Estudio morfológico y morfométrico del músculo oblicuo dorsal del perro (página 2)

MATERIAL Y MÉTODOS

Se han utilizado en este estudio seis perros sanos
adultos de raza pastor alemán de entre 40-50 kg de peso,
obtenidos del lazareto municipal donde fueron eutanasiados por
sobredosis anestésica, vía intravenosa, con
tiopental (Tiobarbital®) y que posteriormente
utilizamos para nuestra experiencia. Tras su sacrificio, se les
han extraído el globo ocular y estructuras
retrobulbares derechas, aislándose el musculus
obliquus dorsalis que es el único
músculo inervado por el nervio troclear.

De los músculos se seleccionó la
porción central del vientre muscular que fue bañada
en OCT embedding compound para congelación de tejidos (Tissue
Tek, Miles Sci. USA) y sumergida durante 30 segundos en
isopentano (2-metilbutano) enfriado en nitrógeno
líquido hasta –160 ºC aproximadamente (Dubowitz
y Brooke 1973). Se practicaron cortes transversales (10 μm),
seriados en un criostato a –20 ºC que fueron
almacenados sobre el portaobjetos a –80 ºC.
Posteriormente fueron teñidos por la técnica de
miosín adenosín trifosfatasa (m-ATPasa) tras
preincubación ácida (pH 4,6)
(Dubowitz y Brooke 1973). Estos cortes fueron digitalizados a
16x, con los que se reconstruyó la sección completa
obtenida del músculo. Con el software Sci Image
(1998 Scion corporation 82
Worman’s Mill Court
Suite H Frederick, Maryland
21703), sobre esta reconstrucción se
evaluó su área y se contó el número
total de las fibras existentes de cada tipo. Sobre las imágenes
digitalizadas, se procedió a determinar el área,
diámetro mayor y diámetro menor de las fibras
musculares existentes en el 20% de la superficie total del
músculo elegida en cuadros al azar: las oscuras (Tipo I) y
las claras (Tipo II). Con el programa Microsoft
Excel® se determinó, para cada
músculo y para cada tipo de fibra, su proporción,
así como su área y diámetro medio,
área ocupada por las fibras, área relativa de las
fibras respecto al área del músculo y densidad
(número de fibras por mm2). La superficie no
ocupada por fibras, formada fundamentalmente por grasa, tejido
conectivo, vasos y tejido nervioso, es el tejido
inespecífico intersticial. Para cada músculo y en
las variables que
procediera se calculó su desviación
típicaintra. Para el conjunto de los músculos
estudiados se estableció la media de cada variable
así como la desviación típica intra e inter.
Se realizó un análisis "t" de Student para demostrar
posibles diferencias para las variables entre las fibras tipo I y
tipo II en cada uno de los estratos.

RESULTADOS

En el músculo oblicuo dorsal la
preincubación a pH 4,6 fue la que permitió una
mejor discriminación de las fibras musculares con
la técnica m-ATPasa ácida, distinguiéndose
fácilmente las fibras tipo I (oscuras) y II (claras). En
este músculo se ponen de manifiesto dos estratos netamente
diferenciados, uno de situación central y otro situado
más periféricamente (figura 2).  

Estos dos estratos, al manifestar diferencias netas
entre sí, son analizados por separado. Los músculos
analizados presentaron un área media total de 9,95
± 4,01 mm2, de la que el 44,8 ± 4,4% se corresponde
con la porción central. Se presentan los resultados
separados por estratos en el cuadro 1.

El estrato central está
compuesto mayoritariamente por fibras tipo II que representan el
89,40% del total, si bien las de tipo I, que representa
sólo el 19,60%, son, de media, sensiblemente de mayor
tamaño, aunque ambos tipos presentan parecida
heterogeneidad. El espectro de tamaño de ambos tipos de
fibras presenta una distribución unimodal, con un rango para
las fibras tipo I que oscila de 25 μm hasta 59
μm, con una mayor concentraciσn de fibras entre 39-41
μm. En las fibras tipo II el rango es algo mayor,
extendiιndose desde 17 μm hasta 63 μm, presentando el
mayor porcentaje de fibras entre 37-39 μm. El αrea
relativa ocupada por las fibras de tipo II supone el 81,33% de su
superficie, que es mucho mayor que la ocupada por
las de tipo I, que sólo alcanza el 11,05%. Como
consecuencia, la densidad de las fibras tipo II es mucho mayor
que la de las fibras tipo I (figura 3).  

El estrato periférico
también se compone mayoritariamente de fibras tipo II
(80,68%), aunque relativamente hay más fibras de tipo I
(19,32%) que en el estrato central. El tamaño medio de
ambos tipos de fibras es pequeño, mostrando parecida
heterogeneidad. Las fibras tipo II son, de media, de mayor
tamaño que las de tipo I, aunque ambas son
considerablemente menores que las del estrato central. Su
espectro de tamaño presenta, al igual que en el estrato
central, una distribución unimodal, con un rango para las
fibras tipo I entre 9 μm y 43 μm con un pico
mαximo entre 15-17 μm, por el contrario, el rango para
las fibras tipo II estα comprendido entre 15 μm y 47
μm, con una mayor concentraciσn de fibras entre 23-25
μm. El αrea relativa de las fibras tipo I representa el
9,06% de la superficie de este estrato, siendo similar a la
que ocupa en el estrato central; sin embargo, el
área que ocupan las fibras tipo II (63,19%) es
sensiblemente menor a la que ocupa el mismo tipo de fibras en el
estrato central. El tejido inespecífico intersticial, que
es la parte del músculo no ocupada por fibras, representa
prácticamente la cuarta parte de este estrato muscular,
siendo netamente mayor que la que ocupa en el estrato central
(figura 3).

DISCUSIÓN

Son muchos los autores que han clasificado a las fibras
de los músculos extraoculares en función de
sus respectivos patrones reticulares en Fine,
Coarse y Granular frente a técnicas
histológicas (Hematoxilina Eosina, Tricrómico
modificado) e histoquímicas (enzimáticas) (Durston
1974, Ringel y col 1978). Otros han atendido al tipo de
inervación que poseen las fibras y las clasifican en
Fibras Simplemente Inervadas (SIF) y en Fibras
Múltiplemente Inervadas (MIF) en función del
número y tipo de terminaciones nerviosas que presentan,
llegándose incluso a diferenciar dos tipos MIF y tres
tipos SIF en función de otras características como
el diámetro fibrilar, riqueza mitocondrial, desarrollo del
retículo sarcoplásmico y tamaño miofibrilar,
medidas estas aplicadas en su mayoría mediante microscopia
electrónica de transmisión (TEM) o
incluso por su situación dentro del músculo
(Pachter y col 1976ª, Pachter 1982, Morgan y Proske 1984,
Jacoby y col 1989). Con la técnica de m-ATPasa
también hay autores que han dividido a los músculos
oculomotores en fibras tipo I y tipo II (Gueritaud y col 1986,
Floquet y col 1990, Galisteo y col 1994) e incluso otros las han
correlacionado con otras clasificaciones (Ringel y col 1978,
Reichman y Srihari 1983).

Los músculos oblicuos dorsales analizados del
perro presentaron dos estratos netamente separados, uno central y
otro periférico. La porción central se asemeja a un
patrón en mosaico característico del músculo
esquelético, donde se pueden diferenciar con la
técnica ATPasa los tipos fibrilares I y II; sin embargo,
el estrato periférico no presenta este aspecto, sino que
está integrado por fibras más irregulares, si bien
se pueden diferenciar igualmente los dos tipos de fibras. Dicha
distribución ya ha sido descrita con anterioridad, para
este músculo, en el hombre
(Ringel y col 1978) y en la rata (Carry y col 1982). En el perro
esta distribución ha sido descrita para los
músculos recto lateral y medial (Galisteo y col
1994).

Los valores
encontrados por nosotros para el músculo oblicuo dorsal,
referentes a la proporción de fibras tipo I y tipo II en
el estrato central, resultan parecidos a los obtenidos en el
hombre (Ringel
y col 1978), pero no con los determinados en la rata (Carry y col
1982), ya que estos autores no observan, en este estrato, ninguna
fibra de tipo I. En el estrato periférico los valores
son más dispares, pues mientras nosotros señalamos
un 19,32% de fibras tipo I, Ringel y col (1978) obtiene
sólo el 0,8% y Carry y col (1982) el 0%.

El tamaño de las fibras fue muy variable,
observándose las de mayor tamaño en el estrato
central y las de menor tamaño en el estrato
periférico, si bien en este último las
disminución fue gradual desde el centro a la periferia.
Esta variabilidad de tamaño ya fue señalada como
una de las características principales de estos
músculos (Ringel y col 1978), que da, en el hombre, un
rango de tamaño para las tipo I de 13-35
μm y para las tipo II de 10-38 μm similar al
seρalado, en la rata, por Carry y col (1982) y mayor al
determinado por Pachter (1983). Debemos destacar que las
fibras tipo I del estrato central son de mayor
tamaño que las de tipo II, ocurriendo lo contrario en el
estrato periférico; pensamos que podría ser debido
para compensar el escaso número de las fibras tipo I en el
estrato central, puesto que el área relativa de este tipo
fibrilar es similar en ambos estratos.

El área relativa de la muestra ocupada
por cada tipo fibrilar es una variable indicativa de la
funcionalidad muscular, al menos en la musculatura de los
miembros (Sullivan y Armstrong 1978). El área relativa
ocupada por las fibras tipo I (contracción lenta) siempre
fue menor que la ocupada por las fibras tipo II
(contracción rápida), lo que nos permite catalogar
a este músculo de rápido (Cooper y Eccles
1930).

Nuestros resultados tienen cierta variabilidad con los
valores señalados por Galisteo y col (1994) para los
músculos recto lateral y recto medial del perro, pues
hemos estimado, en ambos estratos, un mayor porcentaje para las
fibras tipo II y un menor porcentaje de las fibras tipo I. El
tamaño de las fibras es mayor en el estrato central que en
el periférico, siendo el detectado por nosotros
considerablemente mayor, en ambos estratos, que el
señalado por estos autores, si bien coincidimos con ellos
en que el tamaño de las fibras tipo I del estrato central
es mayor que las fibras tipo II. En nuestro estudio, el
área relativa de las fibras tipo II, en ambos estratos, es
aproximadamente 10-20% mayor, siendo los porcentajes muy
similares para las fibras de tipo I en el estrato central y
ligeramente superiores a los determinados por Galisteo y col
(1994) para el músculo recto medial en el estrato
periférico.

En conclusión, los resultados obtenidos en
nuestro estudio muestran la peculiar estratigrafía,
central y periférica, del músculo oblicuo dorsal
del perro, predominando en ambos estratos las fibras tipo II
sobre las de tipo I. Estos hechos deberán tenerse en
cuenta ante las posibles alteraciones que puedan sufrir los
músculos extraoculares en determinadas enfermedades.

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Departamento de Anatomía y
Anatomía Patológica Comparadas, Campus Rabanales,
Universidad de
Córdoba, Ctra Madrid-Cádiz Km 396, 14014 Córdoba.
España.
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