Aislamiento y purificación de lisozima de huevo de gallina

1548 palabras 7 páginas
PURIFICACIÓN DE ENZIMAS: AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE LISOZIMA

ÍNDICE

1. Índice …………………………………………………… 1

2. Introducción……………………………………………….. 2

3. Materiales y métodos …………………………………. 2

4. Resultados ……………………………………………... 2-5

5. Discusión de resultados ………………………………. 5

6. Conclusiones …………………………………………... 6

7. Bibliografía ……………………………………………... 6

1.

INTRODUCCIÓN

Lisozima

Se conoce por lisozima o muramidasa ( péptidoglicano N-acetil-muramil hidrolasa EC 3.2.1.17) a los componentes de un conjunto de enzimas cuya función característica es hidrolizar los enlaces β-glicosídicos (1-4) presentes entre los residuos de N-acetilglucosamina (NAG),y N-acetilmurámico (NAM), principales
…ver más…
FIGURA 1
Cromatograma. Representación de A280 y actividad (UAL/ml) frente a nº de tubo recogido en cromatografía de intercambio.

FIGURA 2
Representación de medidas de A280 frente al tiempo de reacción (s)

Se elaboró una tabla de pipeteos y una curva de calibrado con BSA como proteína patrón según el método de Bradford(Figura 3).
Interpolando la absorbancia medida a 595 nm de cada una de las muestras con enzima se obtuvieron las siguientes concentraciones de lisozima: 13,87 mg/ml en E1, 14,01 mg/ml en E2 y 0,66 mg/ml en E3. FIGURA 3 Curva de calibrado. Representación de medidas de A595 frente a la concentración de BSA (mg/ml)

La electroforesis (Figura 4) permitió elaborar una segunda recta de calibrado (Figura 5) FIGURA 4 Electroforesis. Imagen del gel

FIGURA 5 Recta de calibrado. Representación del logaritmo de la masa molecular de las proteínas patrón frente a la distancia migrada en el gel

A partir de los resultados obtenidos y la masa molecular conocida de la lisozima, se calculó el grado de purificación de E1,E2 y E3 obteniéndose respectivamente 1, 0,8 y 3,02. Por último, todos los resultados obtenidos durante toda la práctica

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