Proceso para el desarrollo de una vacuna contra la fase hepática de Plasmodium vivax (página 2)

Figura 1. Esquema cooperativo de desarrollo de
la vacuna. Este esquema representa los pasos seguidos en el
estudio descrito y los sitios donde se desarrollaron las
actividades principales. Se basa en el esquema general de
descubrimiento y desarrollo de vacunas
propuesto por la OMS.

MATERIALES Y MÉTODOS

Inmunógenos péptidos
sintéticos. Se sintetizaron
múltiples péptidos de distinta longitud y
secuencia, correspondientes a la proteína CS, con la
técnica F-moc de fase sólida17. Inicialmente se
sintetizaron 28 péptidos de 20 aminoácidos,
traslapados en 10 residuos cada uno (p1 a p28), que abarcan la
totalidad de la proteína. Después se sintetizaron 6
péptidos de 9-10 residuos con los epítopes CD8+ y 3
péptidos largos (N, R, C) de más de 70
aminoácidos (aa). El péptido N corresponde al
extremo amino (N-terminal) comprendido entre los aa 20-96 (76
aa). El péptido C cubre el extremo carboxilo (C-terminal),
comprendido entre los aa 301-372 (71 aa) y el péptido R
está conformado por tres repeticiones del péptido
p11, localizado entre los aa 96-104 (27 aa) del dominio central
de la proteína (CS secuencia común), unido en su
extremo amino, a un epítope universal de células T
(ptt-30) derivado de la toxina tetánica18. Los
péptidos cortos se emplearon para caracterizar la
proteína y los péptidos largos se utilizaron para
medir el efecto de la vacunación en ensayos
pre-clínicos en ratones y primates y en ensayos
clínicos de fase I en seres humanos.

Calidad de los péptidos largos. Los
péptidos largos se sintetizaron bajo las normas de "buenas
prácticas de laboratorio"
(Good Laboratory Practice, GLP) en el Instituto de Bioquímica
de la Universidad de
Lausana, Suiza19. Los análisis bioquímicos permitieron
purificar cada uno de los péptidos por el método de
cromatografía de alta resolución
(HPLC)20 y asegurar la secuencia correspondiente de
cada fragmento por el método de espectrometría de
masas (MS)20. Los péptidos se empacaron en
presentaciones individuales de 36 y 120 mg, en el Departamento de
Farmacia del Hospital Cantonal Vaudoise de Lausana, Suiza, donde
se realizaron las pruebas de
esterilidad mediante análisis microbiológico de
gérmenes aerobios y levaduras. Los análisis de
pirogenicidad se realizaron por cinética de endotoxinas
por métodos
cromogénicos (USP 21,CFR 610.12, Guidelines for sterility
testing for biologicals).

Estudios pre-clínicos de la
vacuna

Toxicidad. Las pruebas de seguridad general
las hizo el laboratorio LCG Bioscience en Turín, Italia. Se
inmunizaron tres grupos de cinco
ratones hembras de la cepa CD-1 BR y dos
cobayos hembras, cepa Dunkin Hartley Albino (casa Charles River
Italia S.p.A, via Independenza 11-23885 CALCO) cada uno con uno
de los péptidos largos N, R o C.  

Se realizó una inmunización
intraperitoneal con 100 mg del péptido en 1 ml de
solución salina, se evaluó la presencia de signos
clínicos mediante la observación de cambios sistémicos y
locales relacionados con toxicidad, alteraciones del comportamiento
y mortalidad a los 30 minutos, 2, 4 y 6 horas después de
la inmunización, continuando con las evaluaciones dos
veces al día hasta completar seis días de
observación. Todos los procedimientos
siguieron los protocolos
operativos estandarizados por la compañía
LCG-Bioscience.

Pruebas de inmunogenicidad en animales de
experimentación  

Potencia. Los estudios de potencia de los
péptidos se llevaron a cabo en 60 ratones BALB/c hembras
de 3-4 semanas de edad, procedentes del bioterio del Instituto de
Inmunología del Valle (MVDC-260901). Los
ratones se inmunizaron vía subcutánea (SC) en la
base de la cola, con cada uno de los tres péptidos N, R o
C, derivados de la proteína CS de P. vivax. Los grupos de
20 ratones se distribuyeron en 5 subgrupos (A, B, C, D y E) y se
les inmunizó con una sola dosis de 0.1, 0.3, 3, 10
ó 30 mg de cada uno de los péptidos en condiciones
de laboratorio (Bench Quality, BQ) según las indicaciones
de Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL). Los
títulos de anticuerpos contra cada uno de los
péptidos sintéticos se midieron mediante la
técnica de ELISA en los días 0, 15 y 30
post-inmunización. Se consideraron títulos
positivos en diluciones del suero iguales o mayores a
1:100.

Inmunogenicidad en ratones. Se tomaron 12
ratones BALB/c hembras entre 3 y 4 semanas de edad, del bioterio
del Instituto de Inmunología del Valle, y se distribuyeron
en tres grupos. A cada grupo se le
asignó su inmunización con uno de los tres
péptidos N, C o R en tres dosis de 50 mg/péptido formulados en
adyuvante de Freund en una proporción 50:50 con
solución salina. De cada grupo se eligieron, dos animales
para inmunizarlos por vía intraperitoneal (IP) y otros
dos por vía SC en la base de la cola (BC). Dos de los
cuatro ratones de cada grupo recibieron la primera dosis de
inmunización con la mezcla de los péptidos N y C y
las dos dosis siguientes con la mezcla de los tres
péptidos (N, R y C) con el fin de que la respuesta inmune
se iniciara contra los péptidos de las regiones
flanqueantes de la proteína y luego una respuesta contra
la región central (R), que, como se sabe, es altamente
inmunogénica21. Se realizó medición de los títulos de
anticuerpos contra cada uno de los péptidos en los
días 0, 14, 35 y 42 mediante la técnica de
ELISA.

Inmunogenicidad en primates. Los estudios
de inmunogenicidad se realizaron en 24 monos Aotus lemurinus
griseimembra machos o hembras de más de 800 g de peso,
criados en la Fundación Centro de Primates en Cali. El
protocolo
correspondiente (código:
1106-04-382-98, CT-409-98) fue aprobado por el Comité de
Ética Animal de la Universidad del Valle (FUCEP-070600).
Los estudios de inmunogenicidad de los péptidos con
secuencias potencialmente inductoras de citotoxicidad
(CD8+)22 se hicieron en un grupo de 6 animales que se
inmunizaron con 2 dosis de 100 mg de cada uno de los
péptidos (PV 1, PV 3, PV 5 y PV 6) formulados en adyuvante
de Freund, por vía subcutánea. A los Aotus se les
sangró 4 ml antes de cada inmunización y 10
días después de la última, para determinar
por el método ELISA, la producción de Interferón gamma
(IFN-g ) en el
sobrenadante del cultivo de linfocitos estimulados con el
inmunógeno correspondiente.

La inmunogenicidad de los péptidos largos se
determinó en tres grupos de 6 Aotus cada uno (Grupos A-C),
vacunados por vía subcutánea en los días 0,
40 y 120. El grupo A estuvo constituido por 6 animales que se
inocularon con 100 mg/dosis de la mezcla de los péptidos
(N+R+C) formulados en el adyuvante Montanide ISA-720 para uso en
seres humanos23. El grupo B constituido por 6 animales
que recibieron el adyuvante de Freund considerado de referencia
por su potencia, pero que no se puede usar en humanos por su
toxicidad24. El grupo control C se
inoculó con placebo (adyuvante mezclado con agua
destilada). La inmunogenicidad de los péptidos se
determinó mediante las técnicas
ELISA después de cada inmunización e IFAT en los
días 30 y 130 después de la última
inmunización.

Estudios clínicos de la vacuna

Según los estándares de la OMS, en los
ensayos clínicos de fase I se prueba la seguridad e
inmunogenicidad del candidato a vacuna16. Estos
estudios se realizaron bajo normas de Buenas Prácticas
Clínicas (Good Clinical Practice, GCP), con un protocolo
aprobado por el Comité de Ética Humana de la
Universidad del Valle y de la Fundación Clínica
Valle del Lili. Este estudio lo supervisó el Dr. R.
Palacios, monitor
clínico asignado por el Programa Especial
de Investigación y Entrenamiento en
Enfermedades
Tropicales de la
Organización Mundial de la Salud (TDR/OMS). Igualmente
se asignaron 2 monitores
externos de evaluación
de datos, la Dra. G.
Palma de Colciencias (Bogotá, Colombia) y el
Dr. W. Rojas de la Corporación de Investigaciones
Biológicas (CIB, Medellín, Colombia).

Sujetos humanos. Los voluntarios
participantes en este estudio fueron 23 adultos jóvenes
sin antecedentes de malaria, 16 hombres y 7 mujeres, que
aceptaron voluntariamente por escrito, ser vacunados con los
péptidos sintéticos largos derivados de la
proteína CS de P. vivax, según el protocolo
MVDC-2002-001. El tamaño de la muestra se
calculó, por razones de conveniencia, en 7 individuos por
péptido (N, R o C) y 2 individuos para el grupo control;
sin embargo, este tamaño es el mínimo número
necesario para obtener resultados significativos, si se supone
que la ocurrencia de sucesos adversos es una situación
rara.

La convocatoria de participación se hizo a
través de afiches, conferencias y asesorías
personalizadas. Las personas interesadas en participar firmaron
el consentimiento informado para iniciar el proceso de
selección, que consistió en una
evaluación clínica completa y exámenes de
laboratorio que incluyeron pruebas hematológicas,
bioquímicas, inmunológicas, pruebas para descubrir
enfermedades infecciosas como VIH (Abbott Axsym), sífilis
(Organon Teknika) hepatitis B y C
(Abbott Axsym), deficiencia de G6PD (Sigma) y
determinación de anticuerpos
antimaláricos21 con el fin de determinar
el estado de
salud, los antecedentes de exposición
a malaria y la ausencia de algún tipo de
alergia.

Una prueba de embarazo
cuantitativa (Abbott Axsym) se practicó a las mujeres
antes de cada inmunización y en los seguimientos
programados. Durante este proceso, se seleccionó a los 23
voluntarios que cumplieron los criterios de inclusión como
ser adultos sanos entre 18 y 33 años, usar métodos
anticonceptivos durante el período del estudio, no
viajar a zonas endémicas para malaria, no recibir otro
tipo de vacuna, ser localizable durante el período del
estudio y expresar por escrito su deseo de participar en el
estudio mediante la firma del consentimiento informado. A cada
sujeto se le explicó en forma clara, la libertad de
retirarse en cualquier momento sin que esto implicara
algún tipo de sanción o pérdida de los
beneficios de participar en el estudio.  

Esquema de inmunización y dosis.
Los voluntarios se distribuyeron al azar en tres grupos de 7
personas para ser inmunizados con uno de los tres péptidos
(N, R o C) formulados en el adyuvante Montanide ISA-720,
respectivamente. Se asignaron como controles dos voluntarios en
cada uno de los tres grupos y recibieron una mezcla del adyuvante
Montanide ISA-720 con solución salina como placebo en una
relación 3:7. La dosis del péptido sintético
para cada inmunización fue de 100 mg, en un volumen final de
500 ml de cada una de las formulaciones. El esquema de
vacunación consistió en tres inmunizaciones que se
administraron en los meses 0, 2 y 6 aplicadas vía
intramuscular en la región deltoidea, alternando los
brazos para cada inyección. Con el fin de mantener la
condición de doble ciego del estudio, ni los voluntarios,
ni los investigadores, tuvieron acceso a la información sobre la asignación del
péptido que se utilizó para cada
voluntario.

Evaluación de seguridad. Los
voluntarios se observaron durante una hora
postinmunización, a cuyo término se les
realizó un examen físico completo que
incluyó la medición de talla, peso, toma de signos
vitales y la evaluación de los sistemas
otorrinolaringológico, cardiovascular, pulmonar,
gastrointestinal y neurológico para garantizar el estado de
salud y descubrir posibles reacciones adversas; además se
hicieron nuevas evaluaciones a las 8 y 24 horas y 7 días
postinmunización. Las visitas de seguimiento incluyeron un
examen médico completo y pruebas paraclínicas, a
saber: cuadro hemático completo, pruebas de
coagulación, perfil hepático, pruebas de función
renal, glicemia, anticuerpos antinucleares (ANA), que se llevaron
a cabo en los meses 1, 2, 6 y 9 luego de administrar la primera
dosis de la vacuna.

Evaluación de inmunogenicidad en
humanos. Se efectuaron siete evaluaciones para determinar
la respuesta inmune humoral. Los títulos de anticuerpos se
midieron por el método ELISA contra su inmunógeno y
por la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFAT) contra la
proteína nativa, usando como antígeno esporozoitos de P. vivax con la
proteína CS homóloga, procedentes de la Unidad de
Entomología del Instituto de Inmunología
según método descrito
previamente25.

RESULTADOS

Inmunógenos. Los
estudios de espectrometría de masas demostraron que todos
los péptidos sintetizados con el método F-moc19
tenían la masa esperada. Para el caso de los
péptidos largos sintetizados en condiciones BPL, los
estudios de esterilidad y pirogenicidad fueron aprobados y
certificados por la unidad de producción del Departamento
de Farmacias del Hospital Cantonal Vaudoise de Lausana,
Suiza.

Fase pre-clínica

Análisis de toxicidad. El uso de
los péptidos (N, R y C) en los tres grupos experimentales
no produjo efectos tóxicos sistémicos o locales, lo
cual se estableció por la ausencia de mortalidad, cambios
clínicos, alteraciones en el comportamiento de los
animales (ratones y conejos), pérdida de peso o cambios en
el sitio de la inoculación durante el período de
observación. Análisis de potencia e
inmunogenicidad en ratones y primates. Los estudios de
potencia en ratones mostraron una respuesta de anticuerpos
variable como se observa en la Figura 2, que osciló entre
títulos de 1:100 a 1:500.000 siendo mayores los
títulos obtenidos con los péptidos C y R en
condiciones BQ; sin embargo, en todos los grupos de ratones se
produjo respuesta de anticuerpos con dosis de 10 y 30 mg,
independientemente de la calidad del
péptido. Los ratones inmunizados con el péptido C,
presentaron la mejor respuesta, pues se obtuvo aumento en los
títulos con solo 3 mg de péptido con calidad BQ y
de 10 mg del péptido BPL.

Los resultados de inmunogenicidad en ratones con los
péptidos largos (Figura 3) demostraron que con una dosis
más alta (50 mg), se logra incrementar la respuesta de
anticuerpos (1:80.000-1:1.000.000). A excepción del grupo
inmunizado intraperitonealmente (IP) con el péptido C
terminal, el cual mostró una alta respuesta de
anticuerpos, la mejor ruta de inmunización es la
subcutánea (SC).

Los datos obtenidos de monos inmunizados con
péptidos largos demostraron una buena seguridad cuando los
mismos se formularon en Montanide ISA-720, e indicaron gran
potencia inmunológica al administrarlos como formulaciones
en adyuvante de Freund, que mostró la toxicidad esperada
(granulomas cutáneos severos), que los hace inaceptables
para el uso en seres humanos. En resumen, se observó una
alta inmunogenicidad y el reconocimiento de la proteína
nativa del parásito.

En cuanto a la inmunogenicidad de los péptidos
cortos que contienen epítopes citotóxicos, como se
observa en el Cuadro 1, los linfocitos de los Aotus inmunizados
reconocieron los péptidos con estos epítopes y
desencadenaron una elevada producción de
IFN-g con rangos
que variaban de 236-3,598 pg/ml, mientras que los niveles antes
de la inmunización fueron de sólo 0-4
pg/ml.

Fase clínica

Selección de voluntarios. Se
realizaron 12 reuniones (entre seminarios y talleres), a las que
asistieron un total de 450 personas. En ellas se explicaron
completamente los procedimientos, beneficios y riesgos de
participar en el estudio. De este grupo, un total de 60
asistieron a sesiones de asesoría personalizada durante
las cuales se atendieron preguntas adicionales y quienes
decidieron participar en el estudio se convirtieron en
voluntarios potenciales; de ellos 41 expresaron por escrito su
deseo de participar al firmar el consentimiento informado.
Durante la evaluación clínica se determinó
que 13 personas presentaban algún criterio de
exclusión; las restantes cumplieron con todos los
criterios de inclusión, y de ellas, 5 decidieron retirarse
voluntariamente. Al final del proceso de selección se
incluyeron 23 personas como se muestra en la Figura 4. Un mes
después de la primera dosis de inmunización, una de
las personas se retiró del estudio debido a su necesidad
de viajar a una zona endémica para malaria y se la
reemplazó antes que al grupo restante se le administrara
la segunda dosis de inmunización, cumpliendo
satisfactoriamente todo el esquema de
vacunación.

Seguridad general. Los
análisis de seguridad demostraron que ninguno de los
individuos presentó eventos adversos
serios, definidos de acuerdo con los criterios comunes de
toxicidad versión 2.0 DCTD, NCI, NIH, DHHS, marzo 1998. El
esquema de vacunación se completó
satisfactoriamente en los 23 voluntarios. Las inmunizaciones se
relacionaron con la presencia de signos o síntomas leves,
de los cuales el dolor en el sitio de inyección fue el
más frecuente, la duración de este dolor nunca se
informó más allá de las primeras 48 horas
después de la inmunización, y en todos los casos
los voluntarios coincidieron en afirmar que era similar al
causado por cualquiera de las vacunas clásicas. El dolor
no tuvo una relación directa con el péptido
administrado. El hallazgo clínico que tuvo la mayor
frecuencia en las evaluaciones post-inmunización, fue la
presencia de edema leve, que se resolvió en todos los
casos antes de 48 horas, sin relacionarse en ningún caso
con el péptido administrado. Los seguimientos
paraclínicos en el transcurso del estudio no mostraron
alteraciones con respecto a la vacuna en ninguno de los
casos.

Inmunogenicidad en voluntarios humanos.
Los resultados preliminares de inmunogenicidad, medida por la
respuesta de anticuerpos contra cada uno de los péptidos
sintéticos que se utilizaron como inmunógenos en
pruebas de ELISA, mostró un incremento de anticuerpos
específicos contra cada uno de los péptidos largos
los cuales oscilaron entre 1:200 y 1:6.400 (Cuadro 2),
encontrándose títulos mayores contra los
péptidos N y R. Para los tres péptidos largos, los
títulos de anticuerpos alcanzados se sostuvieron durante
el período de seguimiento hasta 3 meses después de
la última inmunización, siendo más altos que
los alcanzados por el grupo control (Cuadro 2). Más
importante aún es que los sueros de los voluntarios
inmunizados reconocieron la proteína nativa expresada en
la superficie del esporozoito evaluado mediante la técnica
de inmunofluorescencia (dato no presentado).

DISCUSIÓN

En el presente estudio se ha descrito el empleo de una
amplia gama de facilidades establecidas conjuntamente entre el
Instituto de Inmunología de la Universidad del Valle y el
Centro Internacional de Vacunas (Cali, Colombia), que representa
una infraestructura única para el desarrollo y prueba de
vacunas contra la malaria. Por medio de esta infraestructura, con
importantes ventajas comparativas, se ha establecido una agenda
que incluye varias estrategias
orientadas a acelerar el desarrollo de una vacuna multivalente
eficaz contra las dos especies de malaria más comunes a
nivel mundial. Tales estrategias comprenden, el análisis
simultáneo de la inmunogenicidad de múltiples
antígenos maláricos como candidatos potenciales
contra la malaria causada tanto por P. falciparum como por P.
vivax26, la identificación de epítopes
relevantes en dichas proteínas21 y más
recientemente una estrategia
genómica para el desarrollo de vacunas de ADN.

En el presente trabajo se
describe parcialmente el análisis de la proteína CS
de P. vivax que ha se ha sometido a una cuidadosa
caracterización inmunológica. La presencia de
epítopes B, T-CD4+ y T-CD8+ a través de toda su
secuencia ya se había definido antes21,27,28, y
se ratificó para algunos de ellos en el presente estudio.
La identificación de los mismos permitió utilizar
la estrategia de síntesis
química de
péptidos largos con múltiples de estos
epítopes capaces de complementarse en la inducción de una adecuada respuesta inmune
humoral y celular. La técnica de síntesis de
péptidos largos desarrollada por uno de nosotros
(GC)20 , ha permitido la rápida
producción de numerosos péptidos candidatos a
vacuna en cantidades suficientes para pruebas preclínicas
y clínicas; además, ésta técnica
permite una fácil purificación sin riesgo de
contaminantes naturales provenientes de cultivos celulares. Los
resultados de las pruebas de toxicidad general de los
péptidos en roedores y las pruebas de potencia
inmunogénica de los mismos, indicaron la factibilidad de
llevar a cabo estudios preclínicos en primates no humanos
y ensayos clínicos en voluntarios humanos. Los primeros se
realizaron con el fin de determinar:

a. La inmunogenicidad de péptidos reconocidos por
células CD8+ humanas en monos Aotus y
b. La inmunogenicidad de combinaciones de los péptidos
largos N, R y C en el mismo modelo
animal.

Los linfocitos CD8+ juegan un importante papel en la
protección contra la fase hepática de la
malaria29 en la medida en que estas células
tienen la capacidad de inducir la destrucción directa de
hepatocitos infectados30 y la producción de
IFN-g31,32 capaces de
bloquear el desarrollo del parásito dentro del
hepatocito33,34. Por otra parte, estos resultados son
de gran importancia para confirmar la utilidad del
modelo Aotus en estudios en malaria, pues los mismos permiten
inferir que los epítopes CD8+ analizados, cuya respuesta
en el humano esta restringida genéticamente por
moléculas HLA-A2.1, son igualmente reconocidas por los
linfocitos de Aotus, lo que permite suponer una homología
entre las moléculas clase I de
seres humanos y estos primates. El grupo de Cali en la actualidad
analiza esta homología de manera sistemática. Los
resultados de estudios previos hechos en Cali con la
proteína de estadios hepáticos de P. falciparum,
LSA-3, permiten suponer que los mecanismos de protección
en Aotus y seres humanos son por lo menos parcialmente similares,
lo que confirma el valor de este
modelo experimental y permite acelerar el descubrimiento y
análisis de nuevas moléculas con potencial para
desarrollar vacunas de uso humano.

Además, debido a la alta inmunogenicidad del
fragmento R21, la estrategia de inoculación
inicial con los péptidos N y C seguida de la
combinación N+R+C probada en Aotus, indicó que se
puede generar una mejor respuesta contra los epítopes
presentes en esa región y evitar la distracción en
la respuesta por epítopes altamente inmunogénicos
como el R22. En todos los casos, los anticuerpos
inducidos por la inmunización de roedores y Aotus con
estos péptidos largos que contienen epítopes B,
reconocieron no sólo los inmunógenos, sino la
proteína CS sobre esporozoitos, indicando que la estructura de
esos epítopes se conserva en los péptidos
sintéticos y simula la estructura de la proteína
nativa. Igual deducción puede hacerse de resultados
obtenidos en monos Aotus inmunizados con los péptidos
largos en los que se dio una dosis de refuerzo con esporozoitos
frescos de P. vivax. Este procedimiento
indujo un refuerzo en la respuesta de producción de
IFN-g22.

De igual manera los sueros de los voluntarios humanos
inmunizados con los péptidos largos formulados en
Montanide ISA-720, revelaron altos títulos de
anticuerpos, capaces de reconocer la proteína nativa
cuando se analizaron mediante la técnica de IFAT. La
similitud en el reconocimiento de los epítopes contenidos
en la proteína CS, por parte de los individuos
semi-inmunes de las áreas endémicas, por los monos
Aotus inmunizados21 y posteriormente por los
voluntarios inmunizados en este estudio, indican su
condición de epítopes dominantes, altamente
inmunogénicos y con un posible efecto protector contra la
infección por P. vivax. En vista de la gran complejidad
del ciclo de vida
del Plasmodium, y de los múltiples componentes tanto del
parásito como de la respuesta inmune contra la malaria, es
fácil predecir que el empleo de la proteína CS de
P. vivax o de los fragmentos descritos antes, no sean por
sí solos capaces de conferir una inmunidad suficiente para
tener un impacto epidemiológico duradero en las
comunidades endémicas; sin embargo, los resultados de los
estudios descritos aquí, demuestran un gran potencial de
este antígeno como subunidad para ser incluida en una
vacuna multivalente.

Estudios en progreso indican que su homólogo de
P. falciparum tiene una importante capacidad protectora, lo que
genera un argumento a favor de la proteína CS de P. vivax.
En este último, el bloqueo de la fase hepática
reviste la mayor importancia debido al comportamiento
biológico del parásito, que termina en la
generación de hipnozoitos, responsables de las recidivas
características de la enfermedad.

Finalmente, los resultados de estudios
sistemáticos y secuenciales en el proceso de desarrollo de
una vacuna, en este caso, la proteína CS de P. vivax,
demuestran que es posible prever el éxito
en el desarrollo de una vacuna contra la malaria.

En la actualidad se adelantan trabajos complementarios,
con proteínas
de otros estadios de P. vivax, en el marco de un programa
internacional llevado a cabo por el Consorcio para la Investigación Científica, en el que
participan el Instituto de Inmunología del Valle, el
Centro Internacional de Vacunas, la Fundación Centro de
Primates35 y otras instituciones
de Colombia, que trabajan en colaboración con numerosos
centros de investigación del mundo.

AGRADECIMIENTOS

Queremos expresar nuestra gratitud a todas las personas
que aceptaron participar como voluntarios en este estudio, a
Luz Helena
García por el trabajo
realizado en la convocatoria, reclutamiento
y seguimiento de los voluntarios, a Liliana Soto, Ana Milena
Lenis y Carolina Ramírez
por el apoyo técnico, a Antonio Ramírez por su
apoyo logístico importante en el éxito del estudio,
a los monitores independientes de datos doctora Gloria Palma y
doctor William Rojas, a la Organización Mundial de la Salud y al
monitor clínico asignado por la OMS doctor Ricardo
Palacios. Este estudio fue cofinanciado por Colciencias, la
Secretaría Departamental de Salud del Valle y la
Fundación Centro Internacional de Vacunas.

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Sócrates Herrera, M.D.1, Leonardo
Victoria, M.D.2, Olga Fernández,
B.Sc.2, Anilza Bonelo, Ph.D.3, Blanca Liliana Perlaza,
Ph.D.2 Constanza Zapata, B.Sc.2, Deidre
Overgaaw, M.D.4, Mauricio León,
M.D.2, Edna Galindo, M.D.2, Nayibe
Valencia, B.Sc.2, Lina María Acuña,
M.D.2, Gustavo Quintero, M.D.V.5, Nora
Restrepo, Ph.D.6, Juan Diego Vélez,
M.D.7, Fabián Méndez, M.D.,
Ph.D.8, Adriana Villegas, B.Sc.9,
Giampietro Corradin, Ph.D.10, Myriam
Arévalo-Herrera, Ph.D.11

1. Profesor
Titular, Director del Instituto de Inmunología, Facultad
de Salud, Universidad del Valle, Cali.
2. Investigador Asociado, Centro Internacional de Vacunas,
Cali.
3. Profesora, Departamento de Microbiología, Escuela de
Ciencias
Básicas, Facultad de Salud, Universidad del Valle,
Cali.
4. Investigador Asociado, Universidad de Groningen, Holanda.
5. Investigador Asociado, Fundación Centro de Primates,
Cali.
6. Docente, Facultad de Química, Universidad de Antioquia,
Investigador Asociado, Medellín.
7. Investigador Asociado, Fundación Clínica Valle
del Lili, Cali.
8. Profesor Asistente, Escuela de Salud
Pública, Facultad de Salud, Universidad del Valle,
Cali.
9. Bacterióloga, Laboratorio Asoclinic, Cali.
10. Investigador Asociado, Instituto de Bioquímica de
Lausana, Suiza.
11. Profesora Titular, Escuela de Bacteriología y
Laboratorio Clínico, Facultad de Salud, Universidad del
Valle, Cali.