Enfermedad perinatal y viabilidad celular renal postmortem in vitro en el Hospital Universitario del Valle, Cali

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  Resultados
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  Discusión
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  Referencias

RESUMEN: Se estudiaron 357 neonatos
² 3 días de edad, fallecidos en la sala de Cuidados
Intensivos del Recién Nacido (CIRENA) y 39 mortinatos de
la sala de partos, del Hospital Universitario del Valle (HUV) en
Cali, Colombia, para
buscar posibles relaciones entre los antecedentes de enfermedad
perinatal y la viabilidad celular renal postmortem (VCRP) in
vitro. Se logró demostrar una VCRP total de 60%.
ésta fue significativamente mayor en mortinatos
²2,500 g de peso (88%), y significativamente menor en
neonatos de >2,500 g de peso al nacer con antecedente materno
de eclampsia (26%). Además, se observó una tasa de
mortalidad hospitalaria de 22% en los 3,628 neonatos admitidos a
CIRENA entre octubre 1, 1992 y diciembre 31, 1994. El mayor
riesgo de
muerte fue
para los neonatos ²3 días de edad (16%) y el menor
para aquellos entre los 4 y 7 días de edad (2%). Los
antecedentes maternos de enfermedad perinatal más comunes
fueron eclampsia (33%) y ruptura prematura de membranas (31%). La
mayoría de los neonatos admitidos a CIRENA (73%) fueron
²2,500 g de peso al nacer.

Palabras claves: Cultivos celulares.
Riñón. Eclampsia. Enfermedad perinatal.

SUMMARY: In order to determine possible relationships
between perinatal disease and post mortem neonate kidney cell
viability in vitro, 357 neonates ²3 days of age who died at
the intensive care unit (CIRENA) and 39 stillbirths of Hospital
Universitario del Valle (HUV) in Cali, Colombia were assessed.
The total post mortem kidney cell viability was 60%. It was
significantly higher among stillbirths with ²2,500 g of
weight (88%), and significantly lower among neonates with a birth
weight >2,500 g and maternal history of eclampsia (26%). In
addition, a 22% hospital mortality for the 3,628 neonatal
admissions to CIRENA between October 1, 1992 and December 31,
1994 was observed. The highest death risk was for neonates
²3 days of age (16%) and the lowest for those between 4-7
days old (2%). The most frequent maternal history of perinatal
disease was eclampsia (33%) and premature rupture of membranes
(31%). Most of the neonates admitted to CIRENA (73%) had
²2,500 g 4 weight at birth.

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El desarrollo de
los cultivos celulares in vitro se originó en los trabajos
de Harrison y Carrel en relación con las perspectivas del
transplante de órganos1,2. Su aplicación
en la investigación médica adquirió
enorme importancia en los trabajos de Enders, Weller y Robbins,
quienes descubrieron que el virus de la
poliomielitis se podía replicar en cultivos de células in
vitro provenientes de tejido embrional de riñón
humano y otros órganos3. Este hecho condujo al
descubrimiento de muchos virus y al desarrollo de vacunas contra
la poliomielitis y el sarampión entre
otras4,5.

En las últimas dos décadas, la metodología de los cultivos celulares in
vitro ha visto aplicación en un campo muy amplio de la
investigación biomédica. El costo y la
dificultad cada vez mayores de investigar en animales de
experimentación in vivo ha estimulado la adopción
de los cultivos celulares in vitro. Los estudios experimentales
in vivo en animales de laboratorio
presentan limitaciones particulares no sólo por la
sensibilidad creciente que despiertan en grupos
sociales orientados a proteger a los animales y a conservar
las especies, sino también por razones económicas.
Estas, son obviamente determinantes en países con escasos
recursos para los
estudios científicos. En los últimos 50
años, la tecnología de los
cultivos de células in vitro ha tenido un crecimiento
extraordinario y ofrece una alternativa muy eficaz a la
experimentación con animales, para el desarrollo de las
investigaciones biomédicas. Hsu6
resumió las ventajas de los sistemas de
cultivos celulares. Aunque su aplicación más
importante se ha visto en el estudio de los virus en los aspectos
básicos, epidemiológicos, clínicos y de
desarrollo de vacunas, su contribución al avance de la
investigación en otras áreas de la medicina y la
biología
ha sido muy significativa. Si bien es cierto que el uso de
animales es aún imprescindible para algunos tipos de
experimentación médica, hay muchas situaciones en
las que la tecnología de las células vivas in vitro
puede reemplazar de manera muy eficiente a los
primeros.

Por otra parte, hay gran cantidad de estudios que son
posibles de realizar mediante los cultivos celulares in vitro.
Por ejemplo, la replicación y transcripción de
ácido deoxirribonucleico, síntesis
de proteínas,
hormonas y
enzimas, metabolismo
energético, transformación celular e
investigación en citogenética, y en el
conocimiento de los mecanismos de la carcinogénesis.
Es de considerable importancia e interés,
la introducción de la tecnología de
fusión
celular in vitro de especies diferentes (hibridización)
que condujo al desarrollo tecnológico de los anticuerpos
monoclonales y a todo un nuevo campo de estudio dentro de la
genética7-9.

Los cultivos celulares primarios son el crecimiento
inicial de las células extraídas de un tejido.
Estos cultivos conservan las propiedades de las células
iniciales en los primeros dos o tres subcultivos, pero el
crecimiento celular se agota después de más
subcultivos y/o las células pierden algunas de sus
características biológicas. Los cultivos celulares
primarios derivados de tejido pulmonar normal o dérmico se
convierten en líneas celulares diploides de fibroblastos
de crecimiento finito que permiten 20 ó más
subcultivos antes que decline su crecimiento. Los cultivos
celulares originados en tumores malignos se pueden multiplicar
infinitamente y dar lugar a líneas celulares de
crecimiento continuo ("inmortales")10.

El empleo de la
tecnología de los cultivos celulares ha sido posible por
el establecimiento de los bancos de
células que mantienen congeladas en nitrógeno
líquido (-190º C) una gran diversidad de
líneas celulares y de crecimiento continuo a
disposición de la comunidad
científica mundial. El más importante es el
American Type Culture Collection (ATCC) en Rockville, Maryland,
que posee en la actualidad más de 2,500 tipos de
líneas celulares e hibridomas, que se derivan de 40
especies distintas de animales y muchas de origen
humano.

Las líneas celulares diploides y de crecimiento
continuo, no cubren la susceptibilidad necesaria para el
aislamiento de todos los virus que se asocian con infecciones
limitadas al hombre.
Solamente los cultivos primarios de células epiteliales
que se derivan de tejido renal de primate no-humano (e.g.,
Rhesus), presentan esta aptitud11,12. Su alto costo no
permite adaptarlos de rutina para estudios de virus en medios con
bajos recursos económicos. Los cultivos celulares que se
hacen a partir de tejido renal neonatal humano postmortem (CRH)
son una excelente opción para tal fin, por su gran
susceptibilidad para el aislamiento de todo tipo de virus de
infecciones propias del hombre13 y su menor costo. Por
ejemplo los adenovirus, que tienen gran importancia en la
etiología de pneumonías fatales en niños,
se aíslan con mayor eficiencia en
este tipo de cultivos celulares que en cualquier otro. La
utilidad de
estos cultivos celulares en el estudio de las infecciones por
virus entéricos también la destacaron Ramos-Alvarez
et al. en México.
Otros autores además han enfatizado la preferencia de CRH
para el aislamiento de adenovirus14-17. Asimismo se
publicaron varios estudios epidemiológicos y
clínicos hechos en Cali con esta metodología, sobre
infecciones virales gastrointestinales, respiratorias y del
sistema nervioso
central en niños, y del sistema
genitourinario en mujeres18-22. Esta ventaja se
extiende al estudio de los adenovirus como modelo de
carcinogénesis viral pues son los únicos virus
humanos en los que se ha demostrado su capacidad de producir
cáncer cuando se inoculan en hamsters23. Los
cultivos celulares primarios de tejido renal humano postmortem
constituyen, por tanto, un excelente sistema para estudios
biomédicos.

La viabilidad de las células extraídas de
tejido de animales de experimentación es casi del 100%.
Esta alta viabilidad celular se debe al estado
fisiológico normal del animal y al corto tiempo entre
el sacrificio y la obtención del tejido24. No
se han encontrado publicaciones sobre viabilidad celular in vitro
de tejido renal neonatal humano postmortem en relación con
enfermedad perinatal. El presente estudio pretende conocer las
posibles relaciones entre los antecedentes de enfermedad
perinatal y la viabilidad de las células renales
cultivadas in vitro a partir de tejido neonatal postmortem en el
Hospital Universitario del Valle (HUV) en Cali, Colombia, para
mejorar la eficiencia de este recurso.