Determinacion de proteínas por el método de lowry y bradford

1997 palabras 8 páginas
INTRODUCCIÓN

El método de Lowry utiliza el reactivo de fenol-Folin-Ciocalteu. En este método se desarrollan dos reacciones coloridas: primero se desarrolla un color de poca intensidad con el cobre en medio alcalino; después se forma un color azul-verde con el reactivo mencionado, que contiene molibdato de sodio y tungstato de sodio en presencia de ácido fosfórico y clorhídrico, que reacciona con los aminoácidos aromáticos, fenilalanina y triptófano de la proteína. Este método permite determinar la concentración de proteína en rangos de 0.01-1 mg/mL.

En este experimento se preparará una curva de calibración utilizando hemoglobina. La curva de calibración se construye llevando a cabo la reacción de Biuret y/o Lowry con concentraciones
…ver más…
1 se obtiene:

x=0.361-0.16020.0031=64.77

Se realiza de la misma manera para los tubos restantes.

Efecto de algunas sustancias no proteínicas.

Tubo no. | Sustancia | A595 | Cantidad de proteína (µg) | Tipo de interferencia generada | 1 | Tris 1 M pH 7 | 0.363 | 65.42 | - | 2 | Glicerol 1 % | 0.315 | 49.94 | - | 3 | Detergente 1 % | 0.488 | 105.74 | + | 4 | SDS 1 % | 0.239 | 25.42 | - | 5 | TCA 5 % | 0.292 | 42.52 | - | Referencia | Tubo 3 curva tipo | 0.405 | 75 | Nula |

Para saber qué tipo de interferencia genera cada una de las sustancias empleadas se usa lo que se conoce como límite de confianza, representado mediante el símbolo µ. Se tiene la siguiente ecuación: μ=X ±tS√n

donde X = promedio grados libertad = n – 1 = 10 – 1 = 9 t = valor de tablas = 2.262 Número confiabilidad = 95 % S = desviación estándar n = número de datos

Sustituyendo:

μ=77.26±2.26211.6610=

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