Elisa y microelisa

3100 palabras 13 páginas
MÉTODO DE ELISA

El método ELISA es el elegido mayoritariamente para el análisis de micotoxinas debido a su rapidez y a la sencillez de la preparación de la muestra.
La técnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay) se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectofotométricamente. Este principio tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo ideal: es versátil, robusto, simple en su realización, emplea reactivos económicos y consigue, mediante el uso de la fase sólida, de una separación fácil entre la fracción retenida y la fracción libre.
Además se han propuesto y
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c) Elevada constante de unión para la enzima (Km baja); d) Gran estabilidad del sustrato en las condiciones del almacenamiento, y del producto formado después de parar la reacción; e) Linealidad de la función de medida en un amplio intervalo;

FUNDAMENTO
Estos anticuerpos retienen a los antígenos presentes en la muestra y su presencia es revelada posteriormente mediante la utilización de anticuerpos también específicos del antígeno conjugados con enzimas. Estas enzimas provocan un cambio de color al interaccionar con el sustrato específico. Las enzimas más utilizadas son la fosfatasa alcalina y la peroxidasa que actúan sobre el p-nitrofenil fosfato y el agua oxigenada, respectivamente. En el caso de la peroxidasa el oxígeno liberado del agua oxigenada actúa sobre otro sustrato: o-fenilendiamina, ácido 5-aminosalicílico o la 3,3’,5,5’tetrametilbencidina. De forma, que en este tipo de EIA, a mayor intensidad de color mayor cantidad de antígeno fijado al pocillo | | |

Los fundamentos son similares a

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