Detección de anticuerpos contra el virus de la peste porcina clásica mediante la prueba inmunoenzimática (CIV-ELISA) y seroneutralización
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RESUMEN: La peste porcina
clásica (PPC) es una enfermedad de gran importancia
mundial. En Chile está sometida a un programa de
control y
erradicación.
El presente ensayo tuvo
como objetivo
estandarizar y comparar una técnica
inmunoenzimática (CIV-ELISA) que detecta anticuerpos del
tipo IgG dirigidos contra el virus de la PPC,
con la seroneutralización (SN), técnica oficial
para el diagnóstico serológico.
Se utilizaron 20 cerdos híbridos Landrace x Large
White de 20 kg de peso vivo, los que fueron inoculados
experimentalmente con una dosis de 100.000 DICT50 del aislado
virulento Quillota del virus PPC. Un grupo
constituido por 4 cerdos fue vacunado 14 días antes de la
inoculación. Se tomaron muestras de sangre a los 3,
6, 9, 12 y 14 días post-inoculación. Además,
se obtuvieron muestras serológicas de 100 hembras
reproductoras. Los anticuerpos anti-PPC fueron determinados por
un CIV-ELISA policlonal, realizándose comparación
con la prueba de SN.
La prueba CIV-ELISA no detectó anticuerpos en los
cerdos inoculados experimentalmente hasta los 14 días
post-inoculación.
Sin embargo, los cerdos vacunados previamente fueron
seropositivos, situación ratificada por la SN.
La sensibilidad y especificidad del CIV-ELISA fue de
90.1% y 76.4%, respectivamente. El CIV-ELISA demostró ser
una prueba de fácil aplicación y los resultados son
similares a los de la SN.
Palabras claves: peste porcina clásica,
diagnóstico, ELISA.
SUMMARY: Detection of antibodies against the
classical swine fever virus by enzime-linked
immunosorbent assay (ELISA)
Classical swine fever (CSF) is an important worldwide
disease. In Chile, it is subject to a control and erradication
programme.
The objective of the present assay was to standardize an
immunoenzimatic technique (CIV-ELISA) that detects antibodies of
the IgG type directed against the CSF virus and to compare it
with seroneutralization.
Twenty hybrid Landrace x Large White pigs with a live
weight of 20 kg were used. They were experimentally inoculated
with a dose of 100.000 TCID50 of the Quillota virulent
isolate of the CSF virus. A four-pig group was vaccinated 14 days
before inoculation. Blood samples were taken 3, 6, 9, 12 and 14
days post-inoculation. Serological samples were obtained from 100
sows. The anti-CSF antibodies were determined for a policlonal
CIV-ELISA and were compared with a seroneutralization test (serological
official test).
The CIV-ELISA test did not detect antibodies in the
experimentally inoculated pigs until day 14 post-inoculation.
However, the positive-sera condition of previously vaccinated
pigs was ratified by the seroneutralization test.
The sensibility and specificity of the CIV-ELISA was
about 90.1% and 76.4% respectively. The CIV-ELISA is an
easy-to-apply test and the results obtained are similar to those
obtained with seroneutralization.
Key words: classical swine fever, diagnosis,
ELISA.
INTRODUCCION
La peste porcina clásica (PPC) es la enfermedad
viral más importante de la producción porcina mundial, debido a su
gran poder de
diseminación, por lo que está presente en un gran
número de países productores de cerdos
(Gómez-Tejedor y Valenciano, 1994). En Chile, está
sometida a un estricto programa de control y erradicación,
no observándose brotes desde 1993 (Adriazola,
1994)
Es producida por un pestivirus estrechamente relacionado
a otros virus de importancia económica como son el virus
de la diarrea viral
bovina (DVB) y el virus de la enfermedad de las fronteras de los
ovinos (EF) (Moennig y col., 1990). En forma natural, la PPC
afecta a los suidos domésticos y salvajes, y
experimentalmente la enfermedad se ha reproducido en animales de
laboratorio,
siendo el conejo el hospedador heterólogo más
importante, ya que en esta especie se logró desarrollar
una vacuna (vacuna cepa china
lapinizada) (Dahle y Liess, 1992).
En los últimos años se han logrado
extraordinarios avances en relación a los aspectos
moleculares del virus, lo que también ha significado
mejorar las técnicas
tradicionales de diagnóstico (Wensvoort y col., 1989). En
un principio, éste se basa en los antecedentes y hallazgos
de terreno, los que son confirmados por pruebas de
diagnóstico in vivo e in vitro (Pearson, 1992). Las
técnicas in vitro como la inmunofluorescencia directa
(IFD), indirecta (IFI) (Fenner y col., 1992; Rosell y col., 1994)
y el aislamiento del virus en cultivos de células
PK-15 (Terpstra, 1991 Rosell y col., 1994), utilizan tejidos de los
animales sospechosos, por lo que solamente sirven como método de
diagnóstico confirmativo en un posible brote de la
enfermedad. Por esta razón, en la actualidad se ha
intentado desarrollar, principalmente, pruebas in vivo, las que
agrupan distintas técnicas serológicas que pueden
aplicarse a un gran número de animales y son de especial
interés
para controlar los focos de la enfermedad, permitiendo su
rápido diagnóstico y eliminación (Have,
1984; Koenen y col., 1992; Rosell y col., 1994).
Los anticuerpos contra el virus de la PPC pueden ser
detectados por diferentes métodos,
como seroneutralización (SN) y técnicas
inmunoenzimáticas (ELISA) (Saunders, 1977; Wensvoort y
col., 1988; Schagemann y col., 1991; Koenen y col., 1992; Rosell
y col., 1994), siendo su detección muy útil en
hembras sospechosas de estar infectadas con cepas de baja
virulencia. Por otra parte, también se pueden encontrar en
cerdos anticuerpos contra virus DVB (Dahle y Liess, 1992; Jensen,
1981), dificultando el diagnóstico de la PPC; por esta
razón se recomienda utilizar, preferentemente, aquellas
pruebas que logran diferenciar los anticuerpos dirigidos contra
el virus de la PPC de los antivirus DVB,
como son las técnicas que utilizan anticuerpos
monoclonales (Leforban y col., 1987; Leforban y col., 1990;
Wensvoort y col., 1986; Wensvoort y col., 1988).
Actualmente, muchos países utilizan para sus
programas de
control y erradicación de la enfermedad las
técnicas de SN y ELISA (Rosell y col., 1994). Una ventaja
adicional que ofrecen las técnicas ELISA sobre las
demás técnicas es la rapidez, sin que esto implique
una pérdida en la sensibilidad. Las técnicas de
ELISA permiten procesar un gran número de muestras, por lo
que son de gran utilidad en
áreas o países donde la PPC es esporádica o
desea erradicarse (Rosell y col., 1994). Así, para el
control de la enfermedad en países europeos esta
técnica fue usada como prueba "screening" para la
detección de los animales enfermos o portadores (Wensvoort
y col., 1988). Sin embargo, este método no logra
diferenciar anticuerpos vacunales de los debidos a
infección por virus de campo, y por lo tanto para
interpretar correctamente los resultados serológicos deben
tenerse en cuenta la situación de cada país y los
programas de vacunación que se utilizan.
El presente trabajo
compara los resultados obtenidos con un ELISA policlonal y la
técnica de SN, con el fin de aportar nuevos antecedentes
en el diagnóstico serológico de la
enfermedad.
HIPOTESIS. Se postula que la prueba de ELISA presenta
igual sensibilidad que la SN, que se usa como prueba de
"screening" en el programa de erradicación de la PPC en
Chile.
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