Inmunodifusión y Análisis
Inmunoelectroforético
Introducción
En este práctico se realizaron dos técnicas,
las cuales se basan en la interacción antígeno anticuerpo.
Inmunodifusión Doble de
Ouchterlony
Por medio de la Inmunodifusión Doble de
Ouchterlony se pueden realizar análisis cuali y
cuantitativos de antígenos y anticuerpos en una
solución, mediante una inmunoprecipitación en gel
de agarosa.
Cabe destacar que existen dos tipos de
inmunodifusión, doble o simple; en la
inmunodifusión simple se mantiene fijo el antígeno
o el anticuerpo; en la inmunodifusión doble, ambos,
antigeno y anticuerpo, están libres para difundir (de
forma radial o lineal) hacia el otro y formar un
precipitado.
La técnica consiste en colocar en una placa de
petri con gel de agarosa distintas soluciones de
Ag/Ac y se las deja difundir libremente; en la región
donde los gradientes de difusión se encuentran en
proporciones de equivalencia se forma un precipitado que se
visualiza como una banda opaca en el gel.
La precipitación ocurre, debido a la
formación de complejos antígeno-anticuerpo en
una proporción justa en la cual se forma una gran matriz de
agregados (punto de equivalencia), por lo cual
precipitan dando bandas.
Diferentes preparaciones que contienen múltiples
antígenos frente a un antisuero multiespecífico
dará numerosas bandas de precipitado debido a que las
distintas interacciones entre Ag-Ac tienen distintos puntos de
equivalencia, de esta forma se pueden analizar la complejidad de
distintas mezclas
antigénicas. Este patrón de bandas se puede
clasificar de tres maneras: identidad
parcial, total o no identidad y se muestra en la
Figura 1.
Figura 1
Análisis
Inmunoelectroforético
En esta técnica se utilizan
simultáneamente tres técnicas; por un lado
separación por electroforesis, difusión y
precipitación de proteínas,
esto le confiere a la técnica una gran sensibilidad,
permitiendo el estudio de muestras complejas como
sueros o muestras de orina.
La inmunoelectroforésis se lleva a cabo sobre un
soporte sólido el cual no interfiera con la corrida de las
proteínas, estas migran en la electroforesis por su carga
neta. Se siembra la muestra a analizar en un reservorio en la
placa y en un canal paralelo a la dirección de migración
se siembra el inmunosuero especifico para el antígeno
de interés, se los deja correr y luego pueden
visualizarse las bandas de precipitación.
La especificidad y sensibilidad de las reacciones de
precipitación permiten distinguir sustancias de
movilidades electroforéticas idénticas dado que
cada antígeno reacciona separadamente con su anticuerpo
homólogo dando un arco independiente.
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