Extraccion de adn

2875 palabras 12 páginas
Obtención de ADN de Escherichia coli
RESUMEN
Palabras clave:
INTRODUCCION
MATERIALES Y METODOS Los materiales y el procedimiento de la práctica de laboratorio corresponde con el indicado en:
Guía de Laboratorio de Biología Celular y Bioquímica I, obtención de ADN de Escherichia coli; Universidad del Valle, Cali.
Con las modificaciones que se muestran a continuación: en lugar de utilizar 5 ml de solución salina-citrato diluida para el punto 1.2. Extracción y desproteinización del ADN se utilizaron 3 ml. en el punto 3 prueba cuantitativa del ADN extraído no se utilizó 1 ml de solución de ADN de E. coli sino 2 ml y para el punto 2 prueba cualitativa con difenilamida no se preparó el tubo 4, sino que los datos para este tubo fueron
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(Montenegro, 1999), para el correcto funcionamiento de la enzima fue necesario mantener la reacción a una temperatura de 37 °C y durante 30-40 minutos pues el efecto lítico es casi completo después de ese tiempo y la temperatura es a la cual se encuentra la enzima en su medio natural. (Castro, 2009), luego de romper la pared celular de la bacteria se procedió a agregar dodecil sulfato de sodio (SDS), un detergente usado para solubilizar en parte la membrana externa de las bacterias gram negativas como Escherichia Coli, al separar los lípidos y las proteínas que conforman la membrana celular, lo que produce la liberación del contenido celular de estas: ADN genómico y plasmídico desnaturalizados, ARN y proteínas, el calentamiento a 60°C sirve para optimizar la lisis y no afecta al ADN, ya que este es termoestable además el SDS inactiva las nucleasas, enzimas que hidrolizan las cadenas de ADN

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