Caracterización mecanismo beta glucosidasa

8943 palabras 36 páginas
1. INTRODUCCIÓN.

Las β-glucosidasas o β-D- glucósido hidrolasas (EC 3.2.1.21) representan un amplio grupo de enzimas pertenecientes a las glicosidasas (EC 3.2.1). En condiciones fisiológicas, las β-glucosidasas catalizan la hidrólisis entre el enlace O-β-glicosídico del extremo terminal no reductor de polisacáridos, oligosacáridos de cadena corta, disacáridos y aril o alquil-β-D-glucósidos, liberando β-D-Glucosa. En determinadas condiciones esta reacción puede invertirse por hidrólisis inversa o por transglicosilación y producir entonces la síntesis de un enlace glicosídico. [1,2]
Estas enzimas prefieren sustratos del tipo G-O-X, donde G representa un grupo glucosil y X puede ser un residuo del mismo tipo o un resto aglicona (no
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Las enzimas de las familias 1 y 3 hidrolizan sus sustratos con retención neta de la configuración del carbono anomérico, mediante un mecanismo de doble desplazamiento.
Entre los sustratos naturales de las β-glucosidasas se encuentran la celobiosa, el dhurrin, la amigdalina, el linamarin y el glucósido de Dimboa [12].

La gran versatilidad de una enzima como la β-glucosidasa hace que el interés hacia la enzima y su mecanismo catalítico a través del cual actúa sea grande.
Con el fin de caracterizar el mecanismo catalítico de la enzima es imprescindible plantear el estudio en pasos bien determinados.
Es necesario, en primer lugar, estandarizar las condiciones de ensayo de la β-glucosidasa.
Se procederá a determinar los parámetros cinéticos macroscópicos de la enzima para el sustrato p-nitrofenil-β-D-glucósido (pNPG).
Se diseñarán unos ensayos en los que se comprobará la estabilidad de la enzima frente a diferentes valores de pH y frente a diferentes Temperaturas, empleando pNPG como sustrato.
Los estudios de pH permitirán determinar el pH óptimo de actuación de la enzima así como una estimación de los valores de pKa de residuos esenciales para la catálisis enzimática.
Los estudios a diferentes Temperaturas permitirán el cálculo de la Energía de activación y observar la dependencia de la catálisis con la Temperatura.

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