Revisión: Síntesis Enzimática de Galacto-oligosacáridos a partir de residuos de la industria láctea: Desafíos tecnológicos y oportunidades (página 2)

Dentro de este marco los prebióticos que cumplen
dicho requerimiento son: Los fructo- oligosacáridos, los
galacto-oligosacáridos y la lactulosa [1].

Tradicionalmente los oligosacáridos son definidos
como polímeros de monosacáridos con un grado de
polimerización entre 2 y 10; cuentan además con
características prebióticas debido a que no son
cariogénicos, no digeribles, bajo dulzor y brindan una
baja energía calórica; estimulando el crecimiento y
desarrollo de la microflora gastrointestinal también
llamada probiótica [6, 7].

Los carbohidratos no digeribles (NDOs) pueden ser
obtenidos de diversas fuentes o procesos industriales
[8]:

Fuentes naturales: ej. Fructanos (inulina),
Oligosacáridos de la Soya como Rafinosa y
Estequiosa por extracción directa del concentrado de
Soya.

Hidrólisis de polisacáridos, que puede ser
química o enzimática (e.j. Xilo-
oligosacáridos e
Isomalto-oligosacáridos).

Síntesis química y enzimática, esta
última por transglicosilación y/o hidrólisis
inversa usando hidrolasas y/o glicosiltrasferasas a partir de
sustratos como disacáridos (e.j. lactosacarosa y
galacto-oligosacáridos).

3.
Galacto-oligosacaridos (GOS):

El establecimiento de bífidobacterias como
microflora presente en el intestino de los bebes ha sido
atribuido a la presencia de oligosacáridos que contienen
galactosa, los que han sido encontrados en la leche materna
[2].

Los GOS son clasificados como carbohidratos no
digeribles (NDOs) los cuales resisten las enzimas digestivas
gastrointestinales; son además solubles, actuando de esta
manera como fibra dietaria soluble (SDF). Varios estudios
demuestran que estos oligosacáridos pueden aliviar
problemas de constipación, mejorar la absorción de
minerales tales como calcio y magnesio y retardar el desarrollo
de cáncer de colon en modelos probados de ratas. Estos
pueden ser aislados también en forma natural del grano de
soya [9].

Luego del descubrimiento de su actividad
bifidogénica, los GOS han sido clasificados como
ingredientes alimenticios prebióticos, tomando su
producción industrial un mayor interés comercial.
Los GOS son principalmente formados por síntesis
enzimática a partir de lactosa como sustrato utilizando
ß-galactosidasa (E.C.3.2.1.23) para producir varios
oligómeros de longitudes de cadena diferentes [10]. Por lo
general tienen un grado de polimerización entre 2 y 10 con
una molécula de glucosa terminal.

Los GOS han sido reconocidos como un aditivo alimentario
GRAS (Generally Recognized as Safe) debido a que son componentes
de la leche materna y yogures tradicionales y son producidos de
la lactosa ingerida por las bacterias residentes en el intestino.
Según estudios realizados no se ha demostrado ninguna
toxicidad ni mutagenicidad. El único efecto adverso
conocido hasta ahora es la diarrea transitoria que ocurre cuando
se consume un exceso de GOS; la cantidad de GOS que no induce
este tipo de diarrea es de aproximadamente 0,3-0,4 g/kg de peso
corporal, o cerca de 20g por persona
[11].

En la actualidad existen productos comerciales en forma
de sólido o líquido que contienen GOS en su
formulación, siendo la gran mayoría producidos en
Japón y algunos en Holanda, a partir de lactosa como
sustrato [2, 4]:

Snow Brand F-plus, alimento para bebes,
producido por Snow Brand Milk Products. Fiber & Oligo,
refresco producido por Wakodo.

Be-feel, Oligomate 55 y TOS-100; derivados
lácteos producidos por Yakult Honsha. C-1OO y Seni &
Oligo, bebida producida por Takeda.

Umer, producto lácteo fermentado producido por
Coberco/Netherlands.

Elix´or, Vivinal, TOS-Syrup, sólidos y
bebidas producidas por Borculo Whey Products, Netherlands, Domo
Ingredients/Friesland.

Estos productos tienen alta pureza en cuanto a su
contenido, siendo los diversos tipos de GOS presentes un promedio
entre el 55 al 60%, lactosa 20%, glucosa 20% y galactosa entre el
1 al 5%. Dentro de este contenido en GOS predomina en mayor
cantidad los 4´- galactosil-lactosa (GOS-3) incluyendo
algunos disacáridos no lactosados como alolactosa y
galactobiosa; estos productos son relativamente dulces, teniendo
un equivalente al 35% del dulzor de la sacarosa. Las soluciones
de Elix´or y Oligomate 55 son ligeramente más
viscosas que un jarabe de fructosa (HFCS) y tienen una
presión osmótica similar a la solución de
sacarosa a igual concentración [11].

En 1992, Yakult Honsha Co. (Tokio, Japón) produjo
6500 ton/año de GOS usando ß- galactosidasa de
A. oryzae para formulaciones en alimento para bebes. De
igual forma, Snow Brand Milk Company (Tokio, Japón)
adicionó GOS-3 a su formulación destinada a la
alimentación para niños.

Respecto a sus aplicaciones en alimentos, estas
sustancias son totalmente permitidas en formulaciones infantiles
y bebidas para deportistas en diferentes países.
Además son empleados en productos lácteos, bebidas
fermentadas, panadería y repostería entre otros. A
diferencia de los fructo-oligosacaridos, inulina y otros
oligosacaridos, los GOS son estables a pH ácido (pH entre
2.5 a 8) y temperaturas de procesamiento de pasteurización
y horneo [12].

Como ya se mencionó, son los países del
extremo oriente los que vienen produciendo y consumiendo una
variedad considerable de oligosacáridos seguido
cercanamente por Europa y los EEUU; según un estudio
realizado por Nakakuki [13], se observó que en
Japón la demanda de estos para el año 2002 se
incrementó a 70000 toneladas anuales, siendo la Trehalosa
y los Isomalto-oligosacáridos los de mayor consumo, 20000
y 15000 ton/año respectivamente;
encontrándose para los galacto-oligosacáridos un
consumo de 8500 ton/año.

Los GOS pueden ser producidos de la lactosa encontrada
en la leche, siendo ésta la materia prima principal para
la producción de este producto comercial, que es por lo
general obtenida del suero [14].

El suero es formado en gran cantidad como un subproducto
de la industria láctea, y además debido al aumento
de la producción de queso hay una necesidad de
métodos más eficientes y prácticos para
reducir esta sustancia catalogada como desecho. Como una
alternativa se podría utilizar éste en la
producción de GOS.

Como ya se mencionó, los GOS son producidos por
ß-galactosidasas, glicosidasas que a condiciones apropiadas
de reacción tienen actividades de
transgalactosilación, la cual origina la formación
de cadenas 4´ o 6´-galactosil-lactosa, entre cadenas
más largas de oligosacáridos y algunos
disacáridos transgalactosilados [15].

La cantidad y la naturaleza de los GOS dependerán
del origen de la enzima, concentración y naturaleza del
sustrato, grado de conversión de sustrato y las
condiciones de reacción [16, 17].

Los enlaces encontrados son ß (1,2), ß (1,3)
y ß (1,4) bifurcados de los residuos de glucosa, mientras
los enlaces ß (1,4) y ß (1,6) están presentes
en el fragmento galactano. Esta variabilidad en acoplamientos
glicosídicos puede ser uno de los motivos por los cuales,
los GOS poseen una gran resistencia a la digestión
ácida [6]. La cantidad de GOS producida de lactosa
también ha mostrado depender de las concentraciones
iniciales de ésta en la mezcla de reacción, y no
sobre la concentración de ß – galactosidasa. Los
productos obtenidos pueden ser purificados en carbón
activado, filtrados y concentrados antes de la adición a
productos alimenticios.

El Bif. adolescentis, una de las cepas
bacterianas predominantes en el colon puede degradar y
metabolizar GOS-3 y de un mayor peso molecular, contrariamente a
ello el Bif. infantis y L. acidophilus pueden
sólo utilizar los GOS-3 [6, 11]. Un modo de aumentar la
especificidad de los GOS producidos puede ser utilizando
ß-GOS sintetizados por bifidobacterias, esto podría
aumentar el número de los organismos específicos.
Rabiu et al. [18] demostraron que los perfiles de
oligosacáridos de cinco especies de bifidobacterias
(Bif. angulatum, Bif. infantis, Bif.
pseudolongum, Bif. angulatum, Bif.
bifidum), a excepción de Bif. adolescentis,
mostraron índices de crecimiento aumentados sobre GOS por
su propia ß–galactosidasa, presentando mayor afinidad
por GOS de un grado de polimerización menor (2 a
3).

De Vuyst et al. [19] demostraron que L. amylovorus,
L. casei, L. fermentum, L. johnsonii, L. gasseri, L. paracasei y
L. plantarum pueden metabolizar GOS-3 al igual que
lactulosa.

4.
Síntesis Enzimática de GOS:

En cuanto al origen de la enzima se sabe que la
ß-galactosidasa producirá diferentes tamaños
o tipos de GOS, la enzima de B. circulans
producirá GOS-2 y GOS-3 y en menor cantidad GOS-4 y GOS-5;
de Kluyveromyces spp. mayor GOS-2 y algunos
GOS-3, mientras que de A. oryzae mayor
cantidad de GOS-3 y una pequeña cantidad de GOS-4, siendo
esta última muy utilizada en alimentos y de bajo costo
[20, 21]. Se sabe además que existen muchas otras fuentes
enzimáticas las cuales no han sido aprobadas aún
para uso alimenticio, son muy costosas o no existen en cantidades
suficientes [15, 22, 23].

El tipo de control que toma mayor importancia durante la
reacción, es el cinético, debido a las
características propias de la enzima, la cual
tendrá mucha mayor afinidad por un grupo hidroxilo de un
azúcar no protegido (lactosa) el que se unirá al
donador glicósilo formado previamente (complejo
galactosil-enzima) (reacción de quimioselectividad);
aunque la selectividad no es absoluta ni predecible, la
síntesis controlada cinéticamente sería
más exitosa que la controlada termodinámicamente,
ya que en esta última, para efectos de cambiar la
dirección de la reacción hacia la síntesis
se deberá recurrir al uso de solventes apolares donde los
sustratos y productos de la reacción son escasamente
solubles [24].

En cuanto a la temperatura de reacción, la
cantidad de enzima a utilizar y el valor de pH de
reacción, serán parámetros que no
mejorarán la cantidad de GOS que se podrá producir
en la reacción, pero serán factores que
influenciaran en el aumento de la velocidad de
reacción; por consiguiente se producirá un tipo de
GOS a una conversión de lactosa definida en el menor
tiempo posible. Se debe tener en cuenta además que para
una conversión de lactosa entre el 40 y 60% se
llegaría a obtener la máxima cantidad posible de
GOS debido a que luego de ello, la reacción de
transgalactosilación disminuiría comenzando la
hidrólisis de los oligosacáridos formados [25,
26].

Se ha demostrado que la cantidad de GOS generado
estará relacionado directamente con la cantidad de lactosa
presente al inicio de la reacción de
transgalactosilación, se ha visto que concentraciones
iguales o superiores al 20% mejorarían la
producción de GOS, la que sería entre el 30 y 40%,
correspondiendo al porcentaje de GOS producido a partir de una
cantidad de lactosa inicial [3, 27].

Algunas técnicas han sido desarrolladas para la
inmovilización de ß-galactosidasa lo que incluye
adsorción, unión covalente, entrampamiento y
encapsulación; en general se han utilizado soportes tales
como quitosano, celulosa, soportes de agarosa, agregados
entrecruzados, resinas de intercambio iónico (membranas de
adsorción), o del tipo fibroso como fibras de
algodón, que conducen a la formación de diferentes
tipos de GOS.

En la industria alimentaria el proceso más
ampliamente utilizado para la síntesis enzimática
de GOS es el discontinuo, el cual utiliza la enzima inmovilizada
en suspensión, en condiciones estériles y de
fácil control de proceso. En cuanto a procesos continuos
se pueden obtener productos altamente puros pero existe la
desventaja en cuanto a la dificultad en la limpieza del reactor
debido al uso de concentraciones altas de sustrato
[28].

Se ha observado que el tipo de inmovilización
influirá directamente con el comportamiento de esta enzima
en particular; en un estudio desarrollado por Gaur et al. [29]
observaron que la ß-galactosidasa de A. oryzae
bajo la forma de agregado entrecruzado tendrá marcada
tendencia a la hidrólisis que a la
transgalactosilación, no observándose esto con la
inmovilización covalente en quitosano.

5. Suero y
Aplicaciones:

El suero viene a ser un subproducto de la
elaboración del queso y el procesamiento de la
caseína en la industria láctea. Existen dos tipos;
el suero dulce (pH 6 a 7) resultado de la fabricación de
los quesos maduros tales como el Cheddar, y el suero ácido
(pH 3 a 4) resultado de la producción de quesos frescos
tales como el cottage [30].

La composición del suero varia considerablemente
dependiendo del origen de la leche y el proceso de manufactura
que lo envuelve, de ello dependerá su uso. Pero en
general, el suero esta compuesto principalmente por agua (cerca
del 93%), lactosa (4,9 a 5,1%), proteína soluble (0,9 a 1
%), minerales (0,5 a 0,7%), lípidos (0,1 a 0,3%) y
ácido láctico (0 a 0,2%). Hacer 1 kg de queso,
generará aproximadamente 9 kg de suero, la
producción mundial de queso genera más de 145 x
10 6 ton de suero líquido al
año del cual 6 x 10 6 ton es
lactosa [31].

Las industrias lácteas han visto como
solución en el transporte y manejo del suero evaporar la
gran cantidad de agua presente y/o por un proceso de
ultrafiltración (UF) separar la mayor cantidad de
sólidos posibles, en este caso el retentato o la
proteína de suero concentrado (WPC) del permeado, el cual
es un subproducto que contiene una pequeña cantidad de
proteínas pero es rico en lactosa, minerales y vitaminas;
haciéndolo potencialmente más manejable para
posteriores procesos. En la tabla 1 se muestra la
composición del suero dulce y ácido y los
permeados.

Tabla 1. Composición del suero y los sueros
permeados. Adaptado de Yang y Silva, [32].

La lactosa es el único disacárido presente
y es recuperada directamente de la leche; investigaciones
sugieren que la lactosa promovería el crecimiento de las
bacterias benéficas del colon. Entre los minerales
presentes se encuentran, el sodio, potasio, calcio, magnesio e
iones cloruro, citrato y fosfato. Los lípidos presentes
incluyen glicéridos, fosfolípidos y
lipoproteínas.

El suero ácido contiene una alta
concentración de minerales, mayor que el suero dulce
debido a la disolución del fosfato de calcio coloidal
componente de las miscelas de caseína durante la
acidificación y/o el cultivo de leche con bacterias
ácido lácticas.

En cuanto al contenido de proteínas, estas tienen
un beneficio nutricional por lo que pueden ser usados como
ingredientes alimenticios; la alfa-lactoalbúmina segunda
proteína del suero más abundante presente tiene un
alto contenido de triptófano, precursor de la vitamina
niacina, la cual funciona como coenzima en la síntesis de
lípidos y la utilización de carbohidratos;
además funciona mejorando la tonicidad de la piel y la
función digestiva [31].

En general las proteínas del suero son
recuperadas por ultrafiltración y la lactosa es recuperada
por procesos de concentración posteriores como
evaporación, cristalización, separación,
refinación, sequedad y molienda. En algunas industrias
lecheras se utiliza la osmosis inversa para preconcentrar el
suero permeado luego de la ultrafiltración a un porcentaje
de sólidos de 12 a 15%. No toda la lactosa presente en el
suero permeado puede ser económicamente recuperado por
cristalización; cerca del 20 al 40% de la lactosa original
esta contenida conjuntamente con las sales en el licor madre, que
generalmente no tiene ningún empleo industrial debido a su
alto contenido en sal. Tal como se muestra en la figura 1, en un
proceso alternativo debe separarse estos minerales de la lactosa
del suero permeado por nanofiltración y por intercambio
iónico antes de la dispersión a sequedad; de esta
manera se recuperaría una cantidad de lactosa de
mayor pureza, la que podría ser utilizada en
la producción de derivados lactosados y además se
generaría muy poco efluente en este proceso
[32].

Mientras que el porcentaje de lactosa
remanente rica en sales será utilizada en forma
hidrolizada en fermentación y producción de otras
sustancias de interés.

Fig. 1. Utilización del
suero (WPC: proteína concentrada de suero). Adaptado de
Audic et al. [31].

En cuanto a la composición de la proteína
concentrada de suero (WPC), ésta presentará
aproximadamente del 75 al 78 % de proteína, una humedad
del 4,6%, lípidos 6,6%, cenizas 3,3% y carbohidratos 7,2%
[33].

En la actualidad se sabe de diversos procesos enfocados
al aprovechamiento del suero, ya que como residuo de la industria
láctea se convierte en un problema contaminante para el
medio ambiente, siendo el principal responsable de la elevada
demanda bioquímica de oxígeno (DBO) (entre 35 a 45
mg/L de suero) como efluente o permeado de la
ultrafiltración [34].

Como ya se mencionó la lactosa es el único
disacárido presente en el suero; este es formado por la
unión ß (1,4) glucosa-galactosa
(4-O-ß-D-galactopiranosil-ß-D– glucopiranosa),
con una solubilidad en agua del 25% p/v a 25ºC; se encuentra
en la leche (4,8 – 5,2%). El suero contiene más de
la mitad de los sólidos originales de la leche,
representando la lactosa el 70-80 % de los sólidos
totales.

La aplicación de la lactosa en alimentos es
limitada, ya que existe un gran número de personas que
muestran intolerancia, produciendo en algunos casos
deshidratación, pobre absorción del
calcio, diarreas, flatulencia. Su baja solubilidad y la tendencia
a cristalizar en agua a bajas temperaturas la convierten en un
problema como parte de la formulación de algunos derivados
lácteos tales como leche condensada, leche evaporada,
helados, etc [35].

Viendo ello, se buscó hidrolizar la lactosa
utilizando la enzima ß-galactosidasa y de esta manera
extender el mercado de venta de productos lácteos que en
una primera instancia se vieron limitadas.

En la actualidad existen cuatro fuentes
enzimáticas disponibles en el mercado; las provenientes de
hongos filamentosos (A. oryzae y A. niger), y
de levaduras (Kluyveromyces marxianus var lactis y
Kluyveromyces marxianus var marxianus), teniendo las
fungales un pH óptimo de 2,5 a 4,5 y de 6,0 a 7,0 para las
levaduras. Las enzimas fungales son particularmente adecuadas
para ser usadas en suero ácido, pero presentan
inhibición por galactosa mucho mayor que las de levadura
que son adecuadas para hidrolizar sueros dulces; por ello no
pueden alcanzar el grado de hidrólisis obtenido con estas
últimas; e.j. la ß-galactosidasa de Aspergillus
oryzae posee un valor de pH óptimo ácido (4,5)
y una temperatura óptima de reacción entre 50º
y 55ºC, siendo apta en la hidrólisis de suero
ácido y permeado de suero [34].

Paralelamente a ello existe un gran interés en
darle un uso no alimenticio, siendo entonces utilizada como
excipiente en la formulación de tabletas en la industria
farmacéutica, como sustrato para la fermentación de
varios productos tales como metano, etanol, ácidos
orgánicos, exopolisacáridos como goma xantana,
entre otros. Se sabe además que puede ser utilizada como
sustrato en la síntesis de derivados alimenticios como
lactitol, lactulosa, lactosacarosa y galactooligosacáridos
(GOS), estos últimos con propiedades prebióticas,
lo que sería su aplicación más novedosa y la
que esta teniendo en los últimos años mayor
interés [31].

En la tabla 2 se observa el potencial que tienen algunos
productos derivados del suero permeado a partir de 50000 kg el
cual contiene 5% de lactosa:

Tabla 2. Comparación de varios productos
derivados del suero permeado. Adaptado de Yang y Silva
[32].

Es interesante ver como luego de un proceso de
recuperación de lactosa a partir del permeado de suero,
esta podría ser vendida en $ 0,44 el kilo, pero si esta
lactosa es aún procesada por un tratamiento posterior
podría obtenerse derivados lactosados y ser vendidos entre
$ 2,2 y $ 17,6 el kilo.

Dichos productos pueden ser producidos en mayor cantidad
si se utiliza un permeado de suero concentrado, luego que
éste haya pasado por un proceso de evaporación,
eliminándose una cantidad de agua considerable y de esta
manera exista una cantidad de sólidos totales entre un
20-25%, teniendo en cuenta que procesos agresivos podrían
afectar la estabilidad de la lactosa presente [36].

Respecto a los derivados lactosados mencionados
anteriormente; en la figura 2 se muestran aquellos de gran
interés, mencionándose a continuación
algunas características propias de cada uno:

Lactulosa, es un isómero de la lactosa en el cual
el aldehido de glucosa es convertido a una cetona (fructosa);
ésta no esta presente en la leche pero si en el suero. El
jarabe de lactulosa es usado ampliamente por la industria
farmacéutica en Japón, Estados Unidos y algunos
otros países. Tiene propiedades prebióticas
valoradas y su producción anual va en aumento cada
año.

Lactosacarosa, es un trisacárido producido
utilizando lactosa como sustrato y sacarosa por una
reacción de transfructosilación de una
ß-fructofuranosidasa.

Glicosilsacarosa, es un trisacárido producido de
disacáridos de maltosa y sacarosa por una reacción
de transglicosilación catalizada por una ciclodextrin
glucanotransferasa.

GOS, son oligosacáridos formados durante la
hidrólisis de lactosa por una reacción de
transgalactosilación en la cual la enzima transfiere la
galactosa del medio hacia un grupo hidroxilo aceptor el cual
puede ser galactosa o lactosa [37, 38].

Fig. 2. Esquema de producción de distintos
oligosacáridos a partir de lactosa extraída de
suero y/o leche.

Adaptado de Sako et al. [11].

A partir de lo revisado, se sabe que muchas de las
empresas productoras de GOS utilizan directamente el suero en un
proceso de refinación para luego ser tratadas en un
proceso discontinuo con la enzima ß-galactosidasa y por
posteriores pasos de decoloración,
desmineralización, filtración y evaporación
obtener un producto concentrado de GOS que puede ser procesado en
forma de jarabe o secado en forma de polvo. En la figura 3 se
observa un proceso de manufactura llevado a cabo por
Borculo

Whey Products para la producción de una
formulación llamada Elix´or, con un contenido en
galactooligosacáridos entre el 55 y 60 %, y cantidades
pequeñas de lactosa, glucosa y galactosa. En dicho proceso
se utilizó lactosa como sustrato a partir de suero y
ß-galactosidasa de Bacillus circulans ATCC
4516.

Fig. 3. Proceso de manufactura de
GOS a partir de suero de leche.

6.
Conclusiones:

Según lo revisado, existe suficiente referencia
bibliográfica que avala las propiedades beneficiosas de
los galacto-oligosacáridos en la salud de los
consumidores, por ello el interés en su estudio, los
cuales podrán ser utilizados en alimentos y compuestos
farmacéuticos lo que iría en aumento en los
próximos años.

En mundo globalizado, el ser humano vive constantemente
activo y expuesto a un desgaste físico diario, por ello
dado el poco tiempo que se tiene para alimentarse y reponer la
energía busca consumir productos agradables y saludables
que tengan un bajo aporte calórico, fáciles de
obtener, sin contraindicaciones y aptos para cualquier edad,
haciéndose el consumo de prebióticos una
alternativa aceptada en países desarrollados y poco a poco
en aquellos en vías de desarrollo.

La reacción de transgalactosilación ha
seguir para la síntesis de GOS se lleva a cabo a altas
concentraciones de sustrato lo cual favorecería un control
cinético y se dejaría de lado el uso de solventes
orgánicos, los cuales no serían adecuados para el
medio ambiente.

El suero como un subproducto de la industria
láctea, podría convertirse en un problema
contaminante dada su alta producción y en muchos casos su
poco direccionamiento, pero conociendo las distintas formas de
aprovechar este compuesto, sería necesario preocuparse por
mejorar aquellos procesos que producirían la diversa gama
de productos lactosados con valor agregado mencionados en esta
revisión, especialmente la producción de
galacto-oligosacáridos por sus características
prebióticas comentadas.

Los avances en la tecnología buscarán
mejorar procesos de producción en el downstream ya sea en
los sistemas de filtración y recuperación de
lactosa con un alto grado de pureza; y en establecer
sistemas continuos de producción de GOS por membranas que
separen los oligosacáridos formados del medio que
aún será rico en lactosa, el cual podría ser
ingresado nuevamente al reactor de síntesis. Paralelamente
a ello los avances en ingeniería genética
mejorarán algunas características de las enzimas en
cuanto a su regio y estéreo especificidad en la
síntesis de oligosacáridos a gran escala; que
puedan sintetizar y no hidrolizar (glicosintasas).

7.
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Autor:

Leopoldo M. Huerta

Departamento de Biocatálisis,
Escuela de Ingeniería Bioquímica, Pontificia
Universidad Católica de Valparaíso,
Chile.