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Informe de un experimento (extracción de ADN)




  1. Introducción
  2. Material necesario
  3. Procedimiento
  4. Resultados y explicación
  5. Conclusión
  6. Bibliografía

Introducción

La práctica la pudimos realizar en una cocina normal, como se puede realizar en un laboratorio de un centro. La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

Objetivos

-Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su composición con sencillas técnicas.

- Observar la estructura fibrilar del ADN.

- Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades qu?mico-f?sicas del ADN

Material necesario

- Muestra vegetal (cebolla, ajó, tomate, etc.)

- Agua (destilada o mineral)

- Sal de mesa

- Bicarbonato sódico

- Detergente líquido o champú

- Alcohol isoamílico a 0°C

- Batidora

- Nevera

- Colador o centrífuga

- Vaso

- Tubo de ensayo

- Varilla fina

Procedimiento

1.- Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:

  • 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.

  • 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.

  • 5 g de bicarbonato sódico.

  • 5 ml de detergente líquido o champú.

2-. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.

3.- Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Y así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.

4.- Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante.

5.- Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se tiene que dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol va a quedar flotando sobre el tampón.

6- Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.

Monografias.com

Notas:

  • Si se quiere realizar una extracción "profesional" puedes agregar enzimas que lo puede hacer mejor, y el producto que resultaría seria pura.

  • Cuando añadas el alcohol frío debes hacerlo de forma que resbale por las paredes del tubo para que forme una capa sobre el filtrado. Para realizarlo mejor puedes utilizar la varilla de vidrio o una cucharilla para ayudarte.

  • Si se expone por mucho tiempo la muestra vegetal a rayos ultravioletas, esto provoca daños sobre la estructura del ADN, o aplicar ciertos conservantes que puedan provocar efectos sobre la cadena del ADN.

Monografias.com

Resultados y explicación

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.

Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula

El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y el núcleo. También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius.

Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, la solución ablandadora de carne también actúa como una enzima, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN. La solución ablandadora de carne actúa como una enzima.

El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

El proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para muchos procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnología.

Los científicos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se encuentran en las células, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).

El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno de los ingredientes tiene su propia función. La solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. El líquido de lentillas elimina las proteínas que degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN

-EL ADN

El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuo contienen una copia idéntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y por eso hay células con diferentes formas y funciones.

Está formado por desoxirribonucleotidos (A, G, C, T). Que a su vez están formados -D desoxirribosa y un ion fosfato.

La proporción y secuencia de las bases nitrogenadas diferencia a los poli nucleótidos.

El ADN presenta dos niveles de plegamiento que dan lugar a:

Estructura primaria:

Los polinucleótidos se forman entre las bases nitrogenadas de adenia, guanina, citosina y timina por enlaces covalentes de tipo fosfodiester. Así se forma un esqueleto de polidesoxiribosa-fosfato, de forma que queda un extremo con -OH 3´ libre y un extremo 5´ con un grupo fosfato libre.

Estructura secundaria:

Tiene un empaquetamiento espacial pero no se altera.

Dentro de la estructura secundaria hay 3 modelos:

El modelo de la estructura secundaria del ADN en forma de doble hélice dextrógira (forma B). Las dos hebras son anti paralelas es decir si una presenta la dirección 5´->3´, la otra posee la dirección 3´->5´.

El conjunto se pliega sobre sí mismo obligado por los puentes de hidrógeno entre diferentes regiones de la molécula, hasta adoptar la conformación más estable, que es la de doble hélice. Este enrollamiento entre las 2 hebras de la doble hélice es dextrógiro es decir gira a derechas y de tipo plectonémico, como si estuvieran trenzadas.

Las secuencias de bases son complementarias, pues hay una correspondencia entre las bases de ambas cadenas .La adenina sólo puede estar frente a la timina y la guanina frente a la citosina. Así las bases púricas están enfrentadas a las bases pirimidínicas y la unión se realiza por puentes de hidrógeno en los pares A=T y tres en los pares G-C

La correspondencia entre las bases es la causa de que las dos cadenas de la doble hélice de ADN posean secuencias complementarias.

Además los pares de bases están horizontales y el eje los atraviesa por el centro.

Modelo hélice A: En este modelo los pares de bases nitrogenadas están inclinados hacia el exterior pero la hélice al igual que la del ADN B es dextrógiro

Modelo hélice z: En este modelo las cadenas de ADN no se enrollan en forma de doble hélice sino en forma de zig-zag.

ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye el material genético de los organismos. El ADN es una molécula que se encuentra en todas las células de los seres vivos y se encarga de codificar todo lo que nosotros formamos o somos, desde nuestro color del pelo hasta las proteínas que tenemos en nuestra sangre. El ADN es una molécula cargada que está asociada a proteínas y en el caso de los organismos eucariontes está encerrado dentro de un núcleo.

El ADN está presente en los indicios biológicos como sangre, semen, saliva, hueso, pelo, etc.

Es muy importante conocer las condiciones para remisión adecuada de la muestras.

El Salting- out es uno de los métodos de extracción de ADN mas utilizados por su fácil implementación, baja toxicidad de los reactivos y permite la visualización del ADN.

-Factores que afectan el rendimiento, calidad y pureza del ADN:

  • Cantidad de material de partida

  • Número de copias de las moléculas de AN

  • Cantidad de tejido.

  • Condiciones en las que se encuentra el material de inicio(fresco, congelado, fijado)

  • Contaminantes e interferentes en el material biológico

Conclusión

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN comenzaron a salir, de un color blanco precipitado por sobre el alcohol (mezcla Heterogénea). Con un alambre doblas y obtenemos y sacamos del tubo de ensayo el ADN. Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar sobre un papel de filtro.

En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy claramente. Tenemos que agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo mejor.

Si se tiene problemas con el filtro, que no está bien hecho y que no filtra bien, por lo tanto hay que hacer otro. También puede haber complicaciones con la forma de poner el alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo.

Con esto podemos saber cómo es el procedimiento del extracto del ADN, así como si estructura de una forma fácil y sencilla.

Bibliografía

http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/

http://html.rincondelvago.com/extraccion-del-adn-de-una-cebolla.html

http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/Rincon-C/Practica/PR-5.htm

http://www.joseacortes.com/practicas/extraccionADN.htm

http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la_ciencia_a_tu_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn.htm

http://www.bioapuntes.cl/laboratorio/extrac-adn.htm

http://www.slideshare.net/marcia_karina/extraccion-adn

 

 

Autor:

Arnulfo Salas Betancourt

 


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