during 15 days of exposition to
pesticides.

Letras diferentes corresponden a medias
que difieren significativamente según prueba de Tukey (P =
0,05).

La concentración letal media (CL50) a
los 14 días para cloroacetamida en E. fetida se
encuentra entre 20 y 80 mg L-1 (OECD, 1984; OEEC,
1985), por otra parte Ma y Bodt (1993) determinaron que la
CL50 a los 14 días para E. fetida y
L. terrestris son similares. La dosis de cloroacetamida
utilizada en este ensayo corresponde aproximadamente a la
CL50, sin embargo, esta dosis produjo una mortalidad
muy superior en esta población, demostrando la alta
susceptibilidad de la población natural utilizada. Esta
susceptibilidad permaneció estable en el tiempo, ya que
tomando lombrices de esta población a intervalos regulares
de 30 días, durante 12 meses, se produjo un efecto de
mortalidad del 80 +/- 4%, por lo que consideramos que la
población de lombrices utilizada resulta apta para
realizar pruebas
comparables en el tiempo.

Por otro lado, si bien E. fetida ha sido
considerada como una especie ideal para pruebas de toxicidad
aguda de plaguicidas en los protocolos estándar (OECD,
1984; OEEC, 1985) por su fácil crianza y reproducción en cautiverio, puede a veces
no ser una especie ecológicamente representativa de la
fauna del suelo
(Ma y Bodt, 1993). L. terrestris cumpliría con el criterio
de representatividad debido a su abundancia e importancia en
suelos
agrícolas (Bostrom y Lofs-Holmin, 1982). Las poblaciones
de lombrices presentan una susceptibilidad diferente a
xenobióticos según su origen y condiciones de vida,
tal como se evidencia en este ensayo, lo que demuestra la
importancia de realizar experimentos con
organismos locales. Además, se deberá investigar en
el futuro qué sucede con lombrices adultas y con la
incorporación mecánica del insecticida clorpirifos al
suelo luego de la aplicación, para emular las condiciones
de aplicación reales.

CONCLUSIONES

En este estudio de laboratorio desarrollado con suelo
agrícola con lombrices colectadas en el campo se
estableció que los insecticidas clorpirifos y teflutrina,
en las dosis recomendadas para el control de los insectos del
suelo, no afecta la supervivencia de L. terrestris en
estado juvenil.

Además, estos insecticidas no disminuyeron la
actividad de las lombrices, incluyendo alimentación y
desplazamiento en busca de alimento, ni su crecimiento, expresado
como aumento de peso vivo.

El control de larvas de los insectos del suelo
Conoderus spp. y Diloboderus abderus con
clorpirifos (CE 48%) 5 L de producto comercial (p.c.)
ha-1 aplicado al suelo y con teflutrina (EC 5%) para
controlar Agrotis spp. a dosis de 2 L p.c. ha-1
no afectarían a la población de lombrices
jóvenes del suelo agrícola.

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Rosana Giménez1, Angela Della
Penna1 y Ezequiel
Odello2
1 Universidad de Buenos
Aires, Facultad de Agronomía, Avenida San Martín
4453, C.P.: C 1417 DES, Buenos Aires, Argentina.
2 Asesor independiente