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Detección de anticuerpos contra el virus de la peste porcina clásica mediante la prueba inmunoenzimática (CIV-ELISA) y seroneutralización


Partes: 1, 2

    Publicación original:
    Arch. med. vet., 1997, vol. 29, no.2, p.213-220.
    ISSN 0301-732X.
    Reproducción autorizada por:
    Revista Archivos de Medicina Veterinaria

    RESUMEN: La peste porcina
    clásica (PPC) es una enfermedad de gran importancia
    mundial. En Chile está sometida a un programa de
    control y
    erradicación.

    El presente ensayo tuvo
    como objetivo
    estandarizar y comparar una técnica
    inmunoenzimática (CIV-ELISA) que detecta anticuerpos del
    tipo IgG dirigidos contra el virus de la PPC,
    con la seroneutralización (SN), técnica oficial
    para el diagnóstico serológico.

    Se utilizaron 20 cerdos híbridos Landrace x Large
    White de 20 kg de peso vivo, los que fueron inoculados
    experimentalmente con una dosis de 100.000 DICT50 del aislado
    virulento Quillota del virus PPC. Un grupo
    constituido por 4 cerdos fue vacunado 14 días antes de la
    inoculación. Se tomaron muestras de sangre a los 3,
    6, 9, 12 y 14 días post-inoculación. Además,
    se obtuvieron muestras serológicas de 100 hembras
    reproductoras. Los anticuerpos anti-PPC fueron determinados por
    un CIV-ELISA policlonal, realizándose comparación
    con la prueba de SN.

    La prueba CIV-ELISA no detectó anticuerpos en los
    cerdos inoculados experimentalmente hasta los 14 días
    post-inoculación.

    Sin embargo, los cerdos vacunados previamente fueron
    seropositivos, situación ratificada por la SN.

    La sensibilidad y especificidad del CIV-ELISA fue de
    90.1% y 76.4%, respectivamente. El CIV-ELISA demostró ser
    una prueba de fácil aplicación y los resultados son
    similares a los de la SN.

    Palabras claves: peste porcina clásica,
    diagnóstico, ELISA.

    SUMMARY: Detection of antibodies against the
    classical swine fever virus by enzime-linked

    immunosorbent assay (ELISA)

    Classical swine fever (CSF) is an important worldwide
    disease. In Chile, it is subject to a control and erradication
    programme.

    The objective of the present assay was to standardize an
    immunoenzimatic technique (CIV-ELISA) that detects antibodies of
    the IgG type directed against the CSF virus and to compare it
    with seroneutralization.

    Twenty hybrid Landrace x Large White pigs with a live
    weight of 20 kg were used. They were experimentally inoculated
    with a dose of 100.000 TCID50 of the Quillota virulent
    isolate of the CSF virus. A four-pig group was vaccinated 14 days
    before inoculation. Blood samples were taken 3, 6, 9, 12 and 14
    days post-inoculation. Serological samples were obtained from 100
    sows. The anti-CSF antibodies were determined for a policlonal
    CIV-ELISA and were compared with a seroneutralization test (serological
    official test).

    The CIV-ELISA test did not detect antibodies in the
    experimentally inoculated pigs until day 14 post-inoculation.
    However, the positive-sera condition of previously vaccinated
    pigs was ratified by the seroneutralization test.

    The sensibility and specificity of the CIV-ELISA was
    about 90.1% and 76.4% respectively. The CIV-ELISA is an
    easy-to-apply test and the results obtained are similar to those
    obtained with seroneutralization.

    Key words: classical swine fever, diagnosis,
    ELISA.

    INTRODUCCION

    La peste porcina clásica (PPC) es la enfermedad
    viral más importante de la producción porcina mundial, debido a su
    gran poder de
    diseminación, por lo que está presente en un gran
    número de países productores de cerdos
    (Gómez-Tejedor y Valenciano, 1994). En Chile, está
    sometida a un estricto programa de control y erradicación,
    no observándose brotes desde 1993 (Adriazola,
    1994)

    Es producida por un pestivirus estrechamente relacionado
    a otros virus de importancia económica como son el virus
    de la diarrea viral
    bovina (DVB) y el virus de la enfermedad de las fronteras de los
    ovinos (EF) (Moennig y col., 1990). En forma natural, la PPC
    afecta a los suidos domésticos y salvajes, y
    experimentalmente la enfermedad se ha reproducido en animales de
    laboratorio,
    siendo el conejo el hospedador heterólogo más
    importante, ya que en esta especie se logró desarrollar
    una vacuna (vacuna cepa china
    lapinizada) (Dahle y Liess, 1992).

    En los últimos años se han logrado
    extraordinarios avances en relación a los aspectos
    moleculares del virus, lo que también ha significado
    mejorar las técnicas
    tradicionales de diagnóstico (Wensvoort y col., 1989). En
    un principio, éste se basa en los antecedentes y hallazgos
    de terreno, los que son confirmados por pruebas de
    diagnóstico in vivo e in vitro (Pearson, 1992). Las
    técnicas in vitro como la inmunofluorescencia directa
    (IFD), indirecta (IFI) (Fenner y col., 1992; Rosell y col., 1994)
    y el aislamiento del virus en cultivos de células
    PK-15 (Terpstra, 1991 Rosell y col., 1994), utilizan tejidos de los
    animales sospechosos, por lo que solamente sirven como método de
    diagnóstico confirmativo en un posible brote de la
    enfermedad. Por esta razón, en la actualidad se ha
    intentado desarrollar, principalmente, pruebas in vivo, las que
    agrupan distintas técnicas serológicas que pueden
    aplicarse a un gran número de animales y son de especial
    interés
    para controlar los focos de la enfermedad, permitiendo su
    rápido diagnóstico y eliminación (Have,
    1984; Koenen y col., 1992; Rosell y col., 1994).

    Los anticuerpos contra el virus de la PPC pueden ser
    detectados por diferentes métodos,
    como seroneutralización (SN) y técnicas
    inmunoenzimáticas (ELISA) (Saunders, 1977; Wensvoort y
    col., 1988; Schagemann y col., 1991; Koenen y col., 1992; Rosell
    y col., 1994), siendo su detección muy útil en
    hembras sospechosas de estar infectadas con cepas de baja
    virulencia. Por otra parte, también se pueden encontrar en
    cerdos anticuerpos contra virus DVB (Dahle y Liess, 1992; Jensen,
    1981), dificultando el diagnóstico de la PPC; por esta
    razón se recomienda utilizar, preferentemente, aquellas
    pruebas que logran diferenciar los anticuerpos dirigidos contra
    el virus de la PPC de los antivirus DVB,
    como son las técnicas que utilizan anticuerpos
    monoclonales (Leforban y col., 1987; Leforban y col., 1990;
    Wensvoort y col., 1986; Wensvoort y col., 1988).

    Actualmente, muchos países utilizan para sus
    programas de
    control y erradicación de la enfermedad las
    técnicas de SN y ELISA (Rosell y col., 1994). Una ventaja
    adicional que ofrecen las técnicas ELISA sobre las
    demás técnicas es la rapidez, sin que esto implique
    una pérdida en la sensibilidad. Las técnicas de
    ELISA permiten procesar un gran número de muestras, por lo
    que son de gran utilidad en
    áreas o países donde la PPC es esporádica o
    desea erradicarse (Rosell y col., 1994). Así, para el
    control de la enfermedad en países europeos esta
    técnica fue usada como prueba "screening" para la
    detección de los animales enfermos o portadores (Wensvoort
    y col., 1988). Sin embargo, este método no logra
    diferenciar anticuerpos vacunales de los debidos a
    infección por virus de campo, y por lo tanto para
    interpretar correctamente los resultados serológicos deben
    tenerse en cuenta la situación de cada país y los
    programas de vacunación que se utilizan.

    El presente trabajo
    compara los resultados obtenidos con un ELISA policlonal y la
    técnica de SN, con el fin de aportar nuevos antecedentes
    en el diagnóstico serológico de la
    enfermedad.

    HIPOTESIS. Se postula que la prueba de ELISA presenta
    igual sensibilidad que la SN, que se usa como prueba de
    "screening" en el programa de erradicación de la PPC en
    Chile.

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