Método de extracción de adn genómico en hojas de guayaba (psidum guajava), fácil, rápido y eficiente para amplificar rapd

1851 palabras 8 páginas
MÉTODO RÁPIDO Y EFICIENTE PARA EXTRACCIÓN DE ADN GENÓMICO DE GUAYABA (PSIDIUM GUAJAVA) CON CTAB MODIFICADO

Muñoz-Rodríguez P.J.

Palabras clave
Compuestos fenólicos, ADN genómico, Psidium guajava, CTAB
RESUMEN
Actualmente existen diferentes técnicas especiales para extraer ADN en suficiente cantidad y calidad de hojas de guayaba, frescas o congeladas, sin la utilización de un sistema comercial. En este trabajo se evaluaron dos protocolos diferentes que permitan extraer ADN genómico de hojas frescas o congeladas de guayaba mediante el método de CTAB modificado que resulte fácil, rápido, económico y eficiente para obtener un ADN de buena calidad y cantidad, libre de compuestos fenólicos, toxinas y contaminantes que en cierto modo
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MATERIALES Y MÉTODOS
Recolección y preservación del material vegetativo.
Las hojas de guayaba fueron recolectadas en huertas del municipio de Calvillo Aguascalientes y transportadas en hielera para mantenerlas frescas hasta su uso, después se lavaron con jabón en polvo y se secaron con sanitas antes de congelar a -4°C.
Extracción de ADN con el método rápido y efectivo.
Las modificaciones se basaron en los métodos de extracción de Padilla Ramírez et al., (2002) y Yun Jiang et al., (2003). Ambos sustentados en el método original de CTAB de Doyle y Doyle (1987).
El experimento se realizó en el Laboratorio de Biotecnología Aplicada del Instituto Tecnológico El Llano Aguascalientes ubicado en el Km 18 carretera Aguascalientes-San Luis Potosí. Para el método rápido y eficiente se pesó 150 mg de tejido y se maceró en mortero con la ayuda de nitrógeno líquido (previamente congelado). Se tomó 100 mg de tejido molido con un tubo eppendorf de 1.5 ml e inmediatamente se introdujo el tubo al el recipiente que contenía el nitrógeno líquido. Se sacó del nitrógeno y se agregó 700 µl de buffer de extracción calentado a 65 °C (100 mM TrisHCl pH 8, 50 mM EDTA pH 8, CTAB 2%, 2 M NaCl, 2% PVP40 y 2% β-mercaptoethanol). Se agitó durante 5 minutos. Se añadió un volumen (700 µl) de cloroformo-isoamílico 24:1 y se agitó por 10 minutos en vortex (las agitaciones se pueden realizar manualmente).

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