Practica # 11 CINETICA ENZIMATICA 1: EFECTO DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

1740 palabras 7 páginas
Prerrequisitos

1. Describir el mecanismo de acción de las enzimas en las reacciones químicas.
-Una enzima, por sí misma, no puede llevar a cabo una reacción, su función es modificar la velocidad de la reacción, entendiéndose como tal la cantidad de producto formado por unidad de tiempo. Tal variación se debe a la disminución de la energía de activación Ea; en una reacción química, la Ea es la energía necesaria para convertir los reactivos en formas moleculares inestables denominadas especies en estado de transición, que poseen mayor energía libre que los reactivos y los productos. Acontinuacion se describe como las enzimas llevan a cabo esta reaccion :
• Orienta a los sustratos: parte de la energía de activación se utiliza para que
…ver más…
De esta forma, la medida de v0 se realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento. Además, en estas condiciones no es necesario considerar la reacción inversa, ya que la cantidad de producto formada es tan pequeña que la reacción inversa apenas ocurre. De esta forma se simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad. [2]


Objetivo:

El alumno observará el comportamiento de la actividad enzimática de acuerdo a los parámetros de concentración tanto del sustrato determinando los valores de:
a) Vmax ( velocidad máxima de la reacción ).
b) 1/2 Vmax
c) Km ( constante de Michaelis ).
d) [S] óptima ( concentración óptima de sustrato ).
Material
1.- 8 Tubos de ensaye
2.- 1 Gradilla
3.- 3 Pipetas de 1.0 ml
4.- 2 Pipetas de 5.0 ml
5.- 1 Baño de agua a 37°C
6.- 1 Baño de agua en ebullición
Metodología

La invertasa es una enzima hidrolítica que actúa sobre sacarosa ( un disacárido ) liberando glucosa y fructosa. La actividad de la enzima se detiene al añadir una solución alcalina y el poder reductor de los productos se mide haciéndolos reaccionar con el reactivo de 3,5-dinitrosalicilato.
Tubo 1 2 3 4 5 6
Invertasa 1 1 1 1 1 1
Amortiguador 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Sacarosa 0.02 M 1 0 0 0 0 0
Sacarosa 0.03 M 0 1 0 0 0 0
Sacarosa 0.05M 0 0 1 0 0 0
Sacarosa 0.10 M 0 0 0 1 0 0
Sacarosa 0.30 M 0 0 0 0 1 0
H2O 0 0…

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