Caracterización de flora bacteriana en cavidad bucal familia colubridae, genero Mastigodryas

Resumen

Se realizó recolección de un
espécimen de lafamilia colubridae, genero
Mastigodryas, especie M. boddaertiicapturada en
estado salvaje en losalrededores del cañón del
conveimacon el objetivo de tomar muestras de la cavidad bucal
para la caracterización de la flora bacteriana presente en
este sitio anatómico y establecer lospatrones de
sensibilidad frente a algunos antibióticos de uso
frecuente en nuestro medio para las infecciones producidas por
estos microorganismos. Todas las bacterias aisladas son
consideradas patógenas para el ser humano y los resultados
hasta ahora obtenidos permiten sugerir el uso de Amikacina,
tetraciclina, cloranfenicol, Penicilina Cristalina y/o
Ciprofloxacina en los tratamientos de las víctimas de los
tratamientos profilácticos de las víctimas de
Ofidismo.

Introducción

Se conoce que las bacterias gracias a su ubicuidad
pueden habitar diferentes medios, uno de ellos -muy importante-
es la boca de las serpientes venenosas, donde múltiples
investigaciones comprueban la colonización de gran
variedad de microorganismos tanto aerobios como anaerobios que en
el momento de una mordedura de serpiente u ofidismo, pueden
desencadenar en el paciente serias complicaciones secundarias e
infecciones bacterianas. Las serpientes que viven en cautiverio
son responsables de un significativo número de mordeduras
y entre sus víctimas se encuentran herpetólogos,
personal auxiliar de serpentarios, veterinarios, biólogos,
estudiantes, guardias de zoológico, coleccionistas,
encantadores de serpientes, culebreros, etcétera. Por lo
anterior, son muy importantes las investigaciones que permitan no
solo conocer las bacterias potencialmente responsables de estas
infecciones sino sus patrones de sensibilidad y así
sugerir la profilaxis antibiótica más apropiada a
seguir.

OBJETIVOS

• Realizar la caracterización general de las
  bacterias presentes en la cavidad bucal de
  colúbridos

• Establecer las pruebas bioquímicas y los
  antibiogramas para los microorganismos de
  interés

• Contribuir en el establecimiento de un protocolo
  para el manejo de las victimas de ofidismo

• Establecer los posibles organismos patógenos
  presentes en el órgano de Jacobson y los procesos
  patógenos que se pueden desarrollar en el
  reptil

JUSTIFICACIÓN

En ofidismo, los trabajos de investigación se han
centrado en la identificación de los componentes del
veneno, los efectos en el organismo de los individuos afectados,
y la producción y evaluación de sueros
antiofídicos. Sin embargo, se considera que otros factores
relacionados también con la ofidiotoxicosis, como la
inoculación en los tejidos de microorganismos provenientes
de cavidad oral y veneno de las serpientes y sus efectos, han
sido subestimados y de alguna manera enmascarados por las
acciones propias del veneno.

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• Fuente: radio caracol

Los habitantes de poblados próximos a la
ciénaga de Betancí, en la zona rural de
Montería, al Norte de Colombia, están alarmados y
atemorizados por la presencia en la zona de una culebra de un
tamaño jamás visto en la región.

La ciencia aun no reconoce ejemplares de tan
extraordinario tamaño

José Guevara habitante de la zona dijo que la
serpiente mide aproximadamente 12 metros de largo y 20
centímetros de grueso.

La culebra de acuerdo a los campesinos de la
región, hasta el momento aparentemente no ha provocado
ningún accidente, pero si mucho pánico entre los
habitantes de esta zona del departamento de
Córdoba.

Los campesinos le pidieron ayuda a las autoridades y
organismos de socorro de Montería para que cacen este
reptil y superar de esta manera la situación de
miedo.

• Fuente: El tiempo sábado 13 de
  nov 2010

Colombia, en alerta por mordeduras de
serpientes

A julio del 2010 se registraron 1.945 casos, 139
más que en igual periodo del 2009.

Ante el riesgo de que aumenten las
mordeduras de serpientes, producto del invierno, el Instituto
Nacional de Salud (INS) y el Ministerio de la Protección
Social decidieron mantener hasta el 31 de diciembre la emergencia
sanitaria. La preocupación se fundamenta en el hecho de
que el año pasado no se contó con disponibilidad
suficiente de suero antiofídico. Según datos del
Instituto, durante el 2009 se necesitaron 34.030 ampollas del
suero para atender los cerca de 3.403 accidentes ofídicos
que se presentaron en el país. Y a julio de este
año sólo había 10.691 dosis disponibles, de
las 19.450 que se necesitaban.En ese mismo mes se notificaron
1.945 casos, mientras que en igual periodo del 2009 se reportaron
1.806. Es decir, 139 mordeduras más. Según
autoridades, no hay suero suficiente. En el municipio de Sucre
(Sucre) sólo cuentan con seis ampollas de suero
antiofídico. "Las culebras buscan zonas secas en
áreas altas de las casas" dice la alcaldesa de esa
localidad, Elvira Mercado.

Los departamentos más afectados por
estos accidentes son: Amazonas, Vaupés, Guaviare, Arauca,
Casanare, Antioquia y Norte de Santander.El director del INS,
Juan Gonzalo López, sostiene que las secretarías
departamentales de salud y las EPS deben cuantificar
cuánto suero hay y dónde está, para que su
distribución sea oportuna.

Marco
teórico

La base de Agar sangre es un medio utilizado para el
aislamiento y cultivo de una amplia variedad de microorganismos,
adicionado de sangre es útil para el cultivo de
microorganismos fastidiosos. Este medio también es
conocido como BAB por sus siglas en inglés.

La base de Agar sangre generalmente es suplementada con
sangre de carnero, conejo o caballo al 5-10% para aislar cultivar
y estudiar reacciones hemolíticas de una amplia variedad
de microorganismos patógenos.

Este medio está especificado en los
Métodos Estándar para el análisis de
alimentos. La infusión de músculo de corazón
y la peptona de caseína proporcionan la fuente de
nitrógeno, carbono, aminoácidos y proteínas.
El extracto de levadura provee vitaminas y aminoácidos
esenciales. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico y el agar es usado como agente solidificante.
Este medio está relativamente libre de azúcares
reductores los cuales interfieren en las reacciones
hemolíticas de estreptococos. El patrón de las
reacciones hemolíticas puede variar dependiendo del tipo
de sangre

ANTIBIOTICOS

Un antibiótico ha sido definido como una
sustancia química producida por un microorganismo capaz de
inhibir el desarrollo de otros microorganismos. Los
antibióticos modificados por manipulaciones
químicas aun se consideran como tales. Un agente
antimicrobiano es activo contra los microorganismos y puede ser
producido en forma natural por microorganismos o
sintéticamente en el laboratorio. El término agente
quimioterápico ha sido empleado para referirse a agentes
antimicrobianos sintéticos o no y también se
refiere a agentes que actúan contra células humanas
como inmunomoduladores y drogas antitumorales. Los
términos agente antiviral y agente antimicótico son
términos más específicos, incluidos dentro
de la categoría más general de agentes
antimicrobianos.

El aislamiento de un agente infeccioso a partir de un
paciente no es con frecuencia suficiente para establecer la
terapia adecuada. Muchas bacterias presentan resistencia a los
agentes antimicrobianos y algunos virus han desarrollado
resistencia a los agentes antivirales más
actuales.

ANTIBIOGRAMA

Esta prueba se realiza en agar muller hilton
generalmente con una siembra masiva de un microorganismo con el
fin de establecer la resistencia o sensibilidad bacteriana en
respuesta a una serie de antibióticos; este proceso se
lleva a cabo mediante la medición del alo que el
sensidisco impregnado con el antibiótico produce en la
siembra.

El primer objetivo del antibiograma es el de medir la
sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la
responsable de una infección a uno o varios
antibióticos

COLUBRIDAE

Los colúbridos o culebras
(Colubridae) son una familia de serpientes. Incluye
aproximadamente unas 2.500 especies, unas 5/6 partes de todas las
serpientes.1 Es de distribución cosmopolita. Vulgarmente
se denomina culebra a todo ofidio inofensivo para el ser
humano, aunque realmente sólo es apropiado para los
miembros de esta familia, que no es un grupo natural.

CARACTERÍSTICAS

Los colúbridos se caracterizan por tener la
cabeza recubierta de escamas grandes de disposición
típica. Las escamas dorsales y laterales del cuerpo son de
contorno aproximadamente romboidal; en la parte ventral presentan
una sola fila de escamas ensanchadas.

Son generalmente diurnos, con ojos bien desarrollados y
pupila principalmente circular. La mayoría son terrestres,
pero hay también especies excavadoras, anfibias,
acuáticas, arborícolas e incluso
planeadoras.

Su tamaño oscila entre los 20 ó 30 cm de
Eirenis lineomaculatus del Próximo Oriente, hasta
los 3 m de Spilotes pullatus de centro y
Sudamérica

EL ÓRGANO VOMERONASAL U ORGANO DE
JACOBSON

El órgano está involucrado en ambos la
comunicación química social por medio de las
feromonas y en la caza de presas. 

 Los órganos se encuentran por debajo de la
cavidad nasal.  Esta localización es similar a
los mamíferos, pero en las serpientes los órganos
se comunican  ventralmente con la boca y no dorsalmente
con la nariz.  Los estímulos externos son
recolectados por la lengua y transportados hacia atrás al
órgano vomeronasal.  No existe un mecanismo
vascular de bomba para atrapar a los estímulos como en los
mamíferos, pero se ha sugerido la existencia de una bomba
mecánica.  El lumen del órgano
está ocupado por un "cuerpo de hongo" esférico
cubierto por un epitelio ciliado este epitelio contiene neuronas
receptoras bipolares similares a las del epitelio olfatorio
central.  El epitelio sensorial del VNO recubre la
superficie interna de la cavidad y es generalmente más
grueso y elaborado que el de los mamíferos.  Las
proyecciones centrales del VNO son hacia el bulbo olfatorio
accesorio y de allí a una región especial,
el nucleus sphericus, que se piensa es
homólogo a la amígdala media de los
mamíferos.  El rango de las funciones del VNO
documentado en las serpientes es mayor que en los
mamíferos.

ESPECIE DE ESTUDIO

La especie M. boddaertii de
clasificación aglifa, es decir, no venenosa al no poseer
veneno o colmillos inoculantes, esta especie mata su presa por
constricción, tne una variada gama de coloración
que puede ir desde el café oscuro hasta el verde claro
conservando en todos los casos su característicabanda
amarillenta que recorre su cuerpo longitudinalmente, esto de
acuerdo al ambiente en que se encuentre como hierba o
vegetación muerta o dependiendo también del habitad
como bosque seco o selva húmeda.

Esta especie puede alcanzar los 70 cm en machos y hasta
1 metro en el caso de las hembras, se alimentan principalmente de
insectos, peses, pequeños anfibios y mamíferos como
roedores así como de aves y sus huevos

Distribución geográfica
de la M.boddertii en sur América

Esta especie se distribuye en el continente en zonas de
media altitud con clima cálido y de bajos niveles de
humedad, la presencia de depredadores como serpientes venenosas
del genero bothrops, crotalus o bothriopsis que ocupen su mismo
nicho ecológico y que compitan por las mismas presas suele
ser también un aspecto importante en su
distribución

Tabla No. 1: taxonomía

Tabla No. 2: datos generales

Tabla No. 3: muestreo

Metodología

Se realizo la captura de en estado salvaje de un
individuo de la familia colubridae, el cual fue trasladado hasta
los laboratorios de microbiología de la universidad del
Tolima para realizar el muestreo de frotis de garganta y efectuar
la siembra de la muestra para el cultivo de los
microorganismos

Se tomaron muestras de frotis de la cavidad bucal del
individuo con un hisopo esterilizado

Se realizo una siembra masiva en agar sangre

Crecimiento de la muestra Después de 24
horas:

No se observo hemolisis (hemolisis alfa), se observo una
distribución homogénea de coloniasen la caja de
petry

Descripción de las colonias:

Se encontraron colonias mucoides planas brillantes, de
tamaño mediano que ocupan cerca del 40 % de la caja, otras
de forma irregular, elevadas y de color amarillento que ocupan el
30 % y otras rugosas de tamaño pequeño que se
distribuían en un 30 % de la superficie.

Se marcaron y se fijaron muestras en placas

Tinción de Gram

• Crista violeta por 1 minuto

• Lavado

• Lugol por 1 minuto

• Lavado

• Alcohol cetona por 30 segundos

• Lavado

• Safranina

• Lavado

• Secado al ambiente

RESULTADOS:

En las tres placas que se montaron se observaron
mayormente bacilos gram negativos en medida del 70% que
podrían corresponder a bacterias presentes en el ambiente
natural del colúbrido o al de sus presas habituales, lo
que finalmente contribuiría a que la presencia de restos
de sus presas y su descomposición a si como el contacto
con ambientes húmedos y fuentes de agua contaminada
daría como resultado las condiciones indicadas para la
proliferación de bacterias.

Hipótesis

Teniendo en cuenta algunas de las necesidades
básicas para la existencia de cualquiertipo de vida
bacteriana, podría decirse que la cavidad bucal de todas
las serpientes al margen de ser venenosas o no y por el hecho de
ser carnívoras ofrece la condiciones necesarias para la
proliferación cotidiana de estos microorganismos; la
presencia en la cavidad bucal de elementos que pueden satisfacer
para las bacterias sus necesidades metabólicas
(respiración y alimentación) así como las
condiciones ideales de fijación, ambiente y
reproducciónles otorgan un habitad ideal en el que
encuentran gran cantidad de biomoleculas necesaria para su
existencia tales como:

• Iones minerales: PO4, SO4, Ca, Na y Cl.

• Carbohidratos

• Proteínas

• Ácidos nucleicos

• Grasas

Además de zonas en las que se presentan
condiciones como una humedad relativa de alrededor de un 80% y
bajos niveles de CO2.

Por otra parte, los terrarios que albergan las
serpientes, su alimentación, y el contacto de su lengua
con el medio externo influyen en el tipo de flora bacteriana
bucal, También se especula que la flora bucal de los
colubridos refleja la flora fecal de su presa; por lo que se sabe
que en estudios realizados en muestras aisladas de heces de
ratón (Mus musculus) presa habitual de la
Mastigodryas boddaerti se aisló K.
pneumoniae, cepa que también se aisló de la
cavidad bucal de C. cumanensis, lo que hace pensar que
esta hipótesis sea cierta; sin embargo debe hacerse un
estudio con muestreo estadísticamente más
significativo.

Teniendo en cuenta la alta presencia de bacilos gram-,
los hábitos alimentación de la especie y lo
ecosistemas que esta habita se propone a presencia de:

Morganella morganii

es una especiebacteriana de la
familiaEnterobacteriaceae, bacilosgram negativos.
Comúnmente habitan en el medio ambiente y el tracto
intestinal de humanos, mamíferos y reptiles como flora
saprófita y ocasionalmente causantes de infecciones
urinarias y otras infecciones nosocomiales. Son sensibles a
terapias antibióticas como Amikacina, Ceftriaxona,
Ciprofloxacina y Imipenem

Aeromonas hydrophila

Es una eubacteriaheterótrofaGram negativa, que
vive principalmente en zonas con un clima cálido. Esta
bacteria también puede vivir en aguas dulces, saladas,
estuarianas, cloradas y no cloradas. A. hydrophila
también puede sobrevivir en medios aerobios y anaerobios.
Es capaz de digerir materiales, como por ejemplo la gelatina o la
hemoglobina.

Debido a su estructura, Aeromonas hydrophila es
muy tóxica para numerosos organismos. Cuando entra dentro
del cuerpo de su víctima, viaja por la sangre hasta el
primer órgano que encuentra. Produce la enterotoxina
tóxica aerolisina (ACT), una toxina que puede provocar
daños tisulares. A. hydrophila, A.
caviae y A. sobria son conocidas como
patógenos oportunistas, es decir, sólo infectan
huéspedes con una respuesta inmunitaria debilitada. A
pesar de que A. hydrophila está considerada una
bacteria patógena, los científicos no han sido
capaces de demostrar que es la causa real de algunas de las
enfermedades con que está asociada. Se cree que contribuye
a la infección de estas enfermedades, pero que no las
causa ella misma.

En el hombre se les ha implicado en cuatro tipos de
procesos:

1. Infecciones de herida o celulitis por
exposición al agua o suelo.

2. Cuadros diarreicos agudos, de corta duración,
que pueden ser coleriformes o disentéricos.

3. Septicemia. Suele asociarse a enfermedades
hepatobiliares, pancreáticas o procesos malignos, en
especial leucemias agudas.

4. Otros. Se trata de procesos raros e incluyen
endocarditis, infecciones urinarias, osteomielitis, meningitis,
otitis, peritonitis e infecciones de tejidos blandos.

Citrobacter

Junto con Enterobacter, Klebsiella y
Escherichia forma el grupo coliforme de bacterias
entéricas.

Son bacterias móviles, fermentadores variables de
la lactosa, algunos son citrato positivos y otros negativos,
algunas especies tienen antígenos somáticos O,
flagelar H y de superficie K, lo que hace que den reacciones
cruzadas con otras Enterobacteriaceae.

El género Citrobacter es un grupo de
bacilosgramnegativosaerobios que se encuentran frecuentemente en
el agua, suelo, comida y el tracto intestinal de animales y
humanos como flora saprófita. Se sabe que estos
microorganismos pueden producir infecciones importantes,
especialmente en huéspedes inmunodepresivos. Son
organismos ubicuos y son causa frecuente de infecciones en el
hombre, en especial infecciones urinarias, meningitis neonatal y
abscesoscerebrales. Es uno de los patógenos más
importantes en unidades de cuidados neonatales hospitalarios.
Destruyen las microvellosidades, formando lesiones muy
características denominadas de adherencia y
eliminación.

Identificación de los organismos de
interés

La identificación presuntiva de los
géneros y especies más importantes se
efectúa sobre la base del conocimiento de una serie de
propiedades bioquímicas, cuya determinación se
facilita por el uso de un grupo reducido de medios combinados,
que permiten obtener respuesta visible a los procesos
metabólicos conocidos

Pruebas metabólicas:

Tabla No. 4: Morganella morganii

Tabla No. 5: Aeromonas hydrophila

Tabla No. 6: Citrobacter

V= variable según la especie

A= acidifica

Antibióticos de acción en los
microorganismos de interés

Para el manejo de la proliferación bacteriana se
recomienda el uso de antibióticos específicos
según las especies encontradas o propuestas según
el presente trabajo.En pacientes de ofidismo es importante tener
un manejo adecuado sobre la especie de serpiente agresora, y el
tiempo de reacción medica.

ANTIBIOGRAMAS

Tabla No. 7: Morganella morganii

Tabla No. 8: Aeromonas hydrophila

Tabla No.9: citrobacter

Tabla No. 10: métodos de acción de
antibióticos de interés.

Estudio del
órgano de Jacobson

El órgano de Jacobson ubicado en la parte
superior de la cavidad bucal yabierto a esta, es sin duda un
lugar que presenta un alto porcentaje posibilidades de presentar
una proliferación bacteriana que para este caso no se
tendrá en cuenta con respecto a los riesgos que representa
en accidentes ofídicos o zoonosis, sino que se estudiara
con respecto a los efectos patógenos que la presencia de
microorganismos en este órgano podrían
desencadenar.

Al ser una cavidad recubierta de una capa sensible de
epitelio, con una importante irrigación sanguínea y
con células quimiorreceptora y neuronas se convierte en un
órgano sensible a la recepción de moléculas
no volátiles de origen básicamente proteico y
hormonas.

Estas moléculas provenientes del flujo vaginal,
orina y sudoraciones son captadas por la serpiente mediante
movimiento de su lengua que la trasporta hacia la cavidad del
órgano de jacopson.

A pesar de que este órgano solo tiene una
influencia subconsciente en organismos mas evolucionados como los
mamíferos, en los reptiles y en especial en las serpientes
sus estímulos son utilizados de forma mas eficiente
consciente e inconscientemente.

Ejemplo de esto es la conducta de caza de las especies
de la familia crotalus cuyo veneno con capacidades
enzimáticas, proteolíticas y neurotóxicas
producen en sus presas la liberación de la orina con su
consecuente exposición de hormonas que son captadas por la
víbora que es guiada a la distancia por el órgano
de Jacobson hasta su presa muerta.

Debido a esto se considera que la proliferación
bacteriana en el órgano de Jacobson en condiciones
especificas de lesiones o laceraciones, deficiencias en la dieta
o inmunodeficiencia podrían acarrar la aparición de
procesos infecciosos

De acuerdo a las pruebas realizadas y teniendo en cuenta
el comportamiento de los microorganismos estudiados anteriormente
se presenta una alta posibilidad de la presencia de:

• 1. A. hydrophila:

Que teniendo en cuanta su comportamiento y
requerimientos puede de desencadenar procesos infecciosos en
tejidos blandos,produciendo septicemia
hemorrágicaposiblemente trasmitido por una ácaro o
parásitoshematófagos (Ophyonissus
natricis).

La A. hydrophila además en condiciones de
inmunodeprecion puede causar Estomatitis infecciosa: producida
por estrés, trauma, Infección por flora bucal
oportunista; Para lo cual el tratamiento más adecuado es
gentamicina.

• 2. Citrobacter

Microorganismo que puede desencadenar Septicemia
cutánea ulcerativa:

• 3. Pseudomonas

Las bacterias del género Pseudomonas se definen
como bacilos gramnegativos, casi siempre móviles
porflagelos polares, aerobios estrictos.

Son bacterias muy repartidas en la naturaleza,
suhábitat fundamental es el suelo y el agua, y de
ahí pasan a todos los seres vivos, vegetales, animales han
sido aisladas como patógenas de serpientes y suelen atacar
el sistema nervioso por lo que al estar presente en el
órgano de Jacobson podrían causar Meningitis graves
y abscesos cerebrales

Tabla No. 10: Pseudomonas

aeruginosa

HIPÓTESIS

La presencia de microorganismo de carácter
bacteriano en la cavidad bucal de colúbridos podría
ser un buen indicio de la presencia de algunos tipos
específicos de bacterias que bajo condiciones favorables
producirían enfermedades generalmente con consecuencias en
el sistema nervioso involucrado en las funciones del
órgano de Jacobson, con lo que cambiaria el comportamiento
natural de la serpiente en los comportamiento en los utiliza
normalmente este órgano, como la reproducción, y la
caza, cambios que disminuirías sus capacidades de
supervivencia

Conclusiones

1.En la cavidad bucal del Colubrido estudiado, se
encuentran diversos microorganismos con predominio de bacilos
Gram negativos potencialmente patógenos para el ser
humano.

2.La mayoría de los posibles
microorganismos son enterobacterias que por las condiciones
químicas y ambientales encuentran en la cavidad bucal de
colúbridos las condiciones ideales para su
existencia

3.La flora bacteriana bucal de las serpientes
depende de factores como; el alimento y el medio ambiente en
general.

4.En la manipulación de las serpientes y
los procedimientos microbiológicos es importante la
antisepsia para evitar la proliferación de microorganismos
potencialmente patógenos

5.Es importante conocer las bacterias presentes
en la cavidad bucal de las serpientes así como el
antibiograma para establecer el antibiótico de
elección en el manejo de la infección

6.Las bacterias aisladas son consideradas
patógenas para el ser humano y los resultados hasta ahora
obtenidos permiten sugerir el uso de Amikacina, tetraciclina,
cloranfenicol y/o Ciprofloxacina en los tratamientos de las
víctimas de ofidismo.

7. la presencia de microorganismos
patógenos en la cavidad bucal de los colúbridos no
es solo perjudicial para las víctimas de ofidismo sino
también para los propios reptiles que pueden experimentar
procesos infecciosos que estas bacterias conllevan

Recomendaciones

• Teniendo en cuenta la regla general sobre la
  asociación de distintos tipos de antibacterianos
  yrecordando que la combinación de dos de estos de
  acción bacteriostática es aditiva,
  podríamos tener en cuenta la asociación de
  algunos de los antibióticos recomendados para mejorar
  el tratamiento frente a los microorganismos
  propuestos.

• De acuerdo a las posibles enfermedades producidas
  por el contacto o mordedura de una serpiente debe tenerse un
  manejo higiénico y un control adecuado del individuo a
  la hora de realizar cualquier tipo de
  procedimiento.

• Teniendo en cuenta lo anterior deben tenerse muy en
  claro los procedimientos adecuados para la recolección
  y manipulación ya sea manual o por medio de pinzas de
  los individuos de interés.

• Toda mordedura debe ser tratado como un accidente
  ofídico grave y potencialmente venenoso; la
  atención médica debe ser inmediata así
  como el control continuo con antibióticos
  medicados.