Ácidos nucleicos

2167 palabras 9 páginas
Ácidos nucleídos Obtención de DNA de Bazo
Experimento 1

Experimento 2 CARACTERIZACIÓN Y ANÁLISIS CUANTITATIVO DEL DNA

Experimento 3 CARACTERIZACIÓN Y ANÁLISIS CUANTITATIVO DEL RNA

Experimento 4 DETERMINACIÓN DEL FOSFATO TOTAL

Reactivo Tubo 1 2 3 4 5 6
Buffer de acetato 0.1M pH 4.0 mL 7 7 7 7 7 7
Reactivo molibdato al 2.5% mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solución de vitamina C al 1% reciente mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Agua destilada mL 2
Solución tipo 1 M/mL 2
Solución tipo 2.5 M/mL 2
Solución tipo 5 M/mL 2
Problema DNA 2
Problema
…ver más…
Al homogeneizar el tejido se liberan las enzimas de los lisosomas, entre ellas la DNAasa, la cual hidroliza el DNA. Se sabe que el Mg++ es indispensable para la actividad de esta enzima; si en la solución existe citrato, éste se une al Mg++ e impide la acción de la DNAasa. Otra forma de evitar la acción hidrolítica de la enzima es trabajar a temperaturas bajas (0°C a 2°C).

El siguiente paso en la purificación está basado en que las desoxirribonucleoproteínas y el DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, mientras que la mayor parte de las proteínas precipitan en estas condiciones. Si el residuo se suspende en solución de NaCl 2.6M y se centrifuga, el residuo insoluble estará formado fundamentalmente por proteínas, mientras que el DNA permanecerá en solución. Este DNA se puede precipitar selectivamente por la adición selectiva de 2 volúmenes de alcohol etílico al 95% formándose un precipitado blanco fibroso, el cual se puede recoger por rotación de un agitador de vidrio con pequeños salientes.

EXPERIMENTO 1
• La muestra de bazo se coloca en un mortero, previamente enfriado y se secciona lo más finamente posible con una tijera. Se colocan 450 mL de la solución reguladora de citrato 0.01M – NaCl 0.14M, a pH de 7.2 fría, en una licuadora cuyo vaso haya sido previamente enfriado.
• Se hace funcionar la licuadora a baja velocidad y se van añadiendo los trozos de bazo de todos los equipos,
• esperando a que

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