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Uso de la radiación solar (UV-A y temperatura) en la inactivación del Vibrio cholerae en agua para consumo humano. Factores que condicionan la eficiencia del proceso




Enviado por Yezid Solarte


Partes: 1, 2

    Publicación original: Colombia Médica, 1997; 28:
    123-129 – ISSN 1657-9534,
    Reproducción autorizada por: Corporación Editora Médica del Valle,
    Universidad del Valle, Cali, Colombia

     

    RESUMEN

    Se inoculó Vibrio cholerae
    en botellas de vidrio, en botellas de plástico y en bolsas plásticas que
    contenían agua; se expusieron al sol durante 6 horas y se midió la temperatura
    y la radiación UV-A. Al alcanzar 30°, 35°, 40° y 45° C se tomaron muestras para
    determinar el nivel de los vibrios y de los coliformes termotolerantes. Se
    determinaron los impactos de temperatura, turbiedad, recipiente y concentración
    de los vibrios. Esta bacteria se logró inactivar al alcanzar gradualmente 45° C
    y 6 horas de exposición al sol; con temperatura constante de 30° C se
    necesitaron 100 Wh/m2; y con 50° C sólo 10 Wh/m2. La
    turbiedad es un factor que interfiere con el proceso de SODIS; con 40 UNT se
    necesitaron 105 Wh/m2, con 23 UNT, 91 Wh/m2 y con 5 UNT,
    36 Wh/m2 de UV-A para lograr 100% de mortalidad. No se encontraron
    diferencias con el tipo de recipiente usado, siempre se logró 100% de
    inactivación; tampoco se observaron diferencias en la inactivación con
    diferentes concentraciones del vibrio. Se lograron altas correlaciones entre la
    inactivación de coliformes termotolerantes y vibrios (0.86 y 0.99).

    Palabras claves: Vibrio
    cholerae. Coliformes termotolerantes.

    Agua potable. Desinfección
    solar. Radiación solar. Luz ultravioleta.

    ********
    El cólera ha tomado importancia en América, pues se estableció desde 1991 y al
    final del mismo año se extendió por 16 países1. En Colombia, ha
    causado varias epidemias con pérdidas humanas y económicas; el grupo humano más
    afectado está entre 15-44 años2.

    El cólera, enfermedad que
    causa diarreas muy intensas y se considera como una de las infecciones
    intestinales más severas1,3, es producida por el Vibrio cholerae que
    presenta dos biotipos: El clásico y El Tor. En Colombia se encontró que 99.1%
    de los aislados corresponden al subtipo Inaba y el restante al subtipo Ogawa2.
    El biotipo El Tor es mucho más resistente a las condiciones ambientales y
    sobrevive más tiempo en el agua. Se ha visto que estas bacterias pueden
    sobrevivir en el agua entre 2 y 20 días, a temperaturas entre 20° y 30° C,
    aunque esto depende de la presencia de otros microorganismos y de la
    composición química del agua.

    Casi todas las bacterias
    son sensibles a la aplicación combinada de radiación y calor debido a los
    efectos sinérgicos que ofrecen ambas medidas4. Por tanto, una
    aplicación combinada de estos dos procesos en el tratamiento del agua, permite
    una alternativa nueva para desinfectar el agua, sobre todo en zonas remotas de
    difícil acceso4,5.

    La desinfección solar
    (SODIS) se basa en el uso de botellas de dos litros o bolsas plásticas de 3
    litros que se llenan con agua y se exponen durante 6 horas a la radiación
    directa del sol. Con este tiempo de exposición se lograron reducciones entre
    92% y 99% de coliformes termotolerantes6,7 que son indicadores de
    contaminación fecal. Por tanto, y si se considera el nivel de bacterias
    patógenas que es mucho menor, se podría lograr una reducción hasta niveles
    insignificantes para la salud humana.

    En la estación de campo del
    Instituto de Investigación y Desarrollo de Agua Potable, Saneamiento Básico y
    Conservación del Recurso Hídrico (CINARA), se han hecho pruebas de laboratorio
    y de campo, con los coliformes termotolerantes como indicadores de eficiencia
    en la SODIS, con lo que se determinaron la tasa de mortalidad, los niveles de
    radiación solar necesarios para inactivar esos gérmenes y la temperatura
    crítica que puede causar la mayor mortalidad de bacterias7-9.

    Con los resultados
    obtenidos, se decidió investigar algunos factores que interfieren en la
    inactivación del V. cholerae y determinar el uso potencial de la SODIS en el
    control del cólera, pues este tipo de tecnología es universalmente disponible,
    de costo y sostenimiento bajos, y se emplea en cualquier sitio, aunque presenta
    algunas limitaciones debidas a las condiciones atmosféricas, la turbiedad del
    agua, el color, el espesor de las paredes y la forma del recipiente10.

    En este artículo se
    presentan los resultados, bajo condiciones de laboratorio y se discute el uso
    potencial que podría tener la SODIS en la inactivación del V. cholerae.

    MATERIALES Y MÉTODOS

    Los datos de este
    documento, hacen parte de un programa de investigación (SODIS) que se realiza
    simultáneamente en varios países del mundo y es coordinado por el Swiss Federal
    Institute for Environmental Science and Technology (EAWAG/SANDEC) y donde
    CINARA participa en la evaluación tanto en el laboratorio como en el campo. La
    parte experimental se realizó en la Estación de Investigación de CINARA,
    durante el período de agosto 1995 a abril 1996.

    Medidas físicas. La
    turbiedad del agua se midió con el método nefelométrico mediante un
    turbidímetro Hach 2100A, cuyo valor se da en unidades nefelométricas de
    turbiedad (UNT). Los sólidos suspendidos se midieron con el método gravimétrico
    (mg/l) y filtros de fibra de vidrio con un tamaño de poro nominal de 1.2 µm11.
    La intensidad de radiación UV-A (Watt.hora/m2) se midió cada 10
    minutos con un sensor radiométrico tipo Macam SD 104A-Cos, con una respuesta
    espectral de 320-400 nm (luz ultravioleta A, UV-A), este sensor se conectó a un
    data logger y la temperatura se medió con una termocouple tipo J.

    Pruebas microbiológicas. Se
    utilizó una cepa del biotipo El Tor de V. cholerae aislada en el Departamento
    de Microbiología de la Universidad del Valle. Esta cepa se mantuvo en caldo
    nutritivo a 35.5° C durante 24 horas y de este medio se inoculó 1 ml en cada
    botella, antes de la exposición a la radiación solar.

    Antes y después de la
    exposición solar se inocularon 5 tubos, para cada concentración de muestra:
    0.1, 1.0 y 10 ml que contenían caldo de peptona alcalina, para determinar el
    número más probable (NMP). Estos tubos se incubaron durante 8 horas a 35.5º C y
    de los tubos con crecimiento bacteriano, se tomó una muestra con un asa que se
    inoculó en cajas de Petri con agar TCBS; estas cajas se incubaron por 24 horas
    a 35.5º C. Algunas colonias típicas para V. cholerae de cada caja se
    identificaron con cinco pruebas bioquímicas estándar: TSI, LIA, úrea, motilidad
    e indol11,12.

    Con los resultados de estas
    pruebas bioquímicas se determinó el número más probable (NMP). Las pruebas se
    realizaron con aguas de diferentes turbiedades, y en recipientes y condiciones
    ambientales distintas. Las exposiciones a la radiación solar se hicieron entre
    las 09:00 y las 17:00 h.

    Impacto de la temperatura.
    Una botella de vidrio de 1.5 litros y una botella de 2 litros de plástico se
    pintaron totalmente de negro para evitar el paso de la luz solar y permitir al
    mismo tiempo mayor acumulación de la temperatura. A cada botella completamente
    llena de agua, se adicionó 1 ml de V. cholerae lo que arrojó un resultado de
    11,000 NMP/100 ml. Cada 15 minutos se midió la temperatura del agua en los
    recipientes, cuando se alcanzó 35° C, 40° C, 45° C, la temperatura máxima (47°
    C) y al final de la prueba se tomaron muestras para sembrarlas en tubos con
    peptona alcalina.

    También se determinó el
    impacto de dos temperaturas constantes (con exposición al sol) en la mortalidad
    de los vibrios; para esto se usaron tubos de cuarzo de 30 ml y un baño
    termostato calibrado a 30° ó 50° C.

    Influencia de la turbiedad.
    Se realizaron tres pruebas con sus respectivas réplicas, con diferente calidad
    del agua (nivel de turbiedad y sólidos suspendidos) y en días distintos, lo que
    resultó en una condición experimental variable. Para las pruebas con agua cruda
    (40 UNT) y prefiltrada (23 UNT) se usaron cuatro botellas plásticas y cuatro
    botellas de vidrio, mientras que para agua filtrada (5 UNT) se utilizó sólo una
    botella de cada tipo para tomar la muestra respectiva. Todas las botellas se
    pintaron de negro en la parte inferior en un plano longitudinal. Las muestras
    para las dos primeras pruebas se tomaron al comienzo (22° C), al alcanzar el
    agua 45° C, al final de la prueba y al día siguiente; una vez que se alcanzó la
    temperatura deseada, se retiró una botella de cada tipo. Para la última prueba,
    las muestras se tomaron al comienzo, al alcanzar el agua 30° C, 40° C, 45° C,
    50° C y al final del experimento.

    Influencia del tipo de
    recipiente. La exposición a la radiación solar se realizó con botellas de
    vidrio (1.5 litros), plástico (2 litros) y bolsas plásticas (3 litros), con el
    procedimiento antes descrito.

    Influencia de la concentración
    de V. cholerae. Se usaron cuatro botellas plásticas (2 litros), a las cuales
    se les agregó agua y diferentes concentraciones iniciales de V. cholerae:
    2.5 x 106, 2.5 x 105, 2.5 x 104 y 2.5 x 103
    NMP/100 ml (la concentración final en el volumen total estuvo entre 5 x 104
    y 5 x 107 NMP). Las temperaturas se midieron cada 15 minutos y
    las muestras se tomaron al comienzo 22° C, a 30° C, 35° C, 40° C, 45° C y
    al final de la prueba.

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