Practica N°3 De Bioquimica

1298 palabras 6 páginas
OBJETIVOS
1.- Identificar la formación de urea (Ureogenesis) en el hígado de una rata
2.-Cuantificar la cantidad de nitrógeno inorgánico presente en la muestra
3.- Evidenciar la acción de la arginasa con la obtención de urea y ornitina
4.- Evidenciar la acción de la ureasa.
5.-Conocer los métodos de identificación de nitrógeno: Berthelot y Nesslerizacion.

INTRODUCCION
CICLO DE LA UREA:El ciclo de la urea comienza en el interior de las mitocondrias de los hepatocitos.

Reacciones:
1. El primer grupo amino que ingresa al ciclo proviene del amoníaco libre intramitocondrial. El amoníaco producido en las mitocondrias, se utiliza junto con el bicarbonato (producto de la respiración celular), para producir
…ver más…
En individuos con deficiencias congénitas de enzimas del ciclo, distintas a la arginasa, el sustrato correspondiente se acumula, lo que provoca un aumento de la velocidad de la reacción deficiente, por lo que la velocidad del ciclo se mantiene baja. No obstante se producen acumulaciones de los sustratos precedentes, hasta el amoniaco, lo que causa finalmente una hiperamonemia. El cerebro es particularmente sensible a las [ ] elevadas de amonio.

METODOLOGIA

EXPERIMENTO N°1:
En dos tubo de ensayo agregar los siguientes reactivos conforme al cuadro: TUBO 1 TUBO2
Arginina 0,1 M 0,5 0,5
Buffer fosfato 0,2 M PH7 0,5 0,5
Homogenizado de hígado 0,5 0,5 ureasa 0,5 -

-Mezclar a Baño Maria a 37 °C por 45 minutos
-Agregar HgClO 1% a todos los tubos excepto al N°1. Centrifugar a 3000 RPM por 5 minutos.
-Separar los sobrenadantes.

-Luego con los sobrenadantes obtenidos ,realizar los siguientes pasos según el cuadro descrito a continuación:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5
Sobrenadante 1 1 - - -
(NH4)2SO4 100μM - - 1 - -
(NH4)2SO4 100mM - - - 1 -
H2O d - - - - 1
Rvo. Fenol 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Rvo. De Hipoclorito 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

RESULTADO
EXPERIMENTO N°1:
Tubo N°1 y N°2 : solo presentan una coloración rosasea ya que solo

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