Actividad enzimatica de la piruvico transaminaza

904 palabras 4 páginas
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA PIRUVICO TRANSAMINASA

INTRODUCCIÓN
Cinética enzimática
Las enzimas son proteínas que realizan la catálisis de las reacciones químicas que se llevan a cabo en los seres vivos. Aunque las reacciones enzimáticas obedecen a los mismos principios de la cinética química, se diferencian de éstas por el hecho de que las enzimas son saturadas por los substratos.
Durante una reacción enzimática, el substrato S se une químicamente a la enzima E para formar un complejo "enzima-substrato" (ES). Luego de sufrir varias reacciones químicas, el complejo ES se rompe para dar origen al producto P, liberando a la enzima E, que puede volver a iniciar otro ciclo catalítico.

E + S \=====\ ES \=====\ E + P

Se supone que
…ver más…
Material:
1 charola para hielo
1 Centrifuga clínica
1 Mortero con pistilo
1 Embudo de vidrio
6 tubos de centrifuga
15 tubos de ensayo
1 Gradilla para tubos
1 Pipeta graduada de 10 mL
1 Pipeta Pasteur
3 Pipetas de 1 mL graduadas en 1/100
3 Pipetas graduadas de 5 mL
2 Pipetas graduadas de 10 mL
1 Vaso de precipitados de 600 mL
1 Mechero
1 Tripie con tela de asbesto

Material proporcionado por el ALUMNO (A):
Chicharros en vaina
Navaja filosa
Arena fina
Gasa

Reactivos. ✓ Solución patrón de piruvato (Acido piruvico 1 mM). ✓ Sustrato (Alanina/α-cetoglutarato 1 mM/ 1mM). ✓ Solución amortiguadora de Tris-HCl 0.1 M pH 7.5 y EDTA 4%. ✓ Solución amortiguadora de Tris-HCl 40 mM pH 7.5 y EDTA 0.25 mM. ✓ Reactivo de Color (Solución de 2,4-dinitrofenilhidrazina al 0.01% en HCl 1.0 N). ✓ Solución de Hidróxido de sodio 0.4 N.

Procedimiento.
A. Procedimiento de obtención de la enzima:
1.-Poner el mortero en la charola con hielo (baño de hielo).
2.- Pesar 10 gramos de chícharos, picarlos con una navaja sobre el mortero frío.
3.- A los trozos de chícharo, adicionar 20 mililitros de la solución amortiguadora de Tris-HCl 40 mM, una cucharadita de arena fina y macere hasta obtener una suspensión homogénea (manteniendo siempre el mortero en el baño de hielo).
4.- Filtrar la suspensión homogénea de chicharos a través de cuatro capas de gasa, y con ayuda de un embudo de vidrio recuperar el

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