Manejo de muestras para estudios moleculares

4040 palabras 17 páginas
MANEJO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA ESTUDIOS MOLECULARES
Diagnóstico molecular:
Primer paso del diagnostico molecular comienza con la obtención de la muestra clínica adecuada. Para ello es preciso conocer los posibles agentes etiológicos de las enfermedades infecciosas y los mecanismos patógenos de los mismos.
¿Qué se quiere diagnosticar?
* Enfermedades adquiridas “infecciosas”: bacterias, virus, hongos, parásitos.
* Enfermedades genéticas
* Enfermedades multifactoriales
Tipos de estudio
BIOQUÍMICO | MOLECULAR |
Proteinas | Ác. Nucleicos |
Material recibclable | Material nuevo |
Limpieza | Esterilidad |
Baja sensibilidad | Alta sensibilidad |

Se debe evitar la contaminación cruzada entre analista y muestra
…ver más…
Medidas de seguridad para evitar contaminación cruzada:
* Guantes desechables, cambio frecuente.
* Mascaras protectoras
* Lentes de protección
* Campanas de flujo laminar
* Areas adaptativas para radioactividad
* Areas exclusivas para extracción de DNA, RNA, PCR, electroforesis, marcaje con radioactividad.
* Asignar juegos de pipetas exclusivas para RNA, DNA, PCR, electroforesis.

Variables críticas:
Muestra líquida (CO2) -20°C
Temmperatura Hielo seco

Biopsia NH2 -70°c
Nitrogeno líq.

Tiempo: depende de las condiciones de almacenamiento, procesar inmediatamente.
Disociación de la muestra celular:
Las células se encuentran atrapadas en una organización tridimensional. Existen estrategias para disociar las células viales de los tejidos.
* Fragmentación mecánica: mediante corte, troceado o triturado de la muestra original en disolución amortiguadora de ph.
* Disgragación química: rotura de la matriz extracelular y de las uniones intercelulares. Ej. En presencia de detergentes (SDS).
* Digestión enzimática: las proteínas de la matriz se digieren con proteasas como colagenasa, proteinasa K, pepsina o tripsina.

EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS
La extracción de ácidos nucleicos es el primer paso para la mayoría de los estudios en biología molecular y de…

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