Actividad de beta-galactocidasa

938 palabras 4 páginas
UNIVERSIDAD POLITECNICA DEL ESTADO DE MORELOS
ENSAYO ENZIMÁTICO DE β-GALACTOSIDASA

BIOQUIMICA MICROBIANA

CATEDRATICO.: MANUEL JESUS GRANADOS BAEZA

ALUMNOS: ARAGON AROCHE CYNTHIA CARDENAS SOLANO JUAN JOSE HERRERA MENDEZ LUCIA SEQUERA GRAPPIN IVAN SANTIBAÑEZ GARCIA GUADALUPE ANISLADA

ING. BIOTECNOLOGIA GRUPO: “A” CUATRIMESTRE: 4°

1

ENSAYO ENZIMÁTICO DE β-GALACTOSIDASA
La -galactosidasa (EC 3.2.1.23) es una enzima capaz de hidrolizar -Dgalactósidos. Esta enzima hidroliza la lactosa en sus monómeros glucosa y galactosa, al escindir el enlace β 1-4 del azúcar. Para conocer la actividad que esta enzima realiza de manera práctica tomando en cuenta las propiedades que esta presenta se utiliza un sustrato cromogénico
…ver más…
La concentración de proteína purificada cromatográficamente (código: BGC) puede ser determinada de la siguiente manera:

Procedimiento: Ajustar el espectrofotómetro a 420 nm y 25°C e introducir una celda con solución para medir absorbancia de la siguiente manera:  Buffer de fosfato de sodio 0.3 M 1.0 ml  Mercaptoethanol 1.0 M 0.3 ml  ONPG 0.014 M 0.5 ml  Agua de grado reactivo 1.1 ml *Nota: Esta enzima no es estable cuando se diluye. Todas las diluciones deben hacerse tan pronto como sea posible y utilizarlas inmediatamente de su preparación. Incubar en el espectrofotómetro a 25°C de 3-5 minutos para alcanzar la temperatura de equilibrio y establecer una frecuencia blanco. Añadir 0.1 ml de enzima recién diluida y calcular A₄₂₀/min como velocidad inicial. Velocidad de reacción: Salvo algunas excepciones, la mayoría de las reacciones catalizadas por enzimas se pueden describir de manera satisfactoria por la ecuación de Michaelis-Menten:

V = velocidad de reacción [S] = concentración de sustrato = velocidad máxima Km = constante de Michaelis. 3

Cada enzima tiene características físicas con respecto a la especificidad de sustrato, velocidad de la reacción o cofactores necesarios que afectan las constantes de MichaelisMenten. La determinación de estas constantes

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