FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA TECNOLOGIA MÉDICA

MULTIPLEX LIGATION-DEPENDENT PROBE AMPLIFICATION
(MLPA)

Tecnología médica,
Mención laboratorio clínico, hematología y banco de sangre.
Asignatura: Genética y Biología Molecular.
Docentes: - Alicia Colombo. - Iskra Signore.
Alumnos: - Sebastián Delgado M. - María José López L
Fecha de entrega: 22 mayo de 2012.
INTRODUCCION

MULTIPLEX LIGATION-DEPENDENT PROBE AMPLIFICATION (MLPA) en español:Multiplex ligadura-dependiente de la sonda de amplificación, es una técnica que fue fundada en 1985, aunque algunas revisiones bibliográficas sugieren que fue descrita por primera vez por Schouten y sus colegas en el año 2002 (1)(2). Así …ver más…

La técnica de MS-MLPA (methy-lation-specific MLPA) puede ser utilizada tanto para la cuantificación del número de copias genómicas como para el análisis del perfil de metilación.
MS-MLPA es una herramienta muy útil para realizar estudios epigenéticos y para el análisis de metilaciones aberrantes en muestras tumorales.

DESCRIPCION DE LA TECNICA

1-. DESNATURACION DEL ADN

Para denaturar la hebra de ADN; Se utiliza calor a 98°C por 5 minutos

Agrega la salsa y el tampón MLPA

2-. HIBRIDACION

Se incuba a 95°C por un minuto, adicionándole las 16 horas de hibridación a 60°C

3. LIGADURA

Agregue la mezcla de ligasa y se incuba 15 minutos a 54°C.

Agregue calor para inactivar la ligasa, 5minutos a 98°C.

Agregar los cebadores, dNTPs y polimerasa.
4. PCR

Inicio de la PCR.

5. ELECTROFORESIS CAPILAR

Determinar el tamaño relativo de los picos fluorescentes

Comparar los resultados de las muestras de referencia

CUADRO COMPARATIVO CON LAS PRINCIPALES VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE MLPA.
VENTAJAS

DESVENTAJAS

| | De muy alto rendimiento, resultados en 24 horas. | Más sensible a las impurezas en la muestra que el PCR | Discrimina las secuencias que difieren en un solo nucleótido | La disminución de la señal de una sonda, puede ser debido a un polimorfismo. | Solo son necesarios el termociclador y la secuencia de