Determinación De Amino Ácidos Terminales Con Grupo Alfa Amino Libre. Método De Sanger

981 palabras 4 páginas
INTRODUCCIÓN | DNP- Val | DNP- Phe | DNP- Gly | DNP- Asp | DNP- Ala | DNFB | Problema | Rf | 0.6808 | 0.5943 | 0.6721 | 0.7478 | 0.7419 | 0.4481 | 0.44060.53750.6876 | La determinación de la estructura primaria de una proteína suele denominarse secuenciación Existen varias maneras de determinar la secuencia de aminoácidos, el primero en lograr esto fue Frederik Sanger, quien diseño un método capaz de determinar la secuencia de los aminoácidos en una proteína, el cual consiste en el marcaje del amino terminal a través del uso del 1-Fluoro-2,4-Dinitrobenceno (DNFB). Este compuesto químico color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente básicas, formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también …ver más…
d) Se hace la extracción con éter para retirar el DNFB ya que este es hidrófobo se quedara en la parte etérea y esta se desechara.
e) f) Se evapora y centrifuga para compactar la proteína.
g) se le agrega HCl (6N) y se calienta en autoclave para realizar una Hidrolisis y romper los enlaces por medio de moléculas de agua.
h) Se vuelve a hacer la extracción para separa la sopa de aminoácidos del amino terminal Dinitrofenilado, este por ser hidrófobo se quedara en la parte etérea y los demás por ser polares se quedara en la fase acuosa que se desechara.
B. Cromatografía en papel de los aminoácidos Dinitrofenilados tipo y la muestra problema.
La cromatografía en papel se hará de ese tamaño para poder observar como corre la muestra con mayor detalle.
Se hace la cromatografía para saber cual es aminoácido terminal de la proteína, se debe de poner con tipos de DNP-aminoácidos y así obtener de manera cualitativa el aminoácido terminal que corre a la misma distancia mediante los Rf de cada mancha, ya que la cromatografía es una método de separación se puede hacer una comparación del Rf del problema contra los Rf de los DNP-aminoácidos.
RESULTADOS

DISCUSIÓN
Al observar nuestra cromatografía realizada, podemos apreciar

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